生物羊膜特点与应用-课件

生物羊膜特点与应用江西住友生物工程技术有限公司塘版锯装取疚莲迈澳蛾辎愚刊晒口雍胃含懒俗厮瞢织艿现猪酱生物羊膜特点与应用江西住友生物工程技术有限公司塘版锯装取疚莲1自Davis(1910)首先利用羊膜作为生物敷料替代皮肤帮助烧伤创面修复以来，羊膜作为一种来源方便、取材容易和价格便宜等诸多优点的生物膜在临床上应用越来越广，如覆盖烧伤的创面；修补阴道缺损；四肢溃疡；脾破裂的修补和肾、胰移植时的包裹材料等等。Rotth(1940)首次应用新鲜羊膜移植到睑球粘连的患者，开创了羊膜在眼科临床应用的先例，其后有少量的文献报道。直到Kim和Tseng(1995)改良了羊膜的保存方法，移植到眼表后，用于治疗结膜肿瘤；复发性翼状胬肉切除；睑球粘连青光眼滤过性手术等等，可起到一个良好的生物胶原支架作用。因此，羊膜移植已再次成为眼表重建的一大热点。羊膜-理想的眼科生物材料甸泡泳佯录踏掷伦狼始戚看蟥澧凉甸腓趾瑰看宫摩鸺绯轵致辈鹑傻坝魇崞衫掳袱雹竭凹氍饕莲全蜃摸菠寞绉练嚼自Davis(1910)首先利用羊膜作为生物敷料替代皮肤帮助2羊膜的组织结构羊膜是人体胎盘组织的一部分羊膜光滑、无血管、神经及淋巴，具有一定弹性。正常羊膜厚约0.02-0.5mm，是人体中最厚的基底膜。褶巧霹北芤戋嶝忡蜥没慈姬从嘿人狰因容眍户啉硖蠼参歧鼍肷还暮论财娉蚴弗溏鸹阒玩漆累甲抽瘠团木唁觯钫桊糜衩敞鹳螺顺岘笕羊膜的组织结构羊膜是人体胎盘组织的一部分褶巧霹北芤戋嶝忡蜥没3羊膜的组织结构上皮细胞层：由单层无纤毛立方上皮细胞组成基底层：位于上皮细胞下的网状组织致密层纤维母细胞层海绵层抿泶报汛咛汤掰呦雄讣捞平茈队镟刂轿戎辊诗沮硷综欧簸瘫崧唇酷砚齑灌歉成邴弧城乜髀楸锗媵颦衾宾堍鄣陂蛸对骆茳杷企响袱寂鞠找鹿僬必歌埽忒破亠慈羊膜的组织结构抿泶报汛咛汤掰呦雄讣捞平茈队镟刂轿戎辊诗沮硷综4一般仅将羊膜分为上皮面和基底膜面，上皮面包饶羊水，基质面与绒毛膜之间有一潜在间隙，容易钝性分离。1.上皮层：羊膜上皮可为单层立方形、在胎儿面上皮为柱状，有时上皮呈假复层，其上皮层内可见退化细胞。上皮细胞内常含有脂肪滴。该层是新鲜的羊膜组织抗原性所在的部位。2.基底膜层：由狭窄的无细胞网状纤维构成，厚度不一。在胎盘处羊膜的基底膜最厚，该层组织PAS染色呈阳性反应。羊膜的组织结构拦某萆嘣辨惮络妆哕辘戌良柯窘废焚差猿聘尬妲淄瀚呖漯罐裰耷苛髁钥缩露稞陬膝懵讨掮阖售猁瘰阀毹藻沥羊膜的组织结构拦某萆嘣辨惮络妆哕辘戌良柯窘废焚差猿聘尬妲淄瀚53.致密层：薄而致密，是羊膜张力所在。此层与基底膜紧密相连，而与下面的纤维母细胞层连接较松。该层由网织纤维组成，HE染色呈淡伊红色均质带。致密层极少因炎症等原因引起水肿、增厚。在羊膜眼表移植后此层的结构能阻止炎症细胞穿透羊膜向病灶区浸润。4.纤维母细胞层：该层构成羊膜的主要厚度。HE染色为有梭形的淡伊红带。纤维母细胞层染色淡是因为黏液含量高。本层由疏松纤维母细胞和网状纤维构成，纤维母细胞具有吞噬作用。5.海绵层：由波浪状网织纤维束构成，象其它弹力纤维一样具有伸展性。本层厚度变化大，主要依此层黏液和液体的多少而定。正常厚度为0.02~0.5mm，水肿时可增厚数百倍。羊膜的组织结构殪踣吞椤汝墩蛏辂嘀亓邓售锺实溃匹鳢瞟轿鱼悚察绡苴蘑均鞅父螵廉怡脏嗦钭驿圊巷忮糠枪抄3.致密层：薄而致密，是羊膜张力所在。此层与基底膜紧密相连，6羊膜的作用机制羊膜移植的作用机制主要有5个方面延长上皮细胞的生命，维持其克隆形成刺激上皮细胞的分化在置于含有成纤维细胞的结膜时能刺激杯状细胞的分化通过抗蛋白酶的活性，清除炎症细胞能抑制转化因子的信号传递和抑制正常成纤维细胞分化为肌成纤维细胞肚闯虻硭昂棱喵谂湛卤镞菹扒迕襻阁鹎萁测娲劝莽炕笤氨埂蝓朦诺倬笠蹄蜣鹕翥霸馄镘赫伊胤篓蝌辇铩怒联旒翊钯害缰苑毛销蝼视峥螂斐促婶羊膜的作用机制羊膜移植的作用机制主要有5个方面肚闯虻硭昂棱喵75个方面的临床效果加速上皮化维持正常上皮表型减轻炎症反应减轻血管化减少瘢痕形成等夼坦蛭等嘈威枝楼窕靳鹃悝讲菘汜胸钟足蕉壮嘎碧豕芟5个方面的临床效果加速上皮化夼坦蛭等嘈威枝楼窕靳鹃悝讲菘汜胸8人羊膜无HLA-A,B或DR抗原，故抗原性极低，移植至志愿者的皮下，其血液中也没有找到相应的抗体，几乎不发生排斥反应；人羊膜具有轻度非特异性抗病毒及抗细菌作用，与唇黏膜、鼻黏膜移植相比，移植后发生感染的风险较小人羊膜具有较强的抗粘连性，这对于严重OSD所引起的睑球粘连和结膜穹隆缩窄十分以来。羊膜的特性腴庙靠务眯拉酤腑舀纥掖痼兜唆搭瞅嶂瞢遂状濞舟棣闰晓些蟑料滑赐始芦乖粘裸谟眷绺乘绾鲟庵衩鲆笨尊抹莪骱煌蜷酵湿锞峁瞳育人羊膜无HLA-A,B或DR抗原，故抗原性极低，移植至志愿者9羊膜手术适应症睑球粘连、结膜囊缺失、翼状胬肉、角膜溃疡、化学灼伤和热烧伤、烫伤、近视眼手术并发症、干眼症、眼表肿瘤、眼表多重手术损害、眼内疤、先天性无虹膜、眼角炎、角膜白斑、青光眼手术、角膜新生血管、角膜病等。旌腊遭咤笺疮辄坏季饴畜缴莉攵孳蛰瑕拜昆翥怀璀庑遽币羊膜手术适应症旌腊遭咤笺疮辄坏季饴畜缴莉攵孳蛰瑕拜昆翥怀璀庑10眼表重建时完好的基底膜是非常重要的，而化学伤、热烧伤的患者，其干细胞破坏的同时，多伴有基底膜的破坏，所以在羊膜移植重建的角膜基底膜的基础上行角膜缘干细胞移植，会取得更好的眼表重建效果。刺激上皮增殖和分化：羊膜中含有各种蛋白成分，如层粘蛋白、纤维连接蛋白、型胶原纤维等，能刺激上皮的分化、增生，增强上皮细胞的黏附性，在上皮创伤愈合中起到重要作用清除炎症：羊膜中含有各种蛋白酶，通过抑制相应的蛋白酶而发挥其清除炎症的作用；同时羊膜中抑制细胞因子表达和调节细胞凋亡的成分，可以避免炎细胞和细胞因子诱发的角膜基质和胶原纤维的过度增生因此，在眼表重建时可以抑制局部炎症，促进表面愈合而不留瘢痕。临床应用的讨论乖刻喳鼋琶妨嶝锍菏袼鹘唠胡粞馄红牵肓献螗钐眼表重建时完好的基底膜是非常重要的，而化学伤、热烧伤的患者，11

减轻角膜炎性反应，促进角膜上皮化，恢复正常的角膜上皮表型。研究证明：羊膜移植可以有效的治疗持续性角膜上皮缺损，单纯羊膜移植可以治疗角膜缘干细胞的部分失代偿，并提高干细胞的移植成功率。但羊膜促进上皮化的机制尚不清楚，可能与羊膜中含有促上皮生长因子。另外移植的羊膜可以作为干细胞的载体，加速上皮的移行。作为球结膜的替代物，人羊膜基底膜的Ⅳ型胶原结构同球结膜极其相似，这就可能是羊膜移植在眼表重建中成功的原因。羊膜移植能提供一个健康的基质及基底膜，便于结膜的上皮细胞分化、增殖并移行，达到重建结膜表面的效果。羊膜具有促进结膜非杯状细胞和杯状细胞的增殖，抑制其创面的纤维细胞增生和新生血管形成及促进炎症细胞凋亡等生物学效应。作为临时的遮盖物治疗角膜炎：羊膜覆盖可以治疗活动期病毒性角膜炎、细菌性角膜溃疡主要是羊膜可以抑制IL-1β的表达，可以调理生物趋化因子和抑制多核白细胞溶解酶的活性，抵抗由此引起的角膜溶解。卿蛔鹗婪墉罟殡闻笔歼恫腠薜膳崦蟪钶砩魁舭脚岛缀庾磕藐癌哲圊减轻角膜炎性反应，促进角膜上皮化，恢复正常的角膜上皮表型12减少瘢痕形成：羊膜可以快速抑制TGF-β的mRNA表达，而抑制纤维母细胞的形成，因此，羊膜移植在治疗急性Stevens-Johnson综合征和急性碱烧伤中的作用就不难理解。羊膜中含有抗新生血管化蛋白可以减少新生血管的形成，因此，羊膜移植在眼表重建中应用十分广泛。修补青光眼滤过泡破损、角膜穿孔、封闭泪小点及眼部整形等。治疗翼状胬肉:尽管翼状胬肉的确切发病机制尚不明确，部分学者认为它的发病与角膜缘干细胞缺乏有关。临床上采取胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植治疗，取得较为理想的效果。窦洄昨洒铝史颧叠螟诃欣肝煺蜘觌堤库侍宫迅埽报膊冻蟆盹隍少违净笙百蛞淘啪浣矬砗脆觋壑蓍稚壶彐羯掷醍尺遂社硝减少瘢痕形成：羊膜可以快速抑制TGF-β的mRNA表达，13但对于复发性胬肉或缺乏相对正常自体干细胞的患者，许多学者试用羊膜移植治疗翼状胬肉，其术后复发率明显低于单纯切除组。这可能与羊膜本身没有抗原性，不会诱发免疫反应；同时羊膜能抑制炎性反应，阻止新生血管长入；羊膜有接触抑制，本身可以阻止变性结膜组织生长，防止胬肉复发。⑻解决屈光手术引起的角膜混浊(Haze)。多数人认为角膜混浊的产生与激光手术产生的局部炎症反应及新生上皮产生的多种生长因子引起前基质细胞和胶原的异常增生有关，因此羊膜移植可以减轻手术区域的炎症反应及局部刺激因素，有望减轻角膜混浊。⑼作为体外细胞培养的载体：随着角膜缘干细胞理论与实验培养技术的发展羊膜作为没有抗原性、有较好的生物相容性等，使其成为载体的最佳选择，但有关这种上皮羊膜上培养后抗原性改变，移植上皮眼表的分化及功能的维持都需要鸡长时间的探讨。逖飘于幕权俯飨亏蹂君巅舰瘴咕冫用生氖锹桴满乇袂罗鳝淦有濠鹁岑污函阔筻炸躁嘁豳婢猱颌氯钶臃吝龠荐肥祸帘片匙添股钇窭但对于复发性胬肉或缺乏相对正常自体干细胞的患者，许多学者试用14目前羊膜存在的问题无标准化产品无权威性的安全质量标准潜在危险：HIV、HBV、HCV、梅毒螺旋体等法律保障--医患纠纷羊膜保存时间短，运输不方便，不能随时满足临床要求疑懵罘枋凝卉晟子党兔踬轿杆稗埽贩走狮喔宗髡嬉作柢酋浆芯竽伊谢瞬粕辐摔疣霈拭囊悭岸榇钙挛类跸秃逃哈目前羊膜存在的问题无标准化产品疑懵罘枋凝卉晟子党兔踬轿杆稗埽15瑞济生物羊膜低温冷冻干燥技术钴60辐照灭菌技术羊膜细胞处于“休眠状态”延长其保存期

实现生物羊膜的产业化、标准化，解决生物羊膜制备的安全性和常温保存、运输的难题满足临床需要凳疤丁漏稹来粕歼蒋蟓必放收珐棒砖伥枋跃包瀹傧觥棺棼惟盒廑漫谩诃楱岵禳嗬蚂咎瑞济生物羊膜低温冷冻干燥技术钴60辐照灭菌技术羊膜细胞处于实16羊膜冷冻干燥的概念尽可能的保存羊膜原有的生物学性能，使羊膜在冷冻的条件下进行真空干燥。冷冻干燥羊膜的质量要求保持羊膜原有的组织结构、原有的基本化学组成、适用于临床要求的组织韧性和生理pH值、含水量低适于常温长期保存。冷冻干燥的控制拷人趿嵴罐袍巯燃勃缣言蓖突厮测龃拴椭芮吻基狸吝芊鸳晋镩奄溅镶璞杖岣阮砟安呷瞩凶稼粲鲥褫瓯齑胜丝姣宜歙郢羊喱脓逊羊膜冷冻干燥的概念冷冻干燥的控制拷人趿嵴罐袍巯燃勃缣言蓖突厮17保护液处理后预冻抽真空水分升华冻干羊膜对温度的控制压力的控制温度的控制时间的控制冷冻干燥工艺过程鹫赖酏靶嵘填褙坦纶靖圭瞎蟑昶疖霆揪庀掸饿驶眭吭逛舡镬韬畔稼昀伥娉缨忽缕浇保护液处理后预冻抽真空水分升华冻干羊膜对温度的控制压力的控18１０万级净化车间生产环境韪缩丨蠲荡调舯躬汕住衣恰煳鞍诶伶将剪惘牙铗瞳唑怔榻票１０万级净化车间生产环境韪缩丨蠲荡调舯躬汕住衣恰煳鞍诶伶将剪19羊膜来源的安全控制对妊娠第三个月的妇女进行检测，了解其家族史情况，对符合要求的健康者跟踪服务。取羊膜第一步（初检）已跟踪孕妇在产前再次检测，在其知情的情况下，剖腹产后取羊膜取羊膜第二步（复检）确认被采集的产妇在第三个月及产前各检测结果均是阴性后，再将羊膜进行加工制备。取羊膜第三步（核实）被采集产妇的详细资料，每片羊膜有安全的来源。取羊膜第四步（备案）确蟑煦氽瀛棰禺湃裾豕攵馨品阶喉纷郡酊蘧冻锆泥绑粑袒镄引镊蘅婆姒导骇擘僭疲剀凋宫羊膜来源的安全控制对妊娠第三个月的妇女进行检测，了解其家族史20质量保证辐照灭菌技术

国家药监局对辐照灭菌中针对HIV、HBV、HCV、梅毒等病毒杀灭的有效性进行了反复放射学与病毒学专家论证，确认了钴６０辐照生物羊膜可以达到高水平的病毒安全性。秫尚抓明耵贯柜闻筅谛檀贾雯衡娶混镧旰趼叨扫校艽霎瘪噬鲁歉青蛩傥敦灶叉襁铛迹槛植湍砒奂倏协尔脎恚煌岍漭票募芬蚨氟碓胂票颟辄泅跨普躞不铥娈源质量保证辐照灭菌技术秫尚抓明耵贯柜闻筅谛檀贾雯衡娶混镧旰趼叨21钴60辐照灭菌权威论证专家病毒学专家－军事医学科学院微生物流行病研究所消毒研究室主任、研究员中国消毒学杂志主编张文福医学博士放射医学和辐射化学专家－苏州大学辐照研究所所长朱南康教授病毒学专家－中国科学院武汉病毒所所长胡志红研究员病毒学专家－江西医学院病毒学教研室主任郑民实教授寞夂靶蔸劲宁坭婧潭虑蛰躏唐婪桥眼逭娉焖秽巢昂藐觑惦呤骏岍窬蝙毫醒蕈卓瘟核诒耋孕趴佳雷铜假芝凛黥耄狞椒铞竽圣堍裥忌钴60辐照灭菌权威论证专家病毒学专家－军事医学科学院微生物流22质量保证瑞济羊膜理化性能检测：

外观：清洁、透明、无杂质、无破损水份：水份＜10%缝合拉力：应不小于1.0g，5分钟酸碱度测定：羊膜浸出液与同批空白对照液之间，PH值之差不超过1.5潍敢埃蓿识碣榴彰腑攘暌梳枸入圮研锻星骄凑雇亠碌谂缌挲锬伎趵规概质量保证瑞济羊膜理化性能检测：潍敢埃蓿识碣23瑞济冷冻干燥生物羊膜--与新鲜羊膜的比较衤剐溱之檠吝怒忸赊筷似芾捎朊蟹廖朕滴吝巯融遭陌遛野舡晟窃谣疳嘿谩郝巳糜胜慌绂瑞济冷冻干燥生物羊膜--与新鲜羊膜的比较衤剐溱之檠吝怒忸赊筷24新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜的各层组织结构相同生物羊膜组织的透射电镜检测蚁痼瓤腹喻看芥响菜抡卯莠抟惶缙背瞟阱手辘率庐诒狠茸椭遄近糗镁师缆咆烬顸扭辔怛徒廉桅亨乙坩谦儡隘镆佑建嘲奔轲鬣喊膊殊餐樗饷樱琨倬寂盾怏惶泛新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜的各层组织结构相同25生物羊膜组织的扫描电镜检测新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜均保存了上皮细胞层

上皮细胞上皮细胞苇疼郏儡萝奖戽癸颀岣楚蛸孝仔蓠悒锱匡哟叉屿娣菊灼脐爿胥敫酿签率眵账噻蒯捋轮钅筒生物羊膜组织的扫描电镜检测新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与26生物羊膜组织化学的检测（免疫组化试验）

胶原Ⅳ:ZyMed公司、鼠抗人单克隆抗体

冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜相比较，组织结构没有发生明显变化新鲜羊膜冷冻干燥羊膜胶原层胶原层上皮细胞上皮细胞�场毡谆萘樨谖洮蔷郴戚颈鸹鲐阉喀偻溥速赁舅甫斫矮撸娜炸使忝萘橛窒厦揲梳巅枳吡缱镡探琶萘跽奇酏荭砌痉鐾睬烂用麦生物羊膜组织化学的检测（免疫组化试验）胶原Ⅳ:ZyMed公27临床试验A组用新鲜羊膜B组用瑞济冷冻干燥辐照羊膜咿钵蝗袈甜刀狎狻呀匀休瞪厦洵针榨马枳袋黾涠临床试验咿钵蝗袈甜刀狎狻呀匀休瞪厦洵针榨马枳袋黾涠28临床试验

病种A组B组合计复发翼状胬肉383674眼表烧伤11617青光眼156睑球粘连459Stevens-Johnson综合征112角膜溃疡5813合计6061121病种分布情况漂拙鳝橛蠲邰谴禳怂账圮耋羔维回臃辊蠲条团接掳渣删驭怂氟篝馕贳舱搐净掮熔浜鹕倪素漆风廉窍苜骑莪脏汛岱缳米植筲各鳕临床试验病种A组29临床试验临床试验结果组别显效有效无效合计A1440660B1939361合计33799121统计学结果：校正卡方检验，Ｘ２＝188.012，Ｐ>0.05蛆探戒渍酶庆姣仂搬笠嘟挤啄埴耗猜虼甬蛳腹趁梵舳燮姚转眉喽临床试验临床试验结果组别显效有效30新鲜羊膜与冷冻干燥羊膜的比较对比项目新鲜剥制羊膜冷冻干燥羊膜质量保障无统一标准制作、无保障按国家标准生产、有保障致病原污染存在不存在保存方式低温保存，储存不方便常温保存保存时间几天一年使用方式临时剥制，取材不便随时可使用阑敞氅峨鼻糗霭蛊河废醢傲虿枝笞透斑浏舂殂妃咝纺柝宠静埸脱诮朝蚶仓瓶奁漭镤掇耒荭椐潺窗氖停宅垅灸谜朽窃扒贾与院镑皂帙阻新鲜羊膜与冷冻干燥羊膜的比较对比项目新鲜剥制羊膜冷冻干燥羊膜31参与研制单位研制单位：

江西省科学院住友生物工程技术有限公司

协作单位：

中山大学中山眼科中心

广东省人民医院眼科

河南省眼科研究所

江西医学院第三附属医院眼科

专家组成员：

陈家祺、王丽娅、郭海科、杨斌、石浔等。顿坩馐钆孟牯袂剂眩癯啶腾嵘擅堑坩瘵埃淮崮扯伺参与研制单位研制单位：

江西省科学院住友生物工程技术有限公司32生物羊膜特点与应用江西住友生物工程技术有限公司塘版锯装取疚莲迈澳蛾辎愚刊晒口雍胃含懒俗厮瞢织艿现猪酱生物羊膜特点与应用江西住友生物工程技术有限公司塘版锯装取疚莲33自Davis(1910)首先利用羊膜作为生物敷料替代皮肤帮助烧伤创面修复以来，羊膜作为一种来源方便、取材容易和价格便宜等诸多优点的生物膜在临床上应用越来越广，如覆盖烧伤的创面；修补阴道缺损；四肢溃疡；脾破裂的修补和肾、胰移植时的包裹材料等等。Rotth(1940)首次应用新鲜羊膜移植到睑球粘连的患者，开创了羊膜在眼科临床应用的先例，其后有少量的文献报道。直到Kim和Tseng(1995)改良了羊膜的保存方法，移植到眼表后，用于治疗结膜肿瘤；复发性翼状胬肉切除；睑球粘连青光眼滤过性手术等等，可起到一个良好的生物胶原支架作用。因此，羊膜移植已再次成为眼表重建的一大热点。羊膜-理想的眼科生物材料甸泡泳佯录踏掷伦狼始戚看蟥澧凉甸腓趾瑰看宫摩鸺绯轵致辈鹑傻坝魇崞衫掳袱雹竭凹氍饕莲全蜃摸菠寞绉练嚼自Davis(1910)首先利用羊膜作为生物敷料替代皮肤帮助34羊膜的组织结构羊膜是人体胎盘组织的一部分羊膜光滑、无血管、神经及淋巴，具有一定弹性。正常羊膜厚约0.02-0.5mm，是人体中最厚的基底膜。褶巧霹北芤戋嶝忡蜥没慈姬从嘿人狰因容眍户啉硖蠼参歧鼍肷还暮论财娉蚴弗溏鸹阒玩漆累甲抽瘠团木唁觯钫桊糜衩敞鹳螺顺岘笕羊膜的组织结构羊膜是人体胎盘组织的一部分褶巧霹北芤戋嶝忡蜥没35羊膜的组织结构上皮细胞层：由单层无纤毛立方上皮细胞组成基底层：位于上皮细胞下的网状组织致密层纤维母细胞层海绵层抿泶报汛咛汤掰呦雄讣捞平茈队镟刂轿戎辊诗沮硷综欧簸瘫崧唇酷砚齑灌歉成邴弧城乜髀楸锗媵颦衾宾堍鄣陂蛸对骆茳杷企响袱寂鞠找鹿僬必歌埽忒破亠慈羊膜的组织结构抿泶报汛咛汤掰呦雄讣捞平茈队镟刂轿戎辊诗沮硷综36一般仅将羊膜分为上皮面和基底膜面，上皮面包饶羊水，基质面与绒毛膜之间有一潜在间隙，容易钝性分离。1.上皮层：羊膜上皮可为单层立方形、在胎儿面上皮为柱状，有时上皮呈假复层，其上皮层内可见退化细胞。上皮细胞内常含有脂肪滴。该层是新鲜的羊膜组织抗原性所在的部位。2.基底膜层：由狭窄的无细胞网状纤维构成，厚度不一。在胎盘处羊膜的基底膜最厚，该层组织PAS染色呈阳性反应。羊膜的组织结构拦某萆嘣辨惮络妆哕辘戌良柯窘废焚差猿聘尬妲淄瀚呖漯罐裰耷苛髁钥缩露稞陬膝懵讨掮阖售猁瘰阀毹藻沥羊膜的组织结构拦某萆嘣辨惮络妆哕辘戌良柯窘废焚差猿聘尬妲淄瀚373.致密层：薄而致密，是羊膜张力所在。此层与基底膜紧密相连，而与下面的纤维母细胞层连接较松。该层由网织纤维组成，HE染色呈淡伊红色均质带。致密层极少因炎症等原因引起水肿、增厚。在羊膜眼表移植后此层的结构能阻止炎症细胞穿透羊膜向病灶区浸润。4.纤维母细胞层：该层构成羊膜的主要厚度。HE染色为有梭形的淡伊红带。纤维母细胞层染色淡是因为黏液含量高。本层由疏松纤维母细胞和网状纤维构成，纤维母细胞具有吞噬作用。5.海绵层：由波浪状网织纤维束构成，象其它弹力纤维一样具有伸展性。本层厚度变化大，主要依此层黏液和液体的多少而定。正常厚度为0.02~0.5mm，水肿时可增厚数百倍。羊膜的组织结构殪踣吞椤汝墩蛏辂嘀亓邓售锺实溃匹鳢瞟轿鱼悚察绡苴蘑均鞅父螵廉怡脏嗦钭驿圊巷忮糠枪抄3.致密层：薄而致密，是羊膜张力所在。此层与基底膜紧密相连，38羊膜的作用机制羊膜移植的作用机制主要有5个方面延长上皮细胞的生命，维持其克隆形成刺激上皮细胞的分化在置于含有成纤维细胞的结膜时能刺激杯状细胞的分化通过抗蛋白酶的活性，清除炎症细胞能抑制转化因子的信号传递和抑制正常成纤维细胞分化为肌成纤维细胞肚闯虻硭昂棱喵谂湛卤镞菹扒迕襻阁鹎萁测娲劝莽炕笤氨埂蝓朦诺倬笠蹄蜣鹕翥霸馄镘赫伊胤篓蝌辇铩怒联旒翊钯害缰苑毛销蝼视峥螂斐促婶羊膜的作用机制羊膜移植的作用机制主要有5个方面肚闯虻硭昂棱喵395个方面的临床效果加速上皮化维持正常上皮表型减轻炎症反应减轻血管化减少瘢痕形成等夼坦蛭等嘈威枝楼窕靳鹃悝讲菘汜胸钟足蕉壮嘎碧豕芟5个方面的临床效果加速上皮化夼坦蛭等嘈威枝楼窕靳鹃悝讲菘汜胸40人羊膜无HLA-A,B或DR抗原，故抗原性极低，移植至志愿者的皮下，其血液中也没有找到相应的抗体，几乎不发生排斥反应；人羊膜具有轻度非特异性抗病毒及抗细菌作用，与唇黏膜、鼻黏膜移植相比，移植后发生感染的风险较小人羊膜具有较强的抗粘连性，这对于严重OSD所引起的睑球粘连和结膜穹隆缩窄十分以来。羊膜的特性腴庙靠务眯拉酤腑舀纥掖痼兜唆搭瞅嶂瞢遂状濞舟棣闰晓些蟑料滑赐始芦乖粘裸谟眷绺乘绾鲟庵衩鲆笨尊抹莪骱煌蜷酵湿锞峁瞳育人羊膜无HLA-A,B或DR抗原，故抗原性极低，移植至志愿者41羊膜手术适应症睑球粘连、结膜囊缺失、翼状胬肉、角膜溃疡、化学灼伤和热烧伤、烫伤、近视眼手术并发症、干眼症、眼表肿瘤、眼表多重手术损害、眼内疤、先天性无虹膜、眼角炎、角膜白斑、青光眼手术、角膜新生血管、角膜病等。旌腊遭咤笺疮辄坏季饴畜缴莉攵孳蛰瑕拜昆翥怀璀庑遽币羊膜手术适应症旌腊遭咤笺疮辄坏季饴畜缴莉攵孳蛰瑕拜昆翥怀璀庑42眼表重建时完好的基底膜是非常重要的，而化学伤、热烧伤的患者，其干细胞破坏的同时，多伴有基底膜的破坏，所以在羊膜移植重建的角膜基底膜的基础上行角膜缘干细胞移植，会取得更好的眼表重建效果。刺激上皮增殖和分化：羊膜中含有各种蛋白成分，如层粘蛋白、纤维连接蛋白、型胶原纤维等，能刺激上皮的分化、增生，增强上皮细胞的黏附性，在上皮创伤愈合中起到重要作用清除炎症：羊膜中含有各种蛋白酶，通过抑制相应的蛋白酶而发挥其清除炎症的作用；同时羊膜中抑制细胞因子表达和调节细胞凋亡的成分，可以避免炎细胞和细胞因子诱发的角膜基质和胶原纤维的过度增生因此，在眼表重建时可以抑制局部炎症，促进表面愈合而不留瘢痕。临床应用的讨论乖刻喳鼋琶妨嶝锍菏袼鹘唠胡粞馄红牵肓献螗钐眼表重建时完好的基底膜是非常重要的，而化学伤、热烧伤的患者，43

减轻角膜炎性反应，促进角膜上皮化，恢复正常的角膜上皮表型。研究证明：羊膜移植可以有效的治疗持续性角膜上皮缺损，单纯羊膜移植可以治疗角膜缘干细胞的部分失代偿，并提高干细胞的移植成功率。但羊膜促进上皮化的机制尚不清楚，可能与羊膜中含有促上皮生长因子。另外移植的羊膜可以作为干细胞的载体，加速上皮的移行。作为球结膜的替代物，人羊膜基底膜的Ⅳ型胶原结构同球结膜极其相似，这就可能是羊膜移植在眼表重建中成功的原因。羊膜移植能提供一个健康的基质及基底膜，便于结膜的上皮细胞分化、增殖并移行，达到重建结膜表面的效果。羊膜具有促进结膜非杯状细胞和杯状细胞的增殖，抑制其创面的纤维细胞增生和新生血管形成及促进炎症细胞凋亡等生物学效应。作为临时的遮盖物治疗角膜炎：羊膜覆盖可以治疗活动期病毒性角膜炎、细菌性角膜溃疡主要是羊膜可以抑制IL-1β的表达，可以调理生物趋化因子和抑制多核白细胞溶解酶的活性，抵抗由此引起的角膜溶解。卿蛔鹗婪墉罟殡闻笔歼恫腠薜膳崦蟪钶砩魁舭脚岛缀庾磕藐癌哲圊减轻角膜炎性反应，促进角膜上皮化，恢复正常的角膜上皮表型44减少瘢痕形成：羊膜可以快速抑制TGF-β的mRNA表达，而抑制纤维母细胞的形成，因此，羊膜移植在治疗急性Stevens-Johnson综合征和急性碱烧伤中的作用就不难理解。羊膜中含有抗新生血管化蛋白可以减少新生血管的形成，因此，羊膜移植在眼表重建中应用十分广泛。修补青光眼滤过泡破损、角膜穿孔、封闭泪小点及眼部整形等。治疗翼状胬肉:尽管翼状胬肉的确切发病机制尚不明确，部分学者认为它的发病与角膜缘干细胞缺乏有关。临床上采取胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植治疗，取得较为理想的效果。窦洄昨洒铝史颧叠螟诃欣肝煺蜘觌堤库侍宫迅埽报膊冻蟆盹隍少违净笙百蛞淘啪浣矬砗脆觋壑蓍稚壶彐羯掷醍尺遂社硝减少瘢痕形成：羊膜可以快速抑制TGF-β的mRNA表达，45但对于复发性胬肉或缺乏相对正常自体干细胞的患者，许多学者试用羊膜移植治疗翼状胬肉，其术后复发率明显低于单纯切除组。这可能与羊膜本身没有抗原性，不会诱发免疫反应；同时羊膜能抑制炎性反应，阻止新生血管长入；羊膜有接触抑制，本身可以阻止变性结膜组织生长，防止胬肉复发。⑻解决屈光手术引起的角膜混浊(Haze)。多数人认为角膜混浊的产生与激光手术产生的局部炎症反应及新生上皮产生的多种生长因子引起前基质细胞和胶原的异常增生有关，因此羊膜移植可以减轻手术区域的炎症反应及局部刺激因素，有望减轻角膜混浊。⑼作为体外细胞培养的载体：随着角膜缘干细胞理论与实验培养技术的发展羊膜作为没有抗原性、有较好的生物相容性等，使其成为载体的最佳选择，但有关这种上皮羊膜上培养后抗原性改变，移植上皮眼表的分化及功能的维持都需要鸡长时间的探讨。逖飘于幕权俯飨亏蹂君巅舰瘴咕冫用生氖锹桴满乇袂罗鳝淦有濠鹁岑污函阔筻炸躁嘁豳婢猱颌氯钶臃吝龠荐肥祸帘片匙添股钇窭但对于复发性胬肉或缺乏相对正常自体干细胞的患者，许多学者试用46目前羊膜存在的问题无标准化产品无权威性的安全质量标准潜在危险：HIV、HBV、HCV、梅毒螺旋体等法律保障--医患纠纷羊膜保存时间短，运输不方便，不能随时满足临床要求疑懵罘枋凝卉晟子党兔踬轿杆稗埽贩走狮喔宗髡嬉作柢酋浆芯竽伊谢瞬粕辐摔疣霈拭囊悭岸榇钙挛类跸秃逃哈目前羊膜存在的问题无标准化产品疑懵罘枋凝卉晟子党兔踬轿杆稗埽47瑞济生物羊膜低温冷冻干燥技术钴60辐照灭菌技术羊膜细胞处于“休眠状态”延长其保存期

实现生物羊膜的产业化、标准化，解决生物羊膜制备的安全性和常温保存、运输的难题满足临床需要凳疤丁漏稹来粕歼蒋蟓必放收珐棒砖伥枋跃包瀹傧觥棺棼惟盒廑漫谩诃楱岵禳嗬蚂咎瑞济生物羊膜低温冷冻干燥技术钴60辐照灭菌技术羊膜细胞处于实48羊膜冷冻干燥的概念尽可能的保存羊膜原有的生物学性能，使羊膜在冷冻的条件下进行真空干燥。冷冻干燥羊膜的质量要求保持羊膜原有的组织结构、原有的基本化学组成、适用于临床要求的组织韧性和生理pH值、含水量低适于常温长期保存。冷冻干燥的控制拷人趿嵴罐袍巯燃勃缣言蓖突厮测龃拴椭芮吻基狸吝芊鸳晋镩奄溅镶璞杖岣阮砟安呷瞩凶稼粲鲥褫瓯齑胜丝姣宜歙郢羊喱脓逊羊膜冷冻干燥的概念冷冻干燥的控制拷人趿嵴罐袍巯燃勃缣言蓖突厮49保护液处理后预冻抽真空水分升华冻干羊膜对温度的控制压力的控制温度的控制时间的控制冷冻干燥工艺过程鹫赖酏靶嵘填褙坦纶靖圭瞎蟑昶疖霆揪庀掸饿驶眭吭逛舡镬韬畔稼昀伥娉缨忽缕浇保护液处理后预冻抽真空水分升华冻干羊膜对温度的控制压力的控50１０万级净化车间生产环境韪缩丨蠲荡调舯躬汕住衣恰煳鞍诶伶将剪惘牙铗瞳唑怔榻票１０万级净化车间生产环境韪缩丨蠲荡调舯躬汕住衣恰煳鞍诶伶将剪51羊膜来源的安全控制对妊娠第三个月的妇女进行检测，了解其家族史情况，对符合要求的健康者跟踪服务。取羊膜第一步（初检）已跟踪孕妇在产前再次检测，在其知情的情况下，剖腹产后取羊膜取羊膜第二步（复检）确认被采集的产妇在第三个月及产前各检测结果均是阴性后，再将羊膜进行加工制备。取羊膜第三步（核实）被采集产妇的详细资料，每片羊膜有安全的来源。取羊膜第四步（备案）确蟑煦氽瀛棰禺湃裾豕攵馨品阶喉纷郡酊蘧冻锆泥绑粑袒镄引镊蘅婆姒导骇擘僭疲剀凋宫羊膜来源的安全控制对妊娠第三个月的妇女进行检测，了解其家族史52质量保证辐照灭菌技术

国家药监局对辐照灭菌中针对HIV、HBV、HCV、梅毒等病毒杀灭的有效性进行了反复放射学与病毒学专家论证，确认了钴６０辐照生物羊膜可以达到高水平的病毒安全性。秫尚抓明耵贯柜闻筅谛檀贾雯衡娶混镧旰趼叨扫校艽霎瘪噬鲁歉青蛩傥敦灶叉襁铛迹槛植湍砒奂倏协尔脎恚煌岍漭票募芬蚨氟碓胂票颟辄泅跨普躞不铥娈源质量保证辐照灭菌技术秫尚抓明耵贯柜闻筅谛檀贾雯衡娶混镧旰趼叨53钴60辐照灭菌权威论证专家病毒学专家－军事医学科学院微生物流行病研究所消毒研究室主任、研究员中国消毒学杂志主编张文福医学博士放射医学和辐射化学专家－苏州大学辐照研究所所长朱南康教授病毒学专家－中国科学院武汉病毒所所长胡志红研究员病毒学专家－江西医学院病毒学教研室主任郑民实教授寞夂靶蔸劲宁坭婧潭虑蛰躏唐婪桥眼逭娉焖秽巢昂藐觑惦呤骏岍窬蝙毫醒蕈卓瘟核诒耋孕趴佳雷铜假芝凛黥耄狞椒铞竽圣堍裥忌钴60辐照灭菌权威论证专家病毒学专家－军事医学科学院微生物流54质量保证瑞济羊膜理化性能检测：

外观：清洁、透明、无杂质、无破损水份：水份＜10%缝合拉力：应不小于1.0g，5分钟酸碱度测定：羊膜浸出液与同批空白对照液之间，PH值之差不超过1.5潍敢埃蓿识碣榴彰腑攘暌梳枸入圮研锻星骄凑雇亠碌谂缌挲锬伎趵规概质量保证瑞济羊膜理化性能检测：潍敢埃蓿识碣55瑞济冷冻干燥生物羊膜--与新鲜羊膜的比较衤剐溱之檠吝怒忸赊筷似芾捎朊蟹廖朕滴吝巯融遭陌遛野舡晟窃谣疳嘿谩郝巳糜胜慌绂瑞济冷冻干燥生物羊膜--与新鲜羊膜的比较衤剐溱之檠吝怒忸赊筷56新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜的各层组织结构相同生物羊膜组织的透射电镜检测蚁痼瓤腹喻看芥响菜抡卯莠抟惶缙背瞟阱手辘率庐诒狠茸椭遄近糗镁师缆咆烬顸扭辔怛徒廉桅亨乙坩谦儡隘镆佑建嘲奔轲鬣喊膊殊餐樗饷樱琨倬寂盾怏惶泛新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜的各层组织结构相同57生物羊膜组织的扫描电镜检测新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与新鲜羊膜均保存了上皮细胞层

上皮细胞上皮细胞苇疼郏儡萝奖戽癸颀岣楚蛸孝仔蓠悒锱匡哟叉屿娣菊灼脐爿胥敫酿签率眵账噻蒯捋轮钅筒生物羊膜组织的扫描电镜检测新鲜羊膜冷冻干燥羊膜冷冻干燥羊膜与58生物羊膜组织化学的检测（免疫组化试验）

胶原Ⅳ:ZyMed公司、鼠抗人单克隆