2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体4

2.2.2动物细胞融合

与单克隆抗体

植物体细胞杂交的意义：打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。一、动物细胞融合有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。

两个细胞正在融合

受精作用1.概念：2.结果：3.原理：4.诱导方式指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程（细胞杂交）。形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞细胞膜的流动性物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒动物细胞融合为什么灭活的病毒能作为诱导剂？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合不灭活的病毒能作为诱导剂吗？不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。细胞A细胞B杂交细胞灭活的病毒物理法化学法仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）细胞核病毒颗粒细胞核用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的(三)动物细胞融合的应用1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电激）化学（聚乙二醇）诱导方法胰蛋白酶纤维素酶、果胶酶使用的酶细胞膜的流动性细胞膜的流动性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体

什么是抗体？

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。（一）获得抗体的传统方法1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。2、缺点：产量低，纯度低，特异性差。B淋巴细胞与抗体的关系：

１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体（浆细胞产生抗体）。

２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。

３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。单克隆抗体2、怎样才能获得单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B淋巴细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？技术原理1）单个B淋巴细胞产生单一抗体（但不能无限增殖）2）肿瘤细胞能无限增殖（但不能分泌单一抗体）3）细胞融合技术杂交瘤细胞（既可以产生特异性抗体

又可以大量增殖）4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞（获取大量单克隆抗体）B淋巴细胞B淋巴细胞注射抗原骨髓瘤细胞融合B-B细胞杂交瘤细胞瘤-瘤细胞选择性培养基

筛选1多种杂交瘤细胞符合要求的杂交瘤细胞抗原-抗体杂交法

筛选2克隆化培养体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体既可以产生特异性抗体

又可以大量增殖。用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞特点小鼠腹水培养液制备过程（三）单克隆抗体的应用

与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，并可大量制备。应用主要有：1、作为诊断试剂2、用于治疗疾病和运载药物准确、高效、简易、快速

把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合，制成“生物导弹”。思考与探究1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。诱导融合方法不同：动物细胞诱导融合所用的方法比植物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导；结果不同：植物体细胞杂交培养成了杂种植株，而动物细胞融合只培养出了杂交细胞。1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的

B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同Ｂ练习2.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞

A．②④B．①③⑤

C．①②③④D．②③

C

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案3、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________2、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______4、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B淋巴细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC目前出生的克隆动物，没有与核供体动物完全一样的，如在毛色花纹上就会有微细的差异。对多利羊的研究发现，其核外的少量DNA，即线粒体中的DNA来自于受体卵母细胞，而不像其他DNA一样来自于供体核。知识拓展1.体细胞核移植与线粒体DNA法国某研究中心最近指出，现有的核移植技术普遍重视细胞核中的DNA，而忽视细胞质中线粒体DNA的作用，因此无法真正克隆出一模一样的动物。该研究中心对实验鼠进行了12年的研究，发现细胞核DNA并非包含机体全部的遗传信息，其细胞质中线粒体DNA在机体某些遗传特征方面也起重要作用。细胞核含有成千上万的基因，细胞质线粒体DNA只含有不到50个遗传基因。该研究中心发现用目前普遍采用的体细胞核移植方法得到的克隆鼠的行为有时和体细胞核供体鼠完全不同，但若将线粒体DNA也移入去核卵母细胞，克隆鼠与其体细胞提供者的行为就基本一致了。这说明线粒体DNA对动物大脑的发育和行为都有直接影响。知识拓展2.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？

需经常查阅更多科研报道。生物种类细胞来源成功年代酵母菌—鸡原生质体—血红细胞1975年人—胡萝卜腹水癌细胞—原生质体1976年人—小鼠纤维肉瘤细胞—畸胎瘤细胞1978年克隆化培养和抗体检测（筛选二）第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。返回为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？

就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗