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聚丙烯酰胺凝胶电泳测定种子纯度的操作注意事项

采用聚丙烯酸酯电泳法测定种子纯度。其稳定性好,分辨率高,操作简单易行,速度快。迅速在种子生产、经营单位和鉴定单位得到普遍应用,且收到良好的效果。我中心经过长期实践,认为在其操作中需要注意以下事项。1设备和设计1.1在发芽试验中，应选择优质种子，并控制发芽过程中的恒温箱温度应控制在25c下1.2所有试剂都是纯分析性的。用水是去离子水。预测值前，确认药物是否有效2溶液的制备溶液配制要仔细称量药品,认真配制各液体,具体操作应注意:2.1如果试剂不正确，将严格按照标准要求的量衡量取试剂会凝胶速度加快,电泳时间长,谱带滞留,电泳操作失败。2.2所有溶液都放入棕色的瓶中，储存在4c下，每次都配制制药品的量要根据实验的要求而定,抗坏血酸、过氧化氢以及分离胶和浓缩胶溶液等一般应在一周内使用或现用现配。2.3三聚丙烯酸酯、三聚丙烯酸酯、tris和聚苯胺溶液具有毒性3电泳操作3.1样品提取3.1.1样品是具有代表性的。随机取样，叶片和茎，以免影响试验结果3.1.2这些样品在苗期为7天采集，茎从中部移除，叶片分为三个部分3.23橡胶板的制备3.2.1在这项操作中，应注意将玻璃输送机清洁并干燥手指不能接触玻璃板表面,胶膜在电泳槽中要放水平,位置合适,以防漏水,长玻璃板在负极一面,短玻璃板在正极一面,不能装错。3.2.2粘合剂注射时，应完全摇匀，快速从一端插入，避免泡沫和凝胶均匀，然后将其注入一定浓度的水中3.2.3灌溉时，需要迅速维护样品，使样品平整，应做到水平堆放3.3采样点的质量每次点样为15微升为最佳,太多谱带会拖尾,太少可能会丢失谱带。3.4电泳3.4.1要注意双重错误和消极错误的结合3.4.2本槽电极缓冲液应高于短玻璃板，下槽电极缓冲液应高于金子线3.4.3通常在15.20c下进行3.4.4为了找到浑浊的液体，需要重复使用超过5次4把握好染色液的配制卸板时要注意是否粘板,如发生粘板,用长针头注射器边注水边剥离,剥完后将凝胶板放入染色液中,液体必须盖住胶板。将配好的染色液倒入白塑料盆中,震荡15~30分钟,酶带显出变成蓝色加入等体积的蒸馏水放置过夜,酶条可保持兰色。如立即用自来水冲洗,酶带由兰色变成棕色。5杂交前要注意掌握的问题杂交种的谱带与该杂交种亲本的谱带比较,这样的比较就简单了,但我们认为杂交种的判断中最难掌握的是以下两种情况:(1)杂交种中除偏父、偏母、互补型之外的它所独有的杂种性谱带,判断它时要仔细。(2)杂交种谱带中有的偏父型和互补带,但又多出或少出一条谱带,其他谱带和别的种子谱带相同,可认为变异或丢失,但多出的或少的谱带多了就要考虑是其他的情况了。6胶板包胶板电泳结束后,可以制成干板保存,在10%甘油浸泡中,用两张比胶板稍

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