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文档简介

1、.*;单细胞测序,你为何如此令人痴迷?最近几年,关于单细胞测序的报道日益增多。事实上,单细胞测序是一个新兴的领域。据理解,单细胞测序萌芽于2019年,2019年是单细胞基因组学突飞猛进的一年。2019年谢晓亮教授哈佛大学课题组与北京大学BIOPIC李瑞强研究员小组合作,将创立的MALBAC技术应用于人类单个精子基因组的测序研究中。2019年12月10日,解放军总医院诞生了一对特殊的双胞胎国内首例应用单细胞扩增技术MALBAC同时进展PGD/PGS阻断了遗传性耳聋的安康双胞胎。单细胞测序分为单细胞转录组测序和单细胞基因组测序。单细胞转录组测序分为:单细胞DGE、单细胞polyA测序、单细胞lnc

2、RNA测序。单细胞基因组测序分为:单细胞外显子组测序和单细胞全基因组重测序。单细胞开展的历史据理解,1990年,NormanIscove的课题组首次证实对单细胞进展转录组分析是可行的,他们用PCR技术实现了对cDNA分子的指数级扩增。2019年7月,来自斯坦福大学的StephenQuake在Cell上发表了一篇文章?Genome-wideSingle-CellAnalysisofRecombinationActivityandDeNovoMutationRatesinHumanSperm?,研究采用单细胞测序的方法,测定了来自一项研究的100个精子的重组率,发现了许多新的重组热点和与间接方法发

3、现的相一致的比率。同年,纽约冷泉港实验室的研究生TimourBaslan正利用单细胞技术来研究癌细胞。2019年1月?自然方法学?NatureMethods上发表年度特别报道,将“单细胞测序Singledoutforsequencing的应用列为2019年度最重要的方法学进展。2019基因组学前沿研讨会将单细胞组学单独列为一个单元,可见单细胞测序在当前基因组学前沿研究中的热度。单细胞测序为何赢得众生命科学家们炽热的心?因为即使来源一样的单个细胞,由于随机生物过程和环境扰动的原因,彼此在许多方面也存在差异,即细胞的异质性。常见的基因组测序技术防止不了这一现象带来的影响,基于这一原因,研究人员开启

4、了单细胞测序技术的探究之路。单细胞测序技术可谓是生物科技开展史上的一大创举。那么,单细胞测序有哪些详细的应用呢?单细胞检测技术在癌症研究中发挥重要的作用2019年3月,华大基因研发了一种解析单细胞基因组的新方法,应用于原发性血小板增多症一种血癌和肾透明细胞癌一种肾癌的肿瘤内部遗传特征研究,解决了之前在用组织样本测序时无法解决的肿瘤高异质性难题,为从单核苷酸程度深化研究癌症发生、开展机制及其诊断、治疗开拓了新方向。2019年5月,在冷泉港实验室的基因组生物学会议上,MD安德森癌症中心的遗传学家NicholasNavin提交了单细胞分辨率乳腺癌遗传学的新数据。6月,Navin改进了他的技术使得它可

5、以敏感地检测到单个核苷酸的差异,并且他已经在来自一个浸润性乳腺癌肿瘤的一组4个细胞中发现单个细胞通常包含数十个罕见突变,这些突变采用大型肿瘤测序方法通常无法检测到。2019年7月,一项新研究首次说明一种称为Smart-Seq的新基因组测序方法可以帮助科学家们深化分析临床相关的单细胞。Smart-Seq有许多可能的应用,包括帮助科学家们更好地理解肿瘤形成的复杂性。2019年12月,BIOPIC白凡研究员和谢晓亮教授团队与北京大学肿瘤医院的王洁教授团队合作共同在?PNAS?上发表文章,对于癌症病人单个外周血循环肿瘤细胞CTC的全基因组、外显子组进展了高通量测序,发如今某一类肺癌患者的所有循环肿瘤细

6、胞中存在着一种特定的基因拷贝数变异CNV形式,而不同癌种CTC细胞的基因组拷贝数变异形式不同,为癌症的早期诊断提供了全新的契机。这也是国际上首次实现对外周血循环肿瘤细胞基因组的高通量测序,标志着利用循环肿瘤细胞基因组测序信息进展肿瘤无创诊断时代的到来。单细胞检测技术在生殖领域的应用2019年9月19日,世界首例经MALBACmultipleannealingandlooping-basedamplificationcycles,是目前最先进的单细胞全基因组扩增技术基因组扩增高通量测序进展单基因遗传病和染色体异常同时筛查的试管婴儿在北京大学第三医院诞生,这标志着我国胚胎植入前遗传诊断PGD技术已

7、处于世界领先程度。2019年12月10日,解放军总医院诞生了一对特殊的双胞胎国内首例应用单细胞扩增技术MALBAC同时进展PGD/PGS阻断了遗传性耳聋的安康双胞胎。下面,让我们来看看目前国内的单细胞测序技术有哪些?1、Strand-seq:主要研发人加拿大英属哥伦比亚大学PeterLansdorp。Strand-seq方法能分别对单细胞的双亲DNA模板链进展测序,获得高分辨率的姊妹染色体交换图谱,检测到基因重排,从而发现细胞复制过程中,DNA序列的翻转或交换。利用Strand-seq方法,研究人员完成了单链DNA测序,并发现了首个基因组压力和不稳定性的痕迹。2、基于芯片实验室技术的单细胞测序

8、:主要研发人斯坦福大学StephenQuake。该技术设计了一种道路,用液体载运细胞通过一连串显微管道和微阀门,当细胞挨个进入各自的小空位时,它们的DNA就会被提取出来,经过复制用于进一步分析。此外,还能用化学试剂将细胞混合起来,通过检测反响过程中的荧光发射获得它们的基因编码。所有这些都能在芯片上完成,不仅操作简单,而且本钱效益高。StephenQuake已利用此技术完成了第一例人类单细胞测序,如今他正利用这项技术研究精子细胞中的重组并分析突变率。3、MALBAC:多重退火和成环循环扩增技术MultipleAnnealingandLooping-BasedAmplificationCycles,主要研发人哈佛大学终身教授、美国科学院院士谢晓亮教授。该技术可以降低PCR扩增偏倚,使得单细胞中93%的基因组可以被测序。这种方法使得检测单细胞中较小的DNA序列变异变得更容易,因此可以发现个别细胞之间的遗传差异。这样的差异可以帮助解释癌症恶化的机制,生殖细胞形成机制,甚至是个别神经元的差异机制。4、GSeq:单细胞基因组与转录组平行测序技术GenomeandTranomeSequencing,该技术实现了对单个细胞内的DNA和RNA平行测序,可以展现单个细胞的基因变异与基因功能之间的关系。G&T-Seq这一整合的技术的重要意义在于

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