常用分子生物学试剂配置方法

1、分子生物学实验室常用试剂的配制方法？ 悬赏分：0 - 提问时间2007-4-23 17:02提问者： jianglijun928 - 试用期 一级 其他回答 共 1 条一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(B

2、SA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：

3、溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/L HCl：加8.6ml的浓

4、盐酸至91.4ml的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 10m

5、g/mlRnase（无DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器

6、搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。 100×Denhardt试剂（Denhardt's regent） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡

7、咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分V） 水 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml 依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。 10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP 5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） 0.5mg/ml BSA（组分V）（可选） 水 5ml 1mol/L 贮液 1ml 1mol/L 贮液 1ml 1m

8、ol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。 100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6个月。 10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L d

9、CTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20×SSC 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠（二水） 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三

10、钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 甲酰胺（deionized formamide） 直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化

11、）。 磷酸缓冲液（phosphate buffer） 按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L 磷酸二氢钠（ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终pH值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225

12、265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl buffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11

13、.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml） pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

14、成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 染料 1溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全

15、溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions） 6×碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青FF 水 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15聚蔗糖（400型）

16、 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1溴酚蓝 2.5ml 1二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 6×甘油凝胶上样液（4贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50甘油 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF 100

17、ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40聚蔗糖 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1SDS 50甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L

18、 EDTA(pH8.0) 100ul 10 SDS 5ml 补足到10ml 三.常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培

19、养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）

20、。 2×YT培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用1N NaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。 四.常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后