微生物的分离和计数专家讲座

课题1我们学习了培养基配制以及微生物培养（接种技术）。下面我们来学习怎样进行细菌分离，取得所需要目标微生物，并对目标微生物进行培养计数。微生物的分离和计数专家讲座第1页一、研究思绪筛选菌株自然界筛选：依据它对生存环境要求，到对应环境中去寻找。试验室筛选：人为提供有利于目标菌株生长条件（包含营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其它微生物生长。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基。目标是从众多微生物中分离所需要微生物。微生物的分离和计数专家讲座第2页测定微生物数量方法：1、直接计数法：最惯用显微镜直接计数。先将待测样品制成悬液，然后取一定量悬液放在显微镜下进行计数。依据在显微镜下观察到微生物数目来计算出单位体积内微生物总数。优点：设备简单、能观察微生物形态特征。缺点：不能区分死菌和活菌；难以计数微小细菌。普通用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体计数。统计菌落数目微生物的分离和计数专家讲座第3页

2、间接计数法：最惯用稀释涂布平板计数法

应用：统计样品中活菌数目

原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌，经过统计平板上菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（注意）：普通选择菌落数在30-300平板进行记数。稀释度很主要，普通选择三个稀释度中第二稀释度到平板所出现平均菌落数在50个左右为最好。微生物的分离和计数专家讲座第4页操作：设置重复组，增强试验说服力和准确性。将待测样品经过一系列稀释，然后选择三个稀释度菌液均匀涂布在平板上，然后培养。（注意）：为了结果靠近真实值，可将同一稀释度菌液涂布到3个或3个以上平板上，经培养，计算出菌落平均数。

对照标准：判断培养基中是否有杂菌污染，将未接种培养基同时进行培养。判断选择培养基是否含有筛选作用，对照培养基接种后培养观察菌落数目。

计算公式：每克样品中菌株数=（C/V）*M微生物的分离和计数专家讲座第5页（1）原理：尿素是一个主要农业氮肥，只有当土壤中细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。尿素细菌能合成脲酶，在脲酶作用下尿素被分解成氨。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3二、试验设计微生物的分离和计数专家讲座第6页（2）试验设计内容包含试验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。（3）试验流程：

土壤取样

样品系列稀释

涂布平板与培养

观察并统计结果

菌落计数微生物的分离和计数专家讲座第7页

1、土壤微生物主要分布在距地表3～8cm近中性土壤中，约70％～80％为细菌。2、分离不一样微生物采取不一样稀释度，其原因是不一样微生物在土壤中含量不一样，其目标是确保取得菌落数在30～300之间、适于计数平板。细菌稀释度为104、105、106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。3、培养不一样微生物往往需要不一样培养温度。细菌普通在30～37℃培养1～2d，放线菌普通在25～28℃培养5～7d，霉菌普通在25～28℃温度下培养3～4d。4、在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时统计作为结果，以预防因培养时间不足而造成遗漏菌落数目。点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充分，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到菌落。5、菌落特征包含形状、大小、隆起程度、颜色等方面。阅读思考微生物的分离和计数专家讲座第8页三、结果分析与评价（1）对分离菌种作深入判定，还需要借助

生物化学

方法。(2)在细菌分解尿素化学反应中，细菌合成脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基碱性增强，PH升高。所以，我们能够经过检测培养基pH改变来判断该化学反应是否发生。(3)在以尿素为唯一氮源培养基中加入

酚红指示剂。培养某种细菌后，假如PH升高，指示剂将变红

，说明该细菌能够

分解尿素

。[思索10]测定饮水中大肠杆菌数量方法是将一定体积水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落展现黑色，经过记述得出水样中大肠杆菌数量。你认为在该试验中最少应取三个水样。微生物的分离和计数专家讲座第9页四、课堂总结、点评试验方案土壤中尿素分解菌分离与计数分离筛选微生物原理有利于目标菌株生长抑制或阻止其它微生物生长人为条件微生物计数方法与原理稀释涂布平板法显微镜直接计数法对照设置与重复设置试验设计试验操作结果与分析微生物的分离和计数专家讲座第10页五、课余作业

活菌计数技术广泛应用于土壤含菌量测、食品卫生和水源污染度检测。选做：1、空气中微生物总数检测2、水中细菌总数检测3、牛奶中细菌分离与计数4、土壤中真菌（或放线菌）分离与技术微生物的分离和计数专家讲座第11页

练一练

用稀释涂布平板法来统计样品中活菌数目，其结果与实际值相比（）

A.比实际值高

B.比实际值低

C.和实际值一致

D.比实际值可能高也可能低B微生物的分离和计数专家讲座第12页有些细菌含有尿素分解酶，能将尿素琼脂培养基中尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，造成培养基变成碱性，使酚红指示剂展现红色。以下能选择出分解尿素细菌培养基是()

A.

KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.

KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7