公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座

公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第1页

年12月30日，

两场筹备了10年“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术？植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第2页(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第3页A细胞B细胞人工诱导1.1动物细胞融合概念杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞过程。一、动物细胞融合公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第4页阅读书本P52及识图2-23，并完成学案第1页【学习过程】公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第5页细胞膜流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后细胞进行有丝分裂，形成完整杂交细胞诱导伎俩？融合后细胞类型？AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物遗传物质1.2动物细胞融合过程原理？公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第6页1.2动物细胞融合过程为何灭活病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性保留融合活性公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第7页1.3动物细胞融合技术意义和应用公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第8页比较项目细胞融合原理细胞融合方法诱导伎俩用途植物体细胞杂交细胞膜流动性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，取得杂种植株动物细胞融合细胞膜流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒取得杂种细胞、制备单克隆抗体1.4比较动、植物细胞杂交技术公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第9页【例1】能使动物细胞融合特有诱导因子是（）A.离心B.灭活病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后杂交细胞遗传物质有何特点（）含有原来两个或多个细胞遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合作用中最主要是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞

BB初试牛刀A公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第10页强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合免疫球蛋白。能产生抗体细胞是浆细胞（即效应B细胞）。温故知新二、单克隆抗体B淋巴细胞效应B淋巴细胞记忆B淋巴细胞分化公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第11页抗体传统生产方法抗原重复注射动物从动物血清中分离抗体该法制备抗体缺点：产量低、纯度低，且抗体特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第12页读下面一段资料，找出单克隆抗体概念

人们发觉，在动物发生免疫反应过程中，体内B细胞能够产生多达百万种以上特异性抗体，不过每个B细胞只分泌一个化学性质单一、特异性强抗体。要想取得大量单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体概念单克隆抗体：单个B细胞克隆产生化学性质单一、特异性强抗体公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第13页提醒1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提醒2：我们所学哪种细胞是能够无限增殖？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2.2单克隆抗体制备

公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第14页一个B淋巴细胞只分泌一个特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒试验公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第15页①为何给小鼠注射特定抗原蛋白？②会有几个融合方式？③杂交瘤细胞是怎样筛选出来？有何特点？④是否全部杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？⑤怎样大规模进行培养得到大量单克隆抗体？公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第16页单克隆抗体制备过程所应用技术有哪些？动物细胞融合技术和动物细胞培养技术制备过程最少需要几次筛选？1、选择性培养基筛选杂交瘤细胞2、克隆化培养和抗体检测利用杂交瘤细胞大量取得单克隆抗体方法？1、体外培养2、动物体内培养（注射到小鼠腹腔内增殖）从培养液中提取从小鼠腹水中提取公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第17页BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活取得产生对应抗体B细胞（二选）：克隆化培养和抗体检测选能产生所需专一抗体杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第18页单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤图解字母按正确次序连接起来。次序是？

你学会了吗？公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第19页2.3单克隆抗体应用诊疗试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第20页“生物导弹”＝单克隆抗体＋药品单抗导向，药品为弹头治疗疾病和运载药品主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药品，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第21页【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合是（）A.经过免疫B淋巴细胞C.经过免疫T淋巴细胞B.不经过免疫T淋巴细胞D.不经过免疫B淋巴细胞【例5】单克隆抗体是由以下哪种细胞产生（）B淋巴细胞B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞A初试牛刀D公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第22页【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，以下试验步骤中错误是（）A．将抗原注入小鼠体内，取得能产生抗体B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体细胞群，培养后提取单克隆抗体B初试牛刀×公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第23页两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高优势本节小结重点公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第24页谢谢公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第25页(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程进行惯用_____________或_____________诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞融合，则可形成

种类型C细胞，所以需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞名称是

，其特点是_________________________________________。效应B

抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第26页(4)在培养时经过________分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意条件是（要求答5项）__________________________________。（5）单克隆抗体在疾病诊疗、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_________________。特异性强、灵敏度高

有丝无菌、无毒环境；充分营养；适宜温度和pH；适宜气体环境

公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第27页15、（1）单克隆抗体是指

。（2）制备单克隆抗体步骤：①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中取得淋巴细胞，其中最少1个淋巴细胞带有抗该抗原抗体。②将步骤①取得B淋巴细胞与步骤②培养骨髓瘤细胞在_________________诱导下融合。③将诱导后产生各种细胞，放在_______培养基多孔培养板上培养，筛选。④这么取得杂交瘤细胞既含有B淋巴细胞_____________能力，又含有________________本事。⑤检测和分离带有抗X抗体阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原单克隆抗体。化学性质单一，特异性强抗体

抗原

聚乙二醇选择性

无限增殖

产生专一抗体公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第28页（3）大量制备单克隆抗体方法主要有两种：①体外培养法，可取得10μg/mL抗体；②动物体内诱生法可取得5~20mg/mL抗体。你选择方法及原因是

。（4）用本法制备出单克隆抗体仍含有不足，因为它是用小鼠_______细胞制备，其化学本质是___________，应用于人体，会作为

产生

，处理这个问题方法是_____________________________。大量生产选①，小规模生产选②效应B蛋白质异物免疫反应采取人效应B细胞制备公开课动物细胞融合与单克隆抗体专业知识专家讲座第29页15、右图为某同学依据杂交瘤技术方法，设计生产破伤风杆菌抗体试验方案。据图回答：

（1）该方案能到达预期效果吗？

。原因是

______________________________________________。

（2）图中②为

过程，惯用

作为诱导剂。该细胞继承了_____________________

，所以不但能分泌

_________