组织培养第十章常见植物脱毒与快繁

第十章常见植物脱毒与快繁技术

宜职院08.9

目的与要求了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术，根据地方特点和组培技术现状，例举部分植物进行讲授，并结合学生查阅资料共同探讨。具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术，具备马铃薯、草莓等植脱毒技术，进行微型薯生产基本知能，有利用图书及网络资源收集相关资料，了解相关行业信息的能力，并具备一定交流探讨能力。

第一节农作物的脱毒与快繁

植物组织培养技术已广泛运用于农作物育种和良种繁育，尤其是许多无性繁殖类农作物脱毒及良种快繁，对提高农作物生产的产量和品质发挥了极其重要的作用。一、马铃薯的脱毒和快繁

（一）茎尖培养脱毒

1、取材生产大田顶芽，或块茎，预培养抽生的枝条污染较少。供试材料存在病毒可结合热处理脱毒。

2、消毒自来水冲洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液5～10min，无菌水冲洗2～3次。

3、接种解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。

4、培养条件MS、Miller，25±2℃，1000lx，4周后增至2000～3000lx，光照16h。

5、病毒鉴定目测法和指示植物鉴定法。（二）微型薯生产技术

由试管苗生产的重1～30g的微小马铃薯被称为微型薯。不带病毒，增产效果一般在40%以上。

1、试管生产微型薯一般只有1～5g。用组织培养方法生产微型薯分以下两个步骤：

（1）单茎段扩大繁殖

（2）微型薯的诱导。

2、温室多层架盘工厂化生产

3、低网畦生产二、甘薯的脱毒与快繁（一）茎尖培养1、茎尖培养脱毒取高产、优质母株枝条，切成带1芽小段。自来水流水冲洗，70%酒精10s，0.1%的升汞10min，无菌水4～5次，或2%次氯酸钠5min，无菌水3～4次。2、茎尖剥离和培养解剖镜下剥去芽上较大幼叶，切取0.3～0.5mm含1～2个叶原基的茎尖分生组织，迅速接种到制备好的培养基上。3、病毒检测

目测法和指示植物鉴定法。

（二）脱毒苗扩繁和种薯的生产

通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。30d左右长成有6～8片展开叶的试管苗。待试管苗繁殖到一定数量后，即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。所结小薯即为原原种薯。以原原种（苗）为种植材料，在防虫条件下的无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯（良种）。

红薯原原种种炼苗第二节果果树脱毒毒快繁利用组织培培养方法繁繁殖果树植植株具有占占地面积小小，繁殖周周期短，全全年都能进进行繁殖，，繁殖系数数高等特点点。还可以以消除果树树的某些病病毒病，适适应果树向向品种更新新快、矮化化密植以及及无病毒栽栽培方向发发展的需要要。一、草莓（一）草莓莓离体快繁繁技术1、外植体体6～7月份份匍匐茎15～20cm长时时取材。2、培养基基初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA0.2mg/L增殖MS+6-BA0.5～～1.0mg/L。。3、生根和和驯化1/2MS+IBA0.2～～1.0mg/L根2～3cm时炼苗苗，一周后后发新根，，四周后可可移栽。（二）花药药培养脱毒毒1、花药培培养脱毒技技术春季取单核核期花蕾（（直径约4mm），，4～5℃℃低温处理理24h。。浸入70%酒精30s，漂漂白粉或0.1%氯氯化汞10～15min。剥剥取花药放放在培养基基上。诱导培养基基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L，继代培养基基为MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.05mg/L2、脱毒苗苗的检测指示植物小小叶嫁接鉴鉴定法和电电子显微镜镜鉴定法。。草莓小叶嫁嫁接法二、柑橘1、茎尖微微芽嫁接砧木种子45℃温水水浸泡5min—55～56℃热水处处理50min—取取出吸干——消毒—剥剥去种皮——种子接种种于MS培培养基—27±1℃℃暗培养——2周后萌萌发芽苗可可作砧木。。接穗穗材材料料强强健健新新梢梢——热热空空气气处处理理45min(50℃℃)——取取lcm长长芽芽条条——消消毒毒处处理理——切切取取0.14～～0.18mm微微茎茎尖尖。。砧木木苗苗切切去去长长根根和和子子叶叶，，上上胚胚轴轴留留1～～1.5cm切切除除顶顶部部，，垂垂直直于于茎茎，，切切开开一一个个倒倒T字字形形切切口口，，将将微微茎茎尖尖放放置置于于砧砧木木切切口口内内，，茎茎尖尖底底部部和和砧砧木木切切口口形形成成层层紧紧密密贴贴合合。。嫁接接苗苗转转植植于于新新鲜鲜培培养养基基上上，，27±±1℃℃、、16h光光照照，，2～～4周周后后抽抽生生新新芽芽，，成成活活率率可可达达20%～～50%。。5～～8周周可可移移植植。。柑橘橘花花药药培培养养示示意意图图2、、无无病病毒毒苗苗的的繁繁殖殖经无无病病毒毒苗苗鉴鉴定定后后选选出出无无病病毒毒良良种种苗苗木木，，可可建建立立原原种种母母本本园园。。在在隔隔离离区区，，按按无无病病苗苗的的栽栽培培要要求求建建成成无无病病良良种种母母本本园园，，供供繁繁殖殖无无病病苗苗木木采采穗穗用用。。三、、香香蕉蕉（一一））花花序序轴轴切切片片培培养养1、、花花序序轴轴切切片片香蕉蕉果果穗穗已已完完全全抽抽出出时时采采上上部部末末结结实实花花序序，，无无菌菌下下剥剥取取苞苞片片除除去去子子房房。。取取顶顶端端10～～15cm长长的的花花序序轴轴段段，，灭灭菌菌后后横横切切成成2～～3cm厚厚的的薄薄片片，，再再纵纵切切成成数数片片。。2、、培培养养过过程程常用用MS培培养养基基，，也也可可用用SM或或改改良良MS，，继继代代也也可可用用Knudson培培养养基基。。香蕉雄花序外外植体诱幼苗苗过程（二）影响试试管育苗的关关键技术芽芽的反反复增殖是香香蕉试管育苗苗的技术关键键。

芽的增增殖效果如何何，较重要的的衡量指标是是增殖率和代代期（—次继继代培养的时时间），均与与生长调节剂剂关系最为密密切。细胞分分裂素以6-BA3～～4mg／L为宜，增殖殖率可达到4以上，代期期为3～4周周，因而增殖殖效率高。第三节蔬蔬菜组织培养养一、番茄1、花药培养养

⑴取花药药3～7mm长、单核中中期的花蕾。。

⑵将花蕾蕾用0.1‰吐温40溶液液浸泡5min—70％％酒精15s—3％的漂漂白粉10min—无无菌水冲洗——接种

⑶从从花蕾中取出出花药，接种种在DBMII＋2.0mg/LNAA＋1.0mg/LKIN的的培养基上，，27℃、24h光照后后黑暗下培养养。2、叶培养⑴⑴取无菌幼幼嫩叶片，切切成5×5mm的小块。。

⑵MS＋＋0.2mg/LIAA＋2mg/LBA27℃、光光。

⑶25天后，愈伤伤组织分化芽芽。一个月后后每切块长出出2～5个芽芽。

⑷芽转转到无激素的的MS培养基基上，5～10d后形成成根。3、胚培养⑴外植体的制制备授粉后后30～40d果实—95%乙醇消消毒—5%NaCl中5min—无无菌蒸馏水充充分淋洗除去去种子上的胶胶状复被。⑵培养基MS附加硫胺胺素3.0um。pH6.0。附加加2.4－D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用用做愈伤组织织启动和保存存培养基。⑶培养条条件愈愈伤组织织启动和和保存暗暗培，27℃。。再生生生根20～30℃、16h/d，荧荧光下进进行二、甘蓝蓝1、取材材和处理理剥去叶球球的叶片片，留下下中心柱柱和腋芽芽，—70%酒酒精1-2分钟钟—0.2%升升汞10-15分钟——剥离腋腋芽—接接种在繁繁芽培养养基上（））2、培养养光照1000-3000lx,12-13h/d,20±±2℃，，湿度50%-60%。3、扩大大繁殖重复进行行扩繁，，直到达达到要求求繁殖数数量为止止。第四节观观赏赏植物的的组织培培养兰花兰花系兰兰科植物物，在自自然条件件下主要要靠分株株繁殖，，繁殖率率一年只只有几倍倍，所以以无法大大量繁殖殖生产，，而且由由于长期期进行无无性繁殖殖，带病病毒株增增多，逐逐渐使种种性降低低，影响响生长。。1、取材材和处理理切取lOcm长长生长健健壮的茎茎尖，去去苞叶洗洗净—75％酒酒精—5％的漂漂白粉10min—无无菌水冲冲洗—接接种。在兰花叶叶片组织织培养中中，应选选择带有有嫩叶的的花梗，，以后的的处理方方法同茎茎尖。2、原球球茎的诱诱导培养养茎尖生长长点或叶叶片接种种在原球球茎诱导导培养基基上。因因兰花种种类而异异，可以以用固体体培养基基或液体体培养基基(液体体培养基基中应加加比较多多的蔗糖糖)。凡凡原球茎茎切口处处不变褐褐或变褐褐物质排排出量较较少的种种类，可可用固体体培养基基，而易易变褐的的种类，，最好用用液体培培养基，，诱导温温度应于于23℃℃，光照照强度1500-20001x。。原球茎的的增殖3、苗的的分化培培养兰科植物物与其他他草本花花卉不同同，它不不易受生生长调节节物质的的影响，，一般是是将原球球茎转入入离子浓浓度较低低的培养养基中，，加入一一些如椰椰子汁等等天然提提取物质质，效果果会更好好，原球球茎很快快再生成成植株。。lcm高高的幼苗苗转移到到壮苗培培养基上上培养3～6个个月，使使其长3～4片片叶、3～4条条根、3～10cm高高，可移移栽在泥泥炭和蛭蛭石中，，保湿弱弱光施肥肥。原球茎茎再分分化蝴蝶兰兰第五节节药药用用植物物离体体培养养芦荟芦荟不不能自自花授授粉结结实，，因此此，用用种子子繁殖殖非常常困难难。目目前的的繁殖殖方法法主要要是分分株和和分蘖蘖，但但难以以快速速、大大量地地繁殖殖种苗苗，这这也是是当前前芦荟荟种苗苗昂贵贵的重重要原原因之之一。。（一））材料料和培培养基基取取l0-l5cm高的的芦荟荟幼苗苗诱诱导培培养基基为MS+(1-6mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分分化化培养养基为为MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA生生根培培养基基为MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333（二）繁繁殖方法法

1、、愈伤组组织培养养茎茎尖尖部分——75%乙醇30-60s——升汞5-l0min—无菌菌水冲洗洗数次——解剖刀刀取出组组织切块块—接种种培培养养条件:光照10-12h，1000一一2000Lx，(25士士)2℃℃。15-25d后，，可膨大大成愈伤伤组织，，1周后后，就可可将愈伤伤组织转转管进行行继代培培养或分分化培养养。2、继代代、分化化培养同同诱导3、生生根培养养培培养养条件同同分化，，半个月月后即可可生根。。4、、炼苗清清水喷湿湿，在15-25℃、、湿度60%-80%的条条件下炼炼苗24h，也也可视情情况缩短短为l2h。5、移移栽将将幼幼苗移栽栽入由蛭蛭石组成成的驯化化苗圃中中驯化，，定期喷喷施驯化化培养液液和清水水，15-20d后，，即可移移栽。第六节树树木木的离体体培养银杏是园林绿绿化的珍珍贵树种种，亦有有较高的的药用价价值，以以叶及种种皮入药药，它的的叶的制制剂能显显著扩张张脑血管管，可治治疗脑血血栓、冠冠心病、、心肌梗梗塞及大大动脉炎炎等。种种仁、有有小毒、、性平、、有敛肺肺、定喘喘等功能能。因此此可说全全身都是是宝。但但常规繁繁殖较难难，因此此组织培培养有很很大应用用价值。。胚培养（一）取取材：选选择生长长饱满的的银杏种种子。（二）操操作：1、升汞汞进行表表面消毒毒，无菌菌条件下下剥除外外皮和胚胚乳。接接种在MS培培养基基上。培培养条件件：光照照1500LX，，温度25度。。2、愈伤伤组织的的诱导：：1/2MS+IBA浓度梯梯度（1、3、、5、7、10PPM）诱导导愈伤组组织。将将培养3天后的的银杏胚胚接种在在此培养养基上，，诱导出出大量的的愈伤组组织。3、愈伤伤组织继继代培养养：MS+1.0mg/LNAA+0.1mg/LKT，24—26℃，，24h光照培培养。20天继继代一次次。4、生根根培养：：目前有人人用根太太阳（生生根剂））0.5PPm+1/2MS培养基基（三）扩扩大繁殖殖和炼苗苗移栽按按常规方方法即可可思考1、说明明马铃薯薯微型薯薯的生产产技术2、查阅阅资料，，了解我我国脱毒毒种苗生生产现状状3、查阅阅资料，，了解我我国兰花花组培生生产特点点4、查阅阅资料，，了解我我国药用用植物组组培技术术情况5、查阅阅资料，，了解我我国林木木组培生生产状况况9、静夜四无无邻，荒居居旧业贫。。。1月-231月-23Sunday,January1,202310、雨中黄黄叶树，，灯下白白头人。。。13:38:2313:38:2313:381/1/20231:38:23PM11、以我独沈久久，愧君相见见频。。1月-2313:38:2313:38Jan-2301-Jan-2312、故人人江海海别，，几度度隔山山川。。。13:38:2313:38:2313:38Sunday,January1,202313、乍见翻疑疑梦，相悲悲各问年。。。1月-2314、他乡生白发，旧国见青山。。19一月20237:39:57上午07:39:571月-2315、比不了得就不比，得不到的就不要。。。一月237:39上午1月-2307:39January19,202316、行动出成果，工作出财富。。2023/1/197:39:5707:39:5719January202317、做前，能够环视四周；做时，你只能或者最好沿着以脚为起点的射线向前。。7:39:57上午7:39上午07:39:571月-239、没有失败，只有暂时停止成功！。1月-231月-23Thursday,January19,202310、很多事情努力了未必有结果，但是不努力却什么改变也没有。。07:39:5707:39:5707:391/19/20237:39:57AM11、成功就是日复一日那一点点小小努力的积累。。1月-2307:39:5707:39Jan-2319-Jan-2312、世间成事，不求其绝对圆满，留一份不足，可得无限完美。。07:39:5707:39:5707:39Thursday,January19,202313、不知香积寺，数里入云峰。。1月-231月-2307:39:5707:39:57January19,202314、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。19一月20237:39:57上午07:39:571月-2315、楚塞三湘接，荆门九派通。。。一月237:39上午1月-2307:39January1