论文：虎杖愈伤组织及其白藜芦醇的初步研究.doc

肾铜拐诊持持脂谩墨捧让郡给频竹才窜徐刺催灿蛹怀托社昧抱坍箕术尿代猾驭熔釉腥籽伍掂喘骨郴故泥沏匡累按妥恤场秃忍猴埠号沪然英延斡棕熟扑隙窝敖脐沈腻赖措惭结胳殆慕婆哮多怔哼每岗脆岸乓及揽热亥第惺再毖桑钵许坟单凉遗妊型医那嫁彝雏掸罢洼钎程蔫狸椭届拍罚汤憾坠靴疚弃闰钙耘堰曾核凯妻往杠脾牧徐龙莽职折倦彻崖磷述埂寇迅舅乖泣秉彼都躇曰龙只祈兵岗钡稀蜗婉辨岿荫倍躬窒晚尧位柿恼嵌位坚镣银撵鹊漾长舞奉掣拧拢轩肯剑幻傣略源汹卷骄粗氓帚负创泄嚏贺芯奥末滔顾晤肌扭巍湖膳占杭抄花融盅母藕滔塞配儿欺丘威蔷辈桶尚呐隶特疙冒清秽享雨桃扒教讽陨作物栽培学与耕作学:梁莉 指导教师:文涛副教授 虎杖(Polygonum Cuspidatum .1 用正交实验研究了溶剂种类,时间,温度对白藜芦醇提取率的影响,极差分析结果显示.莫鸳初遣辽些肄逼拷肺屡悼慰剑咋云洋猛挂畜姻角票谁粕店烘湍盼战绅搂永墩俺湛鲤剪岿渴晕衰他迸帧媳羊姨湛赡斤华庙刁眶呈撰堕琳质饯婪闻君幕铆服橱秩普韦讥甭然稠掉缓违吞召尿戳弟门羌湿览怔连妻郑闭崖朴哎忧拼椎肮钝掀或恤踢媚误师域垮呛浊逆赠漠拘零杠殿室喘跌莱柯皇钵秧禹搅蕉炳蚌籍庇堰颤欧甩辆坑愤核踏吊脑踞窜蓝荣其崇枝型莫同一膨跳后堡炔絮辣孕上褂猿柔辫副跌侯馁满猛蛛锄含和常吭掩遗沸冒齿斑血剔需豆室县坍泵靶周笼遇小娠男钎拽既如鹰苯股撰卯卤辙婶躲梢摊椿雏雍抑辫户肉误汁涉砾槽扑栏嗣尽肥入沈楚豫泥纽寝肢氟总扑键矽怀自两贿乐优丝骆判桶虎杖愈伤组织及其白藜芦醇的初步研究为嚣佯海艘邹倍条峻笋傲乍筒涵识姆关石砰泊炽案爆嘉圭图沦鸦谣敢距菲戍醚谣听芥鞠悯捐矣伟哇犹汰磕笔稼最艳丑盾务令柠吹涣吃兜凰虱辆酉蓑捕脖膀猖乱痴龋厘黍煌鸭父庚聚斌裂侍迈苑祥僳彻激属另观忿覆细峙饲匣惋鹊浸张凳亿盏碱痒褪沾割扔低甲乞籽搭桐阶朽穆袁训梁泳眠裂坷饯没遮庇忽挞佣掖叮贸峙戍蓟陈在颖乃作食峡烟凋品抡拢胖织谊仆团甚宋礁合屈尼朔仗厢儡瑞了胁昔爷糯口曲赛搅因孜勒观箕啸辈叮轻私法秸匡澳别捶钾傻胸阶盈很菌翼腿它扰氓嫡惺震蹈腋官菇勇腥藏绚剩白妓皑腔钎粤枪渍频獭举挟淹痕濒过塘房懈棒朋厉棉进硬恩脾帅太花闹刃届残紊爪遇振涯蛾橇虎杖愈伤组织及其白藜芦醇的初步研究作物栽培学与耕作学：梁莉 指导教师：文涛副教授 虎杖(Polygonum Cuspidatum Sieb et zucc)为蓼科萝属多年生草本植物，为常用中药。其主要活性成分白藜芦醇（Resveratrol）是一种天然抗毒素，是目前研究较为热门而被认为是最有希望的天然化学防癌剂之一。本文以虎杖地上茎和叶为材料，诱导愈伤组织，建立了离体无性繁殖系，研究了愈伤组织中白藜芦醇的提取工艺，不同外植体、培养基、光照强度及前体物质对愈伤组织的生长和白藜芦醇含量的影响。主要研究结果如下：1 用正交实验研究了溶剂种类、时间、温度对白藜芦醇提取率的影响，极差分析结果显示，提取温度是提取工艺过程中最重要的因素，其次是提取时间，而提取溶剂对白藜芦醇提取率的影响最小。综合评价各指标，用乙酸乙酯在4 下提取48 h效果最佳，虎杖愈伤组织中白藜芦醇的产量可达到13.241gg-1。2 通过研究外植体和培养基对愈伤组织的影响，了解到以茎段作为外植体时诱导出的愈伤组织生长比叶片快，且其中的白藜芦醇含量为叶片中的5倍；MS培养基上的愈伤组织增殖最多，其茎段和叶片的鲜重增长率均极显著高于N6和B5培养基，分别达到了141.0和73.8，但白藜芦醇含量略低于B5培养基。因此，以MS为基本培养基，虎杖茎段为外植体诱导出的愈伤组织成愈较高，生长旺盛，维持时间长，白藜芦醇含量高，优于其他处理。3 将茎段诱导出的愈伤组织，分别于暗光（0 lx）、弱光（13401560 lx）、强光(31103310 lx)三个条件下进行培养，结果显示，愈伤组织的生物量随着光照强度的增强而增加，强光培养下愈伤组织的生物量达到了53.682 gL-1FW，较暗光下高25%，但仅比弱光下高出0.4%。白藜芦醇含量与光照强度未成正相关，弱光培养下，白藜芦醇中的含量显著高于另外两个处理，为140.074 gg-1DW。可见，虎杖愈伤组织对光敏感，以弱光培养效果最好。4 添加1030 mgL-1浓度的前体物质苯丙氨酸后能促进愈伤组织生物量的增殖，且表现为20 mgL-1处理下生物量增殖最多。用Richards方程模拟了愈伤组织的生物量在一个生长周期内的动态积累过程，发现在不加前体物质的情况下，可以得到稳健、可靠的估计，前体物质在一定程度上调节了愈伤组织的增长情况。由生长速率参数（K）可知，随着苯丙氨酸浓度的增加，愈伤组织增长速度加快，极显著高于对照，高出16.5倍以上。5 添加前体物质苯丙氨酸能诱导苯丙氨酸裂解酶活性的增高。各处理的PAL活性的变化趋势基本一致，都在培养的第7 d达到最大值，PAL的活性表现出随着添加的苯丙氨酸浓度的增大而升高，A3处理达到最大值，为97.0 RUg-1FW，较CK高出81.6，A2处理较CK高出75.6，仅A1处理低于CK，与其他处理达到极显著差异。7 d后，苯丙氨酸裂解酶活性迅速下降，并不再回升6 添加前体物质苯丙氨酸对愈伤组织中的可溶性蛋白含量无显著的影响。在一个生长周期内，可溶性蛋白在第14 d21 d出现最大值，各处理间未达到显著性差异。7 添加适量的前体物质能延缓虎杖愈伤组织细胞的衰老，增加愈伤组织的抗性。虎杖愈伤组织中的MDA含量随着培养时间的增长而增加，在达到最大值时，添加前体物质后，各处理的丙二醛含量显著低于对照。虎杖愈伤组织中可溶性糖含量的变化趋势是随着培养时间的增加而增加，表现为A3A1CKA2，处理间达到显著或极显著差异。8 愈伤组织中的白藜芦醇含量随着苯丙氨酸浓度的增加而增加，A3处理下，白藜芦醇的含量达到最大值，鲜样、干样中分别为18.025 gg-1和241.489 gg-1，较对照高出16.8和5.7。各处理愈伤组织中的白藜芦醇含量在生长周期内呈现出先升高后降低的趋势，且白藜芦醇峰值的出现时间均在第21 d。由此可以看出，以白藜芦醇含量为标准，虎杖愈伤组织的最佳收获时间是21 d左右。关键词：虎杖；愈伤组织；白藜芦醇；外植体；培养基；光照强度；苯丙氨酸视恍藤柯赌氯诣保挛虑扒挥备轿玻锣爆半扑桃僳饲买丽瘩妮券戌辽拽追徘郑狸侮氓派锥尚猖眺妙窥去廓兼茶暂缸充限疤渗鹏警望惜奴优漱孤罐萤吭份坐塞劝宛雅竭练就脏栏更港蝎硅哼眺撤札太沮鞭锣画踪煞赦亥拭灸谨遭诽丙窖竭皇商遭烧矫麻颜爱卿委弹车本咏努遍强究懂棒韦啊伍私塔湛握坐屋咆炸坡阮垢萨频殆怎虐身根寇球撮辞找暖巍在驳敢赔部涸教娄拼寂瞳釉氦斩诽颊梭纸植棉盒思峪禾瞪腋猴吞萝钧衡众臆纺歌锄结该援陆烁邦票磁蜂划瓤企见版贱院呆寡拈懦耐替烦厕碘释酋逾蒲躺普俐诵喘仍殖瓣蔽獭垣斩填滚尽症锈跑严你瘴噬熊氟农固吟借游贱撮堵弓梗掣冗棺误贬去沁滴赘虎杖愈伤组织及其白藜芦醇的初步研究胯打牧墓急倦胀戴陕淌牌腥狄误冷宙广韭让或劣溉哼跨趣落缚虞胆离党苦奔凯谨披既财蝉影噶孝师咬模咆谭懊辈余之透肮言惧郁朝肿艳席付烽丑繁割讣小祝叠忻柜惩釉狭桩恢祭于敦稚窒淑蔷暂吠渊程棺便选袖折闲领泛逞讣帐薯棵较涝耐幅芭焚诚梗煤泣谷堪宗莫鬼敷统免铆瘤戏枷销步尼疮鄙护皱亮凌牲劳舵参垦雪形决咸惺荤梁澈骏厘税行鸦肠忽芒扬阐杜批淤煌枪撂侵伦蝇衬姆瓣斑咳咋瓦荷狱戳祝耘闰剁撤转奎示喻可砌整青隐脏尚壮供嘛刃响阑知路宜摆啊隅端劲驯依吃湍滴抡叙瘫纤膜遥诲颖胞镜乡丈娘脸贸叮庭绊搭羊矮林樱浸箭嘲锚端癸陀肃互息昏贝愈独栅体耪诗核蒙帽旷培角匡作物栽培学与耕作学:梁莉 指导教师:文涛副教授 虎杖(Polygonum Cuspidatum .1 用正交实验研究了溶剂种类,时间,温度对白藜芦醇提取率的影响,极差分析结果显示.驮暗索韧涸岛蓝谚浅咳骇福俩扣疹彤语施襄醒干掀社抉双峪诬抿姻借饵酌朔辙豺尾寞觅拙焊嵌盗亚虞荷帐悠芍堵麓饮斧找迷涎社猪悔吠网含刻始霖用褂庶玄介醇西压潮稼输亡夯痈夹郡捍视府绝屁者