西比亚毛细管血红蛋白电泳操作规程作业指导书

西比亚毛细管血红蛋白电泳操作规程作业指导书项目名称――血红蛋白毛细管电泳（CAPILLARYSHEMOGLOUBIN(E)）检查办法名称――流动液体毛细管高压液相电泳。办法学原理CAPILLARYS系统运用毛细管中液相电泳的原理，带电分子在含有特殊PH值的碱性缓冲液中通过其电泳迁移率而被分离开，这个分离也要依赖于电解质的PH和电渗流。CAPILLARYS系统可同时进行7个标本的血红蛋白量化分析，标本的溶血稀释和注入通过在毛细管阳极末端吸入完毕，接着在高电压下蛋白质进行分离，并在毛细管的阴极端于415nm吸光率下直接检测血红蛋白。办法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（movingboundaryeectrophoresis），而后，这种技术的多个局限性已逐步被区带电泳（zoneelecrrophoresis）所克服，CAPILLARYS系统已经发展到将该项技术完全自动化，并含有快速分离和良好的分辩性。现在该办法已被大多数人认为是介于传统的区带电泳和液相色谱之间的技术办法。仪器5.1.型号：SEBIACAPILLARYS（PN1220或PN1222）5.2.分析和计算参数：5.2.1.解决量：80-100个样本/小时所需样本量：100ul检查时间：20分钟重复性：有良好的重复性电泳参数：电压3.5－9000V电流3.5－200mA功率0－90W准备6.1.蒸馏水或去离子水在SEBIACAPILLARYS的全自动系统中进行毛细管电泳时冲洗毛细管用。建议在使用前先用0.45µm的过滤器将蒸馏水或去离子水过滤一次。为了避免微生物的繁殖，请每天更换蒸馏水或去离子水。如需要长久保存，可加入3.5µl/dl的ProClin300。注意：当充填水罐时，建议先用大量的蒸馏水或去离子水冲洗罐。6.2.缓冲液（含碱性缓冲液PH9.4）若缓冲液是储藏在2至8℃，建议在使用前将试剂放置于室温下，一旦缓冲液瓶打开并安置在CAPILLARYS系统上时，缓冲液可保持稳定状态最多2个月。6.3.浓缩的冲洗液必须用蒸馏水或去离子水稀释成700ml。在做血红蛋白电泳之前和之后冲洗毛细管。6.4.分别将一种过滤器转动固定到缓冲液、冲洗液、蒸馏水或去离子水瓶的管子末端的连接器上，用蒸馏水或去离子水冲洗连接器和管子。使用过的过滤器必须用清水冲洗过后才干丢弃。样本的采集和保存7.1.使用抗凝血的新鲜标原来进行分析，采血应按照临床实验检测规定进行。7.2.将红细胞在2～8℃7.3.小心尽量地弃去血浆。不要使用覆盖在红细胞上厚度超出3mm血浆的标本，若试管中的血浆厚度超出3mm将会影响到分析成果。7.4.注意：※标本置于冰箱内（2～8℃）可保存一周。若需要长时间保存，则根据下列程序在采集8小时内清洗红细胞，并将标本冷冻在-80℃具体程序：抗凝血离心5000转/分，5分钟，弃去血浆，用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞两次（每次洗涤后均要离心解决），冰冻前往除红细胞上层多出的生理盐水并震荡混匀。※血红蛋白（Hb）在2～8℃下可发生降解反映。当在2～8℃下保存超出7天，在电泳图谱将会出现一种比HbA更阳极端的被称之为HbA3的额外片段，在靠近HbS带附近会出现一种微弱的片段，并且如果出现HbC，则在HbA2更阳极端可出现不会干扰到A2的一种片段。当保存超出10天，可在红细胞中观察到聚集的粘状物，在分析前必须弃去这些粘状物。操作环节8.1.开机，启动CAPILLARYS仪器和电脑。8.2.启动“PHORESYS”软件，输入顾客名和密码后，按拟定（电脑自动向其加载和交换信息，并运行自检，初始化程序。）联机成功，进入待工作状态，显示“READY”。可开始电泳操作。8.3.在仪器提示，按其规定填写试剂使用期、代码（冲洗液的有关信息在70ml浓缩试剂瓶标签上能够查到），并调节图象中液位高度。CAPILLARYS系统含有试剂自动监控功效，当需要更换某种试剂时，系统将有信息提示。更换试剂时要注意罐和接口的色码相符。请认真阅读CAPILLARYS仪器操作手册。8.4.选择好“HEMOGLOBIN(E)”分析程序，然后将CAPILLARYSHEMOGLOBIN(E)缓冲液瓶放置在仪器上。8.5.标本架有8个标本试管位置，在每个标本架上放好7个打开了的不含血浆的标本管，若待分析的标本管少于7个，则用含有蒸馏水或去离子水的管补足。放好管的标本架上的每个试管的条形码必须能被看到。8.6.在标本架8号位上的试管中加入4mlCAPILLARYSHEMOGLOBIN（E）溶血液，避免产愤怒泡。8.7.在每个标本架上放一排新的稀释杯。若忘记放稀释杯，系统将会有信息提示。8.8.将准备好的标本架从仪器中部的敞口处滑入CAPILLARYS系统中，可持续送入13个标本架。使用NO.0标本架来进行质控血标本的分析。8.9.设立仪器开始运转。8.10.自动化环节的描述：8.10.1.条形码阅读器对每个标本管及标本架进行阅读。8.10.2.标本在溶血液中稀释，每完毕一种标本的溶血稀释，都会对稀释针进行清洗。8.10.3.冲洗毛细管。8.10.4.稀释好的标本被注入到毛细管中。8.10.5.在恒定的电压下电泳8分钟，帕尔贴软件控制温度。8.10.6.血红蛋白在415mm吸光率下直接检测，同时在系统屏幕上显示出电泳剖象。注：上述描述的这些自动环节合用于第一次传入的标本架。从分析程序开始大概20分钟后可出现电泳图谱。接下来分析的标本架，在上一种标本架进行分析的同时都会进行头两个环节（条形码阅读和标本稀释）。成果分析9.1.在程序分析的最后，每个血红蛋白片段的相对值自动显示出来，并对剖象进行分析。可自动识别血红蛋白A（HbA）片段，同时在回想窗口的中间对其进行调节。9.2.可直观的在视觉上对电泳图谱的异常图像进行评定。9.3.CAPILLARYS系统可无视降解产物而计算出每个血红蛋白片段的浓度。9.4.图谱可自动校正HbA片段方便分析解释：9.4.1.当缺少HbA（黄色警示），将通过之前相似毛细管电泳获得的电泳剖象中HbA的位置对其进行修正。9.4.2.当无法进行调节进，将出现红色的警示。9.4.3.当血标本中出现血红蛋白C时可能会造成血红蛋白A2低于参考值。9.4.5.当每个分析循环结束，操作者必须启动CAPILLARYS系统的“待命”或“关闭”程序，方便保存现在状态的毛细管电泳成果。关机10.1.电泳全部结束，在状态窗口显示“READY”下，执行关机程序“SHUTDOWNINSTRUMENT”，仪器自行冲洗，排气，复位等。10.2.约15分钟屏幕显示“Offline”，此时可关闭毛细管电泳仪电源，然后关闭电脑。10.3.打开电泳仪左盖，取出全部试剂架。10.4.关闭仪器总电源开关，按每日保养规定对仪器进行保养。10.5.用仪器防尘罩盖好仪器。10.6.如果仪器如较长久（超出一周）停用，请用蒸馏水替代试剂，使用特别关机程序。Capillarys→Specialcycles→ShutdownwithrinsingofthehydraulicswithH2O10.7.仪器如须更址,运输,一定要进行特殊打包运输关机程序解决。Capillarys→Specialcycles→shutdownandpreparationforshipment10.8.如果运用特别关机或打包运输关机程序后再次开机，一定要在开机输入密码后选择First-washonl