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荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第1页研究内容

该试验对荔枝果肉多酚氧化酶提取和初步纯化进行研究,方便对果肉POD性质作深入研究,拟为处理荔枝深加工中酶促褐变问题提供理论。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第2页POD活性测定方法

参考陈贻竹和王以柔方法,并稍作修改。POD测定系统为3mL,其中含2.4mL磷酸缓冲液(pH7.0)、0.1mL1%过氧化氢、0.4mL1%愈创木酚。加入0.1mL酶液后开启反应,于波长470nm和室温下统计2min内OD值改变。一个酶单位(u)定义为在测定条件下每分钟引发光密度改变0.001所需酶量。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第3页不一样品种荔枝果肉过氧化物酶(POD)活力

荔枝品种间酶活性差异显著,从47U/g·min~1428U/g·min之间。其中青荔POD活力最高,玉荷包最低。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第4页提取时间对POD酶活影响在提取时间10min时间内,酶活仅为763U/mL,伴随提取时间延长,POD酶活有所提升,当提取时间延长至30rain时,酶活增加到l177U/mL。伴随浸提时间深入延长,POD酶活几乎保持不变。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第5页提取液离子浓度对POD酶活影响

伴随离子浓度逐步增加,提取液酶活不停增大;当提取液离子浓度增加到0.3mol/L时,提取液酶活到达最大值:而伴随离子浓度深入增大,酶活则呈下降趋势。当提取液为蒸馏水(离子浓度为0)时,提取液酶活最低。普通情况提取酶活时应选取适当缓冲液体系。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第6页提取液pH值对POD酶活影响

当提取液pH值分别为5和7时候,提取酶活都到达峰值。由POD酶学性质可知,pH值5是POD最适反应pH。这可能是造成提取液pH为5时,提取酶活也比较大原因之一。但因为POD在pH为5时,酶活稳定性不高,所以选取pH7为提取液最正确pH值。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第7页提取液料液比对POD酶活影响

伴随料液比不停增加,提取液酶活不停增大。这主要是因为料液比不停增加时,POD酶充分溶出,酶活增大;另首先,料液比增大也使POD酶液稀释,酶活有所降低。当料液比为l:15(g:mL)时,酶活到达较大值,而伴随料液比继续增大,酶活改变差异不显著。荔枝果肉过氧化物酶提取和初步纯化第8页提取最正确条件1)用丙酮粉法缓冲液提取过氧化物酶,POD酶活最正确提取时间为30min,当提取液离子浓度为0.3mol/L,POD酶活最高;提取液最正确提取pH为7;最适料液比为1:15(g:mL)。2)在16个被测荔枝品种中,白糖罂多酚氧化酶活力最强,为112U/g·min,而玉荷包最弱,仅为6U/g·min清荔过氧化物酶活力最强,为1542U/g·

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