王金发《细胞生物学》课件第章minimizer

CHAPTER2

ExperimentalApproachesforStudyingCells1百度文库不能分享？不知道为什么百度文库不能分享，那就不上传了。2OUTLINE2.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY2.2TECHNIQUESOFCYTOCHEMISTRY2.3TECHNIQUESOFCELLSORTING2.4CELLENGINEERING2.5TECHNIQUESOFISOLATION2.6METHODSOFMOLECULARBIOLOGY3普通光学显微镜42.1TECHNIQUESOFMICROSCOPY2.1.1TheLightMicroscope

Resolvingpower,R

显微镜的数值孔径

(numericaperture，NA)

放大率(magnification,M)5波长与分辨率6

2.1.2光镜标本制备技术细胞染色技术

组织固定和切片技术

细胞化学技术利用Feulgen反应可特异性检测细胞中DNA。2.1.3常用光学显微镜

◆普通双筒显微镜

(binoularmicroscope)

◆荧光显微镜

(fluorescencemicroscope)

◆相差显微镜

(phasecontrastmicroscope)7

2.1.3常用光学显微镜◆倒置显微镜■物镜与照明系统的位置颠倒。■集光器与载物台之间的工作距离提高,可以放置培养皿、培养瓶等容器,直接对培养的细胞进行照明和观察。8倒置显微镜9

2.2电子显微镜

(Electronmicroscope)

1932年德国学者MaxKnolls和ErnstRuska用波长比光短得多的电子作光源,发明了第一台电子显微镜，大大提高了显微镜的分辨率，开拓了超微世界。102.2.1电子显微镜概述电子显微镜的基本结构

电子显微镜基本结构由三大部分组成:●电子光学系统由照明系统、标本室、成像系统、观察窗和记录用的照相机等组成；●真空系统是保持电镜的真空度；●电子学系统即供电系统，需要高压稳压。11电子染色

标本对电子的散射能力取决于其组成元素的原子序数,原子序数越高,散射的电子越多,反差就越大。生物分子是由一些原子序数很低的轻元素(氢、氧、碳、氮等)组成的,它们散射电子的能力很弱,在电镜下几乎不存在明暗反差。为使生物样品加大反差,就要进行染色,即用重金属增加电子散射能力,称为电子染色。12电镜样品的制备132.2.2TransmissionElectronMicroscope◆冰冻蚀刻术(freeze-etching)是专门观察样品外表面的投影复型术。14冰冻蚀刻技术15

2.2.3ScanningElectronMicroscope

原理：

目前一般扫描电镜的分辨率约60～100Å(6～10nm)。2.2.4ScanningTunnelingMicroscope,STM◆基本原理2.2.4扫描隧道显微镜

扫描隧道显微术在生命科学中的应用

◆DNA结构研究；

◆胶原、纤维和蛋白质结构研究；

◆细胞膜表面结构的研究。16扫描隧道显微镜工作原理17扫描隧道电镜下的DNA双螺旋18

2.3TECHNIQUESOF

CYTOCHEMISTRY

2.3.1酶细胞化学技术

酶细胞化学技术就是通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位。2.3.2免疫细胞化学技术

免疫荧光技术

免疫电镜技术192.4饲Radi从oaut副ogra悠phy放射自显诸影的原理卵是利用放闸射性同位计素所发射委出来的带指电离子(血α或β离猴子)作用旅于感光材依料的卤化纤银晶体,订从而产生股潜影。这驴种潜影可貌用显影液抗显示,成蝴为可见的史“像”。灯因此,它丽是利用卤镇化银乳胶铅现象,检带查和测量著放射性的肥一种方法谊。20放射自显谅影术212.5喜分析身细胞学衰技术2.5讨.1捡流式饲细胞术(Fl荡ow隶cyt茄ome斩try羞)流式细钩胞器(Fl民ow伯cyt工ome境ter远,FC松M)22流式细留胞术23细胞分选24细胞标览记25染色体袜分选26染色体蹲标记272.6北细胞竖工程技黎术

(租Cel全lE异ngi纷nee雕rin傅g)2.6升.1保细胞培腥养体外细胞北培养的条盲件无血清馒培养∶环境因素∶无菌环恒境、合葡适的温峡度、一润定的渗晶透压和气杀体环境潮、O2和CO2。后者对扰于维持细胞滨培养液毁的酸碱畜度十分俩重要。代谢物哪和废物秧排除：28Knoc未kout虑Mic歪eThe蔬te富chn企iqu袭eu沃sed芳to欢ge还ner筛ate寨kn侄ock污out朋mi米ce余was效de网vel臣ope赖di芹nt浩he稿lat感e1呜980叶sb朽yM融arl登oC以ape劣cch铲ia符tt家he素Uni祸ver拒sit敌yo润fU齿tah嫌.实验分碎三步∶◆构建谱重组体瓜；◆转基因启敲除；◆筛选攀。29基因敲环除30基因敲除饿示意图（1）31基因敲除唇示意图（2）32基因敲除植原理33Kno修cko喝ut呈Mic拐e34未来的生谅物技术35用这个要榜好很多的我们要钓学习，碌就得想鬼方法！36谢谢观看/欢迎下载BY饥FAI录TH笛IM荐EAN帆A他VIS驻ION浮OF战GO摔OD诸ONE咽CH愤ERI雾SHE成SA友ND侨THE宿EN形THU址SIA盐SM六TH