分解纤维素的微生物的分离课件(自制)电子教案

专题(zhuāntí)二微生物的培养与应用课题(kètí)3分解纤维素的微生物的分离**第一页，共38页。一.基础知识㈠.纤维素与纤维素酶1.纤维素纤维素是一种(yīzhǒnɡ)由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。第二页，共38页。思考：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质(wùzhì)，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们(tāmen)能够产生纤维素酶。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然(tiānrán)产物。第三页，共38页。2.纤维素酶

纤维素酶是一种(yīzhǒnɡ)复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纤维素一.基础知识㈠.纤维素与纤维素酶第四页，共38页。能分解纤维素的微生物，有各种(ɡèzhǒnɡ)细菌、真菌和少数放线菌。一.基础知识㈠.纤维素与纤维素酶3.纤维素的分解(fēnjiě)：第五页，共38页。一.基础知识㈡.纤维素分解(fēnjiě)细菌的筛选：1.方法(fāngfǎ)：刚果红染色法。第六页，共38页。刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生(chǎnshēng)透明圈来筛选纤维素分解菌。2.原理(yuánlǐ)：一.基础知识㈡.纤维素分解细菌(xìjūn)的筛选：第七页，共38页。该方法可以通过(tōngguò)颜色反应直接筛选。一.基础知识㈡.纤维素分解细菌(xìjūn)的筛选：3.优点(yōudiǎn)：第八页，共38页。第九页，共38页。二.实验设计与操作(cāozuò)㈠.实验设计：土壤(tǔrǎng)取样选择(xuǎnzé)培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落第十页，共38页。①分布(fēnbù)环境1、土壤(tǔrǎng)取样：富含纤维素的环境(huánjìng)中操作步骤由于生物适应一定的环境，环境对生物有选择作用，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。②原因第十一页，共38页。③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累(jīlěi)的枯枝败叶等。④讨论:如果找不到(bùdào)合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存(shēngcún)的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。第十二页，共38页。2、选择(xuǎnzé)培养增加纤维素分解菌的浓度(nóngdù)，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。①目的(mùdì)：阅读书本P29纤维素分解菌的选择培养基配方，回答问题。第十三页，共38页。答：用牛肉膏蛋白(dànbái)胨培养基与之对照。或者将纤维素改为葡萄糖。2、选择(xuǎnzé)培养②制备(zhìbèi)选择培养基：A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？答：是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂）B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？答：有选择作用，本配方中以纤维素作为唯一碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用第十四页，共38页。称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养1～2d，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约5mL），转移至另一瓶新鲜(xīnxiān)的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。③操作(cāozuò)：2、选择(xuǎnzé)培养第十五页，共38页。提示：在选择培养的条件(tiáojiàn)下，可以使那些能够适应这种营养条件(tiáojiàn)的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件(tiáojiàn)的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。〖旁栏思考题〗为什么选择(xuǎnzé)培养能够“浓缩”所需的微生物？第十六页，共38页。按照课题1的稀释(xīshì)操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释(xīshì)101～107倍。3.梯度(tīdù)稀释第十七页，共38页。4.将样品涂布到鉴别(jiànbié)纤维素分解菌的培养基上⑴制备(zhìbèi)鉴别培养基:配方见书本(shūběn)29页。操作过程见课题1（2）涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置培养。第十八页，共38页。5.刚果红染色法方法一：先，再加入刚果红进行(jìnxíng)颜色反应。方法二：在时就加入刚果红。培养(péiyǎng)微生物倒平板(píngbǎn)第十九页，共38页。〖旁栏思考题〗这两种方法各有哪些优点(yōudiǎn)与不足？染色法优点缺点方法一方法二颜色(yánsè)反应基本上是纤维素分解菌的作用操作繁琐刚果红会使菌落之间发生(fāshēng)混杂操作简便不存在菌落混杂问题1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。第二十页，共38页。在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－370C培养，可获得(huòdé)纯化培养。6、纯化(chúnhuà)培养第二十一页，共38页。提示：课题2是将土样制成的菌悬液直接(zhíjiē)涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培养基上，直接(zhíjiē)分离得到菌落。本课题先通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培养基上。其他步骤基本一致。〖旁栏思考题〗本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些(nǎxiē)异同？第二十二页，共38页。第二十三页，共38页。㈡.操作过程：1.土壤取样：采集土样时，应选择富含纤维素的环境。若找不到合适环境，可将滤纸埋在土壤中一个月左右，也会有能分解纤维素的微生物生长。〖旁栏思考题〗为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？答：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用，只有在纤维素含量丰富的环境中纤维素分解菌的含量才会高于其它普通环境，从而提高获得(huòdé)目的微生物的几率。〖旁栏思考题〗将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？答：人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。第二十四页，共38页。2.选择培养⑴.选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保(quèbǎo)能够从样品中分离到所需要的微生物。第二十五页，共38页。⑶选择培养：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至(zhízhì)培养液变浑浊。也可重复选择培养。第二十六页，共38页。课题(kètí)成果评价（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落(jūnluò)：对照的培养基在培养过程中没有菌落(jūnluò)生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落(jūnluò)，则说明可能获得了分解纤维素的微生物（二）分离的结果是否一致：由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。第二十七页，共38页。1.培养流感病毒时，应选用()A．固体培养基

B．含有多种无机盐的培养液C．活的鸡胚

D．无菌的牛肉汤2．微生物（除病毒外）需要从外界(wàijiè)吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法正确的是()A．乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的

B．微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子

C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利D．生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足CD第二十八页，共38页。3．在接种操作的过程(guòchéng)中，不正确的是()A．要将接种环灼烧灭菌

B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C．将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位

D．接种后还要将管口灭菌加塞4．高压蒸气灭菌的原理是()A．高压使细菌DNA变性

B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌

D．高温使细菌DNA变性CB第二十九页，共38页。5．在105稀释度下，平板(píngbǎn)上生长的平均菌落数为50则每克样品中的菌落数是………()A．5×107B．50C．5×108D．50×36．下列属于菌落特征的是…………()①菌落的形状②菌落的大小③菌落的多少④隆起程度⑤颜色⑥有无荚膜A．①②③④B．①②④⑤C．②③④⑥D．①②③④⑤⑥7．能排除培养基是否有杂菌污染的方法是……()A．将未接种的培养基放在实验桌上培养B．将未接种的培养基放在窗台上培养C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养ABC第三十页，共38页。8、(20分)某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(xìjūn)(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：(1)培养基中加入化合物A的目的(mùdì)是筛选，这种培养基属于培养基。目的(mùdì)菌

选择性

第三十一页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题(wèntí)：（北京卷）(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的，实验(shíyàn)需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是。化合物A异养需氧第三十二页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员(rényuán)用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：(3)培养若干天后，应选择(xuǎnzé)培养瓶中化合物A含量的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量。减少(jiǎnshǎo)

增加

第三十三页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解(jiànɡjiě)的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解(jiànɡjiě)化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：(4)转为固体培养(péiyǎng)时，常采用方法接种，获得单菌落后继续筛选。划线(huáxiàn)第三十四页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的(mùdì)菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：(5)若研究“目的菌”的生长(shēngzhǎng)规律，将单个菌落进行液体培养，可采用的方法进行计数，以时间为横坐标，以为纵坐标，绘制生长(shēngzhǎng)曲线。细菌(xìjūn)数目的对数第三十五页，共38页。某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机(yǒujī)化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题：(6)实验(shíyàn)结束后，使用过的培养基应该进行处理后，才能倒掉。灭菌(mièjūn)第三十六页，共38页。根据用途分选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进(cùjìn)所需要的微生物的生长鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。例如：伊红和美蓝,和大肠杆菌的代谢产物结合,使菌落呈黑色（老教材说法：深紫色,带有金属光泽）,鉴别大肠杆菌第三十七页，共38页。85.每一年，我都更加相信生命的浪费是在于：我们没有献出爱，我们没有使用力量，我们表现出自私的谨慎，不去冒险，避开痛苦，也失去了快乐。――[约翰·B·塔布]86.微笑，昂首阔步，作深呼吸，嘴里哼着歌儿。倘使你不会唱歌，吹吹口哨或用鼻子哼一哼也可。如此一来，你想让自己烦恼都不可能。――[戴尔·卡内基]87.当一切毫无希望时，我看着切石工人在他的石头上，敲击了上百次，而不见任何裂痕出现。但在第一百零一次时，石头被劈成两半。我体会到，并非那一击，而是前面的敲打使它裂开。――[贾柯·瑞斯]88.每个意念都是一场祈祷。――[詹姆士·雷德非]89.虚荣心很难说是一种恶行，然而一切恶行都围绕虚荣心而生，都不过是满足虚荣心的手段。――[柏格森]90.习惯正一天天地把我们的生命变成某种定型的化石，我们的心灵正在失去自由，成为平静而没有激情的时间之流的奴隶。――[托尔斯泰]91.要及时把握梦想，因为梦想一死，生命就如一只羽翼受创的小鸟，无法飞翔。――[兰斯顿·休斯]92.生活的艺术较像角力的艺术，而较不像跳舞的艺术；最重要的是：站稳脚步，为无法预见的攻击做准备。――[玛科斯·奥雷利阿斯]93.在安详静谧的大自然里，确实还有些使人烦恼.怀疑.感到压迫的事。请你看看蔚蓝的天空和闪烁的星星吧!你的心将会平静下来。[约翰·纳森·爱德瓦兹]94.对一个适度工作的人而言，快乐来自于工作，有如花朵结果前拥有彩色的花瓣。――[约翰·拉斯金]95.没有比时间更容易浪费的,同时没有比时间更珍贵的了，因为没有时间我们几乎无法做任何事。――[威廉·班]96.人生真正的欢欣，就是在于你自认正在为一个伟大目标运用自己；而不是源于独自发光.自私渺小的忧烦躯壳，只知抱怨世界无法带给你快乐。――[萧伯纳]97.有三个人是我的朋友爱我的人.恨我的人.以及对我冷漠的人。爱我的人教我温柔；恨我的人教我谨慎；对我冷漠的人教我自立。――[J·E·丁格]98.过去的事已经一去不复返。聪明的人是考虑现在和未来，根本无暇去想过去的事。――[英国哲学家培根]99.真正的发现之旅不只是为了寻找全新的景色，也为了拥有全新的眼光。――[马塞尔·普劳斯特]100.这个世界总是充满美好的事物，然而能看到这些美好事物的人，事实上是少之又少。――[罗丹]101.称赞不但对人的感情，而且对人的理智也发生巨大的作用，在这种令人愉快的影响之下，我觉得更加聪明了，各种想法，以异常的速度接连涌入我的脑际。――[托尔斯泰]102.人生过程的景观一直在变化，向前跨进，就看到与初始不同的景观，再上前去，又是另一番新的气候――。[叔本华]103.为何我们如此汲汲于名利，如果一个人和他的同伴保持不一样的速度，或许他耳中听到的是不同的旋律，让他随他所听到的旋律走，无论快慢或远近。――[梭罗]104.我们最容易不吝惜的是时间，而我们应该最担心的也是时间；因为没有时间的话，我们在世界上什么也不能做。――[威廉·彭]105.人类的悲剧，就是想延长自己的寿命。我们往往只憧憬地平线那端的神奇【违禁词，被屏蔽】，而忘了去欣赏今天窗外正在盛开的玫瑰花。――[戴尔·卡内基]106.休息并非无所事事，夏日炎炎时躺在树底下的草地，听着潺潺的水声，看着飘过的白云，亦非浪费时间。――[约翰·罗伯克]107.没有人会只因年龄而衰老，我们是因放弃我们的理想而衰老。年龄会使皮肤老化，而放弃热情却会使灵魂老化。――[撒母耳·厄尔曼]108.快乐和智能的区别(qūbié)在于：自认最快乐的人实际上就是最快乐的，但自认为最明智的人一般而言却是最愚蠢的。――[卡雷贝·C·科尔顿]109.每个人皆有连自己都不清楚的潜在能力。无论是谁，在千钧一发之际，往往能轻易解决从前认为极不可能解决的事。――[戴尔·卡内基]110.每天安静地坐十五分钟·倾听你的气息，感觉它，感觉你自己，并且试着什么都不想。――[艾瑞克·佛洛姆]111.你知道何谓沮丧---就是你用一辈子工夫，在公司或任何领域里往上攀爬，却在抵达最高处的同时，发现自己爬错了墙头。－－[坎伯]112.「伟大」这个名词未必非出现在规模很大的事情不可；生活中微小之处，照样可以伟大。――[布鲁克斯]113.人生的目的有二：先是获得你想要的；然后是享受你所获得的。只有最明智的人类做到第二点。――[罗根·皮沙尔·史密斯]114.要经常听.时常想.时时学习，才是真正的生活方式。对任何事既不抱希望，也不肯学习的人，没有生存的资格。――[阿萨·赫尔帕斯爵士]115.旅行的精神在于其自由，完全能够随心所欲地去思考.去感觉.去行动的自由。――[威廉·海兹利特]116.昨天是张退票的支票，明天是张信用卡，只有今天才是现金；要善加利用。――[凯·里昂]