关于骨质增生的小鼠实验

白马寺消痛贴化瘀消炎作用的实验研究山东中医药大学2013-01-30骨质增生与白马寺消痛贴骨质增生症又称骨刺、骨关节炎或骨关节退行性病变，属于祖国医学“痹证”的范畴，为中老年人的常见病、多发病，近年来发病率呈上升趋势。其机理除神经根机械性受压外，还与血淤、痰湿等密切相关。扆志德认为骨质增生多由肾虚、痰阻或血淤所致，治疗应重在祛痰通络、活血化淤，兼以补肾软坚。白马寺消痛贴具有消炎、祛风散寒、疏通血脉、祛除血淤之功效，临床可用于治疗颈椎、腰椎骨质增生。且该袪痛膏为软膏剂，可以避免肝脏的“首过效应”和胃肠道的破坏效应，降低药物的毒性和副作用，具有给药方便的优点。为评价该药的治疗作用，本实验从抗炎和活血化淤两方面对白马寺消痛贴进行了以下主要药效学实验研究。材料、药物与仪器材料实验动物昆明种小鼠，体重（20g±2）g,大鼠，体重(200±20)g，均由山东大学实验动物中心提供，合格证号分别为：鲁动质字D20021023号、D20021024号。药物与试剂白马寺消痛贴，北京济德汉方国际中医产品研究院研发；阿司匹林肠溶片，山东鲁抗辰欣药业有限公司生产，批号：03051912；硫化钠，济宁市化工研究所生产，批号：970609；冰醋酸（分析纯），淄博化学试剂厂生产，批号：980715；伊文思蓝，Fluka进口分装，上海化学试剂采购供应站分装，批号：801102；琼脂，广州医药站试剂公司生产，批号：910817；巴豆油致炎液，自配；蛋清，自配。仪器:GB3031千电子天平，瑞士梅特勒公司制造；T1000型电子天平，美国双杰兄弟集团有限公司常熟市双杰测试仪器厂制造；DDL-5型低速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂制造；WJF2100型可见分光光度仪，外商独资上海合利有限公司制造；FASCO-3010型全自动血流变快测仪，重庆大学维多生物工程研究所生产。方法与结果抗炎作用白马寺消痛贴对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀的影响小鼠50只，雄性，体重（20±2）g，小鼠颈部、腰部用8%硫化钠饱和溶液脱毛，脱毛面积：颈部约1.2cm*1cm，腰部约2.0cm*1.5cm。次日根据体重将小鼠随机分为正常对照组、阿司匹林组、白马寺消痛贴大、中、小剂量组，共5组。正常对照组在颈部、腰部脱毛区涂抹白马寺消痛贴赋形剂，阿司匹林组0.2g/kg灌胃给药，白马寺消痛贴组5,10,20g/kg在脱毛区涂抹药物后，用纱布、胶布固定。1次/d，连续8d。末次给药后1h，用微量移液器，将2%巴豆油致炎液50位l涂在小鼠左耳前后两面，右耳作空白对照，4h后脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用电子天平称重，以左耳重=右耳重作为肿胀度。比较给药组和正常对照组肿胀度的差异，并按公式（左耳重=右耳重）:右耳重计算出各给药组抑制肿胀率。结果说明，白马寺消痛贴能明显对抗巴豆油所致小鼠耳肿胀，经统计学处理，给药组耳廓肿胀度明显低于正常对照组，且药物的肿胀抑制率与剂量成依赖性关系。白马寺消痛贴对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响小鼠50只，雌雄各半，体重（20±2）g，小鼠颈部、腰部脱毛，脱毛面积：颈部约1.2cm*1cm，腰部约2cm*1.5cm。次日根据体重将小鼠随机分为正常对照组、阿司匹林组、白马寺消痛贴大、中、小剂量组，共5组。正常对照组在颈部、腰部脱毛区涂抹白马寺消痛贴赋形剂，阿司匹林组按0.2g/kg剂量灌胃给药，白马寺消痛贴5,10,20g/kg组在脱毛区涂抹药物后，用纱布、胶布固定。1次/d，连续8d，末次给药1h后，尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水液0.1ml/10g，立即腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/只。20min后脱臼处死小鼠，剪开腹部皮肤，注入生理盐水5ml，轻揉腹部约1min，抽出洗涤液，3000r/min,离心15min，在590nm处测定吸收度（OD值），评价药物对毛细血管通透性的影响。白马寺消痛贴对蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响wistar大鼠50只，雌雄各半，体重（200±20）g，颈部、腰部用8%硫化钠饱和溶液脱毛，脱毛面积：颈部约3cm*2.5cm，腰部约8.5cm*6.0cm。脱毛24h后根据体重将大鼠随机分为正常对照组，阿司匹林组0.25g/kg，白马寺消痛贴4,8,16g/kg组。阿司匹林组灌胃给药，正常对照组、白马寺消痛贴组分别在颈部、腰部脱毛部位涂抹赋形剂和受试物，并用纱布、胶布固定。1次/d，连续7d，第8天，用玻璃容器法测定每鼠右后肢正常足跖容积，用记号笔在大鼠右后肢踝关节周围做一标记，将大鼠右后肢浸入容器，使标记与液面重叠，多余液体自容器内溢出。取出大鼠后肢，可见玻璃容器中液面下降，其下降容积即为足跖容积。测量正常足跖容积后，各组大鼠给药，药后1h，分别在大鼠右后肢足跖皮下注射100%蛋清0.1ml/只致炎。分别在致炎后1,2,4,6h各测一次足跖容积，记录结果，并计算肿胀率%。白马寺消痛贴对琼脂所致大鼠肉芽肿的影响大鼠50只，雄性，体重160-180g，大鼠颈部、腰部用8%硫化钠饱和溶液脱毛，脱毛面积颈部约3.0cm*2.5cm，腰部约8.5cm*6.0cm。脱毛24h后，在大鼠背部皮下注射2%琼脂水溶液2ml，制造琼脂肉芽肿模型。造模后24h根据大鼠体重随机分为5组，模型对照在颈部、腰部脱毛区涂抹白马寺消痛贴赋形剂，阿司匹林组0.25g/kg灌胃给药，白马寺消痛贴组4,8,16g/kg在脱毛区涂抹药物后，用纱布、胶布固定。1次/d，连续15d，末次给药后1h，处死大鼠，剖取肉芽肿，电子天平称湿重。由结果可见：模型对照组肉芽增生明显，白马寺消痛贴低、中、高剂量组均能明显抑制肉芽增生（p<0.001），且给药组随药物剂量增加抑制肉芽肿增生的作用加强，表明白马寺消痛贴能明显抑制琼脂所致大鼠肉芽肿的形成。白马寺消痛贴对炎症模型大鼠血液流变学的影响大鼠60只，雄性，体重160-180g，大鼠颈部、腰部用8%硫化钠饱和溶液脱毛，脱毛面积颈部约3.0cm*2.5cm、腰部约8.5cm*6.0cm。脱毛24h后，在大鼠背部皮下注射2%琼脂水溶液2ml，制造琼脂肉芽肿模型。造模后24h根据大鼠体重随机分为6组，正常对照组、模型对照在颈部、腰部脱毛区涂抹白马寺消痛贴赋形剂，阿司匹组0.25g/kg灌胃给药，白马寺消痛贴组4,8,16g/kg在脱毛区涂抹药物后，用纱布、胶布固定。1次/d，连续15d，末次给药后1h，颈静脉取血，进行血液流变学测定。由结果可见，模型对照组与正常对照组相比，全血黏度显著升高，说明血淤动物造模成功。给药15d后，白马寺消痛贴低、中、高剂量组血液流变学全血黏度与模型对照组比较有显著性差异，表明白马寺消痛贴组能明显降低琼脂所致大鼠肉芽肿慢性炎症的全血黏度，改善损伤组织的血液供应，减轻炎症反应，促进炎症的吸收，具有一定的活血化淤作用。讨论

骨质增生多发生在负重较大和动力传动的关节端侧缘部位，该病的临床表现，是以骨关节软骨组织退行性病变为特征，以局部疼痛、肿胀、关节畸形、活动功能障碍、肢体麻痹等症状等为主症。是多种原因所致软组织变性、挛缩，局部血液循环受阻，内压增高，关节滑膜产生炎症、增生肥厚，关节周围软组织发生病变，从而压迫周围组织、神经及血管，产生疼痛，关节活动受限等。现代医学认为，血液黏度增高可影响微循环的有效灌注，产生局部缺血症状；但缺血时组织缺氧，pH下降，这可使红细胞变形性降低；组织血流不畅时，细胞容易聚集，导致血栓形成，血管栓塞，反过来会使血液黏度进一步升高，形成恶性循环。这是骨质增生病变发展的重要环节。本药效学实验是以骨质增生引起的常见的临床表现，设计并观察了不同剂量白马寺消痛贴的抗炎和消肿祛淤的药理作用。结果表明，白马寺消痛贴具有明显的抗炎及活血化淤作用，能明显抑制巴豆油引起的小鼠耳廓肿胀，且呈现明显的量效关系；可以拮抗醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性亢进（P<0.001），减少炎性介质的渗出，测得给药组小鼠腹腔洗涤液的OD值随给药剂量的增大而降低；可以抑制由蛋清引起的大鼠足跖肿胀（p<0.05）；能抑制大鼠琼脂肉芽肿（p<0.001），表明白马寺消痛贴具有抑制结缔组织增生的作用；能明显降低慢性炎症模型