临床免疫检验实验课件：IL-2的测定-酶联免疫吸附试验_第1页
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文档简介

1、实验课要求预习不迟到、早退、不旷课、有事请假穿白大褂、注意自我防护不喧哗，不做与实验无关的事不要急于开始做实验不要急于写实验报告实验完成后，自己把桌面收拾干净值日要求：擦桌子，拖地、擦黑板、倒垃圾、关灯和门窗（劳动委员负责安排和监督）认真完成实验报告实验报告的要求题目、原理、主要试剂与器材、步骤、结果（现象）、结论、注意事项、讨论（心得体会）班级、姓名、学号由学习委员统一收齐，按学号从小到大顺序放好，在下一周上课时交自己写、书写整齐订成一本或每次分开IL-2的测定酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ，ELISA） 酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附

2、试验为一种固相酶免疫测定技术先将已知抗原或抗体包被于固相载体表面，与待检样品中的相应抗体或抗原发生反应，再加入酶标记抗体或抗原与免疫复合物结合，最后加入酶的作用底物，根据产物颜色的深浅或测定其A值，可进行定性或定量分析。实验原理双抗体夹心法（一步法）在一定范围内，显色深浅与IL-2的含量成正相关主要试剂和器材待测标本1和2ELISA试剂盒： IL-2标准品（0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0ng/ml）、聚苯乙烯微孔板、酶结合物、显色剂A、显色剂B、终止液、洗液 加样：将微孔板编号，按下表加样加酶结合物：每孔50l，轻轻摇动几下，3730min。洗涤：弃孔中液体，各孔加满洗涤液静

3、置20s，弃之，反复5次，拍干。 显色：加入底物50l，随即加入显色剂50l，轻轻摇动几下， 3710min 。加终止液：每孔加50l。比色：用酶标仪读取OD值，波长为450nm。孔号12345678加入物(ng/ml)025102040待测1待测2加入量(l)5050505050505050实验步骤实验结果结果记录：按下表记录结果绘制标准曲线：以OD450值为横坐标，IL-2标准品浓度为纵坐标，绘制标准曲线。求出待测标本1和2中IL-2的浓度。 孔号12345678加入物(ng/ml)025102040待测1待测1OD450nm?标本1：4.5 ng/ml标本2：25.5 ng/ml注意事项试剂盒从冰箱中取出后，室温平衡30min左右再开启使用 。加样时每一步要一个人完成，要加到微孔的底部，加样量要准确。标准品从低到高的顺序加，加完之后切勿盖错盖子 。洗涤要严格按照要求，彻底洗涤，防止假阳性，但不可冲洗过猛过急导致假阴性。 严格控制反应时间和显色时间。 应用与评价IL-2最主要的生物活性是刺激T细胞的增殖，因此IL-2的测定对机体的免疫功能有一定的监测作用。用该方法检测IL-2的优缺点优点 特异性强，这是标记免疫技术的共同特点。使

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