实验4. 酶的特异性ppt课件

1、实验四实验四 酶的特异性酶的特异性生物化学实验之生物化学实验之1;.2【实验目的实验目的】 学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。【实验原理实验原理】 酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。 淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的

2、葡萄糖和果糖。生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。 Benedict试剂（含有试剂（含有Cu 2+）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。沉淀。3【器材及试剂器材及试剂】（一）器材：（一）器材： 1. 恒温水浴锅恒温水浴锅 2. 试管及试管架试管及试管架 3. 离心机离心机 4. 吸量管吸量管 5.烧杯、量筒烧杯、量筒 、漏斗等、漏斗等（二）试剂：（二）试剂： 1. 2%蔗糖蔗糖 2. 1%淀粉（内含淀粉（内含0.3%的的NaCl） 3. 唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液蔗糖酶

3、溶液 5. Benedict试剂试剂4【实验步骤实验步骤】（一）淀粉酶的特异性（一）淀粉酶的特异性1.唾液淀粉酶溶液的制备：唾液淀粉酶溶液的制备： 先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管1支，支，取唾液（无泡沫）约取唾液（无泡沫）约2ml，蒸馏水，蒸馏水20倍稀释，倍稀释，备用。备用。52.取试管取试管5支，标号，按下表所列的次序操作：支，标号，按下表所列的次序操作：试剂试剂试管编号试管编号123451%淀粉溶液（淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液（蔗糖溶液（ml）1.01.0唾液淀粉酶（唾液淀粉酶（ml）1.01.01.0蒸馏水（蒸馏水（ml）1.01.01.06

4、 3. 摇匀，置摇匀，置37恒温水浴保温恒温水浴保温10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict试剂试剂2ml，再放沸水浴再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。观察各管颜色变化，并解释实验结果。 7(二二) 蔗糖酶的特异性蔗糖酶的特异性1. 蔗糖酶溶液的制备：蔗糖酶溶液的制备： 取活性干酵母取活性干酵母1.0g，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸馏水至总体积约为再加蒸馏水至总体积约为20ml，过滤或离心，滤液或上清液备用。，过滤或离心，滤液或上清液备用。82. 取试管取试管5支，标号，按下表所列的次

5、序操作：支，标号，按下表所列的次序操作：试剂试剂试管编号试管编号123451%淀粉溶液（淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液（蔗糖溶液（ml）1.01.0蔗糖酶（蔗糖酶（ml）1.01.01.0蒸馏水（蒸馏水（ml）1.01.01.093. 摇匀，摇匀， 置置37恒温水浴保温恒温水浴保温10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict试剂试剂2ml，再放沸水浴，再放沸水浴5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。观察各管颜色变化，并解释实验结果。10【注意事项注意事项】 唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是5030

6、0倍。倍。【思考题思考题】 1、 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，实验结，实验结果会发生什么样的变化？果会发生什么样的变化？ 2、 酶作用的专一性有哪几种？酶作用的专一性有哪几种？11移液枪的使用移液枪的使用部分用具与试剂部分用具与试剂121314量程的调节量程的调节1.按照从大体积调为小体积的方法调节。按照从大体积调为小体积的方法调节。2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。注意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而注意：千万不要将旋钮旋出最大量程

7、，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。损坏了移液枪。微量移液器的使用方法微量移液器的使用方法1516枪头（吸液嘴）的装配枪头（吸液嘴）的装配在将枪头（在将枪头（pipette tips）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。17移液的方法移液的方法1.吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下面下23毫米。毫米。2.然后慢慢松开按钮回原点。然后慢慢松开按钮回原点。3.接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。最后松开按钮。181920移液器的正确放置移液器的正确放置使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹当移液器枪头里有液体时，切勿