拟南芥论文：拟南芥 突触结合蛋白 C2结构域 膜融合.doc

拟南芥论文：拟南芥synaptotagmin B基因的克隆及其功能初步研究【中文摘要】Synaptotagmin (SYT)是一种突触结合蛋白,在神经细胞分泌、神经递质传递过程中担当Ca2+.感受器的角色,调节细胞膜的融合。在结构上具有一个跨膜结构域(从羧基端到氨基端)、一个连接肽链和一个处于胞质中的C2结构域。植物基因组中也有类似syt C2结构域的基因。在模式生物拟南芥基因组中有六个syt相似基因。目前已有报道sytA在膜损伤修复以及调节胞吞作用和病毒运动蛋白细胞间运输等方面担负着重要功能,但是对于其余五种基因的功能鲜有报道。本文对拟南芥sytB基因的表达定位、生理功能等方面做了初步研究。在本实验中构建了1300:sytB promotor:GUS的转基因植株,用染色的方法观察了sytB在拟南芥组织中的定位。为了研究sytB的生理功能,购买了salk_016690、salk_133731、salk_079043三种T-DNA插入突变体,构建了1300：35s:sytB:GFP转基因过表达植株,并筛选出纯合体。利用T-DNA插入突变体和过表达株系,观察了sytB的异常表达所引起的植株的表型。实验结果显示,sytB主要在植株维管组织以及成熟的花粉中表达,sytB缺失突变体表现出花粉管的.【英文摘要】Synaptotagmin genes which exsit as a large family are one kind of Ca2+.sensor that regulate the menbrane fusion in synaptic vesicle exo/endocytosis or neurotransmitter release process. All syts share a common structure namely an N-terminal transmenbrane sequence jointed to a linker of viarable length, followed by two tandemly arranged, distinct C2 domains which louse around in cytoplasm. Genes with the similar sequences as well as domain architecture to C2 domains were also found in plant genomes. There is .【关键词】拟南芥 突触结合蛋白 C2结构域 膜融合【英文关键词】Arabidopsis synaptotagmin C2 domain menbrane fusion【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】拟南芥synaptotagmin B基因的克隆及其功能初步研究摘要3-4Abstract4第一章 文献综述8-191. C2结构域概述9-102. synaptotagmin10-182.1 脊椎动物synaptotagmin的功能及研究进展10-162.1.1 synaptotagmin家族成员的定位研究10-112.1.2 synaptotagmin的结构域112.1.3 synaptotagmin调节膜融合过程的分子机制11-142.1.4 synaptotagmin家族各亚型的生理作用14-162.2 拟南芥synaptotagmin的功能及研究进展16-182.2.1 sytA参与拟南芥抗冷胁迫过程中的质膜损伤修复16-172.2.2 sytA能保持质膜的完整以及细胞的生活力17-182.2.3 sytA调节植物病毒运动蛋白的胞间运动P183. 本研究的目的与意义18-19第二章 研究内容19-521. 材料19-211.1 植物材料191.2 菌株及载体191.3 主要酶类、药品与试剂191.4 抗生素及常用缓冲液、培养基的配制19-201.4.1 抗生素的配制19-201.4.2 常用溶液的配制201.4.3 常用培养基的配制201.5 常用仪器设备20-212. 方法21-322.1 分子生物学相关方法21-292.1.1 拟南芥总RNA的提取21-232.1.2 PCR232.1.3 拟南芥基因组DNA的提取23-242.1.4 目的基因的克隆24-252.1.5 DNA片段的回收和纯化252.1.6 载体构建25-272.1.7 农杆菌感受态细胞的制备和外源基因转化27-282.1.8 农杆菌介导的转基因方法-浸花法282.1.9 转基因种子的筛选及纯合体的获得28-292.2 原核表达蛋白质提取纯化方法292.2.1 融合蛋白的诱导表达292.2.2 蛋白纯化(GST柱亲合层析)292.3 花粉表型观察相关方法29-312.3.1 花粉体外萌发29-302.3.2 花粉活力检测302.3.3 苯胺蓝染色30-312.4 GUS染色31-322.4.1 染液配制312.4.2 染色步骤31-323. 结果32-483.1 sytB的分子生物学信息分析32-343.1.1 sytB氨基酸序列中含有信号肽和跨膜序列323.1.2 sytB的三级结构预测32-343.2 原核表达SYTB蛋白的提取与纯化34-363.2.1 原核表达载体的构建34-353.2.2 SYTB蛋白的提取与纯化35-363.3 sytB的组织定位研究36-393.3.1 sytB启动子序列的克隆36-373.3.2 真核表达载体构建37-383.3.3 1300-sytB-GUS转基因植株的获得383.3.4 sytB主要在脉管组织、成熟的花粉中表达38-393.4 获得sytB过表达转基因株系39-413.4.1 报告基因GFP的克隆39-403.4.2 真核表达载体构建403.4.3 获得sytB、sytB158、sytB601的过表达植株40-413.5 筛选得到T-DNA插入突变体纯合体41-443.5.1 纯合体的鉴定433.5.2 精确插入位点的鉴定43-443.5.3 纯合体中sytB基因表达量的鉴定443.6 纯合突变体的表型观察44-483.6.1 突变体与野生型根长比较44-453.6.2 突变体与野生型营养生长过程无明显差异45-463.6.3 sytB的缺失不影响花粉的活力但抑制了花粉管的生长速度46-483.6.4 syt