（医学课件）实验 凝集、沉淀反应

1、实验凝集和沉淀反应，1。实验目的，1 .熟悉凝集反应和沉淀反应的概念。2.了解单向琼脂扩散实验的原理、方法和应用。3.掌握直接凝集玻片法的原理、方法和应用。4.掌握双向琼脂扩散实验的原理、方法和结果判断。2，1。直接凝集：颗粒抗原与相应的抗体结合后肉眼可见的凝集现象。2.沉淀反应：在适当的条件下，可溶性抗原与相应的抗体结合而引起的沉淀现象。3、伤寒菌诊断血清、伤寒菌液、生理盐水、载玻片、接种环、记号笔、酒精灯；琼脂平板、冲头、针、毛细管滴管、待测血清、甲胎蛋白阳性血清、甲胎蛋白诊断血清(兔抗人甲胎蛋白)等。实验材料、实验内容1。直接凝集反应：玻片法(操作)2。沉淀反应：(1)单向琼脂扩散试验(

2、教学)，(2)双向琼脂扩散试验(操作)，4。抗原抗体反应也称为血清学反应，主要包括：1 .凝集反应2。沉淀反应3。补体参与反应4。中和反应5。免疫标记技术.凝集反应()概念颗粒抗原(细菌、细胞等)。)与相应的抗体结合，在一定条件下，出现可见的聚集体，这称为凝集反应。颗粒状的银也叫凝集素，相应的Ab也叫凝集素。6、原理玻片凝集试验是一种快速简单的检测方法，即抗原和抗体的反应在玻片上进行，是一种定性试验。用已知抗体检测未知抗原。在这个实验中，用伤寒杆菌的已知标准诊断血清鉴定未知细菌。直接凝集玻片法-菌株鉴定、材料、伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、玻片、接种环、蜡笔、酒精灯等。7，取一个干

3、净的载玻片，用蜡笔将其分成两等份，如下图所示；无菌操作，在带接种环的第一、二格中加入23环伤寒杆菌诊断血清和生理盐水；用接种环取待测菌液，分别涂于生理盐水和伤寒血清中，混合均匀；轻轻摇动载玻片，12分钟后观察结果。操作步骤，待测生理盐水溶液为阴性，待测伤寒血清溶液？直接凝集反应玻片法-菌株鉴定，8，生理盐水侧无凝集颗粒；肉眼可见的血清侧凝集块为阳性，而仍处于均匀乳化状态的凝集块为阴性。预防措施1。接种环在取出伤寒菌液前后应严格消毒，以避免假阳性。2、涂细菌时注意，先涂生理盐水一面，以免污染血清产生错误结果。3.摇动载玻片时，不要混合两个凹槽中的液体。结果与判断，直接凝集玻片法-菌株鉴定，9，经

4、典抗原-抗体反应之一。分类：琼脂扩散循环沉淀反应絮状沉淀反应免疫电泳，第二，沉淀反应：沉淀线或沉淀环，可溶性抗原，相应的抗体，10，琼脂扩散试验：琼脂是一种含有硫酸基团的多糖，它在高温下溶于水，冷却后固化，形成凝胶，是多孔结构，充满水，并允许各种抗原和抗体。它们以适当的比例相遇并沉淀，形成可见的沉淀区。单向琼脂扩散实验：只进行抗原或抗体扩散的定量实验，双向琼脂扩散实验：同时进行抗原和抗体扩散的定性实验，分类：11，(1)单向琼脂扩散实验(教学)，原理：将适当浓度的抗体预先均匀混合在琼脂中，制成琼脂平板，在适当的距离打孔，将可溶性抗原扩散到周围，在琼脂中与抗体相遇。沉淀环的直径与孔中的抗原浓度呈

5、正相关。根据沉淀环的直径，可以从标准曲线中找到待测样品中的抗原含量、12、单向琼脂扩散试验：抗原浓度、沉淀环直径平方、银、银、银、含抗体琼脂、1:10、1:20、1336040、1:80、银、未知、用于检测甲胎蛋白和乙肝表面抗原以辅助疾病诊断。14，材料：待测血清、甲胎蛋白阳性血清、甲胎蛋白诊断血清(兔抗人甲胎蛋白)、生理盐水、琼脂平板、穿孔器、针头、毛细管滴管和酒精灯。用双向琼脂扩散法测定甲胎蛋白和甲胎蛋白。甲胎蛋白是胚胎期肝细胞和卵黄囊合成的一种球蛋白，存在于胎儿血清中，出生后几乎消失。正常成人血清中仅含有极少量的甲胎蛋白，这是传统免疫学方法无法检测到的。当肝细胞癌变时，甲胎蛋白的含量增加

6、。测定血清甲胎蛋白有助于诊断原发性肝癌。15，1。琼脂平板的制备：将1%的盐水琼脂加热溶解，将5ml均匀涂抹在载玻片上。2.打孔：琼脂凝固后，用打孔器将琼脂打成梅花状，用针将琼脂从孔中取出。3.后盖：用酒精灯轻轻烘烤盘子底部，直到琼脂刚刚融化，并关闭孔的底部，以防止侧面泄漏。4.样品添加：将抗甲胎蛋白抗体添加至中间孔，将甲胎蛋白阳性对照添加至孔1和4，将待检测血清添加至孔2和3，并将生理盐水添加至孔5和6。5.反应：在湿箱中，37下24小时。抗甲胎蛋白抗体，双向扩散法测定血清中的甲胎蛋白，银，银，银？Ag？AB、16、3、4、2、1、5、6、1、4(阳性对照孔)在中心孔之间应该有清晰的乳白色沉淀线，而5、6(阴性对照孔)在它们之间应该没有沉淀线。如果在两个孔(待测血清)和中心孔之间出现沉淀线，并且一端与相邻阳性对照血清形成的沉淀线重合，则待测血清为阳性。如待测血清与中心孔出现沉淀线，但与阳性对照血清的沉淀线相交，则不能判断为阳性。如果24小时内待测血清与中心孔之间没有沉淀线，则为阴性。双向扩散法测定血清甲胎蛋白的实验结果。琼脂平板必须平整光滑(无气泡)，琼脂不应太厚；2.打孔时不要切边；3.样品应加满，不得溢出；4.合理分配秸秆，不应混淆银和Ab秸秆。双向扩散法测定血清甲胎蛋白的注意事项