DB12T 527-2014 奶牛结核病净化技术规范

67.120.10B

43DB12

T5272014

technical

cleaning

of

dairy

天津市市场和质量监督管理委员会

DB12/T

527—2014前 言本标准的编写符合GB/T

1.1-2009本标准的附录A为资料性附录。本标准由天津市畜牧兽医局提出。本标准起草单位：天津市动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：刘建文、任景江、徐继鹏、王志成、孙涛、李洁、刘莹、曹建新。IDB12/T

527—2014奶牛结核病净化技术规范1

范围（场）的维持。本规范适用于从事奶牛饲养的单位和个人。2

规范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB

16548

GB/T

18645-2002 动物结核病诊断技术《牛结核病防治技术规范》（农业部，农医发［2007］12号）3

术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1牛结核病 Bovine

牛结核病（

BTB）是由牛分枝杆菌（Mycobacterium

）引起的一种人兽共患的慢性传染病。3.2净化 Cleaning对某病发病地区采取一系列措施，达到消灭和清除传染源的目标。3.3变态反应 Allergy

Reaction以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。3.4γ-干扰素 Interferon

1DB12/T

527—2014γ-干扰素是指主要由淋巴细胞（如自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、CD4

和CD8

T淋巴细胞、效应T细胞）分泌的促炎性细胞因子。4 检测方法4.1 牛型结核分枝杆菌

试验）按

GB/T

18645-2002

4.2γ-

试验作为牛型结核分枝杆菌

皮内变态反应试验的补充试验（见附录

A）。5

净化措施5.1 检测5.1.1 成年牛每年春秋两季各进行一次检测。5.1.2 对奶牛群（场）存栏奶牛按

5.1.3 初生犊牛应于

20

100～120

日龄时，进行第二次检测。5.1.4 检测时，首先用牛型结核分枝杆菌

皮内变态反应试验进行检测。5.1.5凡牛型结核分枝杆菌

3

d-试验检测，如γ-

试验为阳性，按照本规范

5.3

3

个月进行复检。5.1.6连续两次检测均为阴性者视为阴性牛。5.2 隔离牛型结核分枝杆菌

-5.3 阳性牛的处理5.3.1 扑杀

5.3.2无害化处理 扑杀的结核病阳性牛，应按照

GB

5.4消毒5.4.1紧急消毒

烧碱以及其他相应的有效消毒方式。5.4.2 日常消毒 饲养场及牛舍出入口处，应设置消毒池，内置有效消毒剂，如

3%～来苏儿溶液或

20％石灰乳等。消毒药要定期更换，以保证一定的药效。牛舍内的一切用具应定期消毒；产房每周进行一次大消毒，分娩室在临产牛生产前及分娩后各进行一次消毒。5.5 引种2DB12/T

527—20145.5.1 异地调运的奶牛，必须来自于非疫区，应当符合农业部规定的健康标准。5.5.2 向输入地动物卫生监督机构申请办理审批手续。5.5.3物检疫管理办法》相关规定隔离饲养

30

d5.5.4 办理审批手续，经检疫合格入境后，需隔离

45

d，经检疫合格方能入关。5.6 从业人员从事奶牛饲养和管理的人员每年要进行健康检查，发现患有结核病的应调离岗位。6 净化群（场）的认定奶牛群（场）同时满足以下要求，认定为达到净化标准。6.1 连续

2

年以上无临床病例。6.2按本规范

5.1

的规定连续

2

6.3 引进奶牛及其胚胎和精液的，符合本规范

5.5

7 净化群（场）的维持7.1 达到净化标准的奶牛群（场）每年进行检测。7.2 发现阳性牛按照本规范

5.3

5.1.2

要求检测。7.3按本规范

5.5

规定对异地调运奶牛进行检疫。7.4 按本规范

规定做好日常消毒。7.5 按本规范

5.6

规定做好从业人员管理工作。3DB12/T

527—2014附 录 A（资料性附录）γ-

试验A.1

牛结核分枝杆菌γ-干扰素试剂盒（内含酶标板、牛γ--20倍浓缩洗液、100倍浓缩酶标结合物、5冲液、100牛型提纯结核菌素（牛型） 禽型提纯结核菌素（禽型） 肝素钠真空管孔组织培养板 单道可调移液器及配套吸头（20µL-200µL、100µL-1000µL、1mL-10mL）道移液器及配套吸头（50µL-300µL）量筒（、1L、2L） 有盖离心管（1.5

） 恒温CO培养箱 酶标仪洗板机A.2

A.2.1

M

1.096

g

g

8.5

g，用蒸馏水定容至

1000

，调

至

7.2A.2.2 酶标结合物 用去离子水或蒸馏水重新溶解

倍浓缩的冻干酶标结合物。A.2.3

5倍浓缩的酶标结合物稀释液。A.2.4

牛γ-干扰素阳性对照用1

去离子水或蒸馏水重新溶解。A.2.5

牛γ-干扰素阴性对照 用1

去离子水或蒸馏水重新溶解。A.2.6

洗液 用去离子水或蒸馏水重新溶解20倍浓缩的洗液。A.2.7

显色剂溶液 将100倍稀释配制。A.3

A.3.1 临床样本采集及预处理A.3.1.1 样本的采集 牛静脉无菌采血5

素钠抗凝全血。出现凝血的全血样品不可用。A.3.1.2

22±5血后8

h（最长不超过30

h）内用于检测。A.3.1.3

24

孔组织培养板，每份抗凝血样品加3孔，每孔加1.5

。A.3.1.4 向24

3100

μL牛型、禽型

和A.3.1.5

CO培养箱内，37

18

h（全血可接受培养时间为16～4DB12/T

527—201424

h）。A.3.1.6

经过18

h

400

μL

的上层血浆，转入独立的1.5

离心管中，待测。吸取血浆时应尽量避免吸入细胞。待测样品可立即用于试验或

℃冷冻贮存。A.3.2

试验前将酶标板和所有试剂恢复到室温，试剂充分混匀。

向酶标板中的96孔中分别加入50

μL血浆稀释缓冲液，

再向相应孔中加入50

μL

待测样品和牛γ-干扰素阴、阳性对照样品。对照样品应最后加入。充分振荡22±560±5）6

去残留的洗液。

每孔加入

μL稀释好的酶标结合物，充分振荡混匀。室温孵育（60±5

），洗涤6

次。

每孔加入

μL

新鲜配制的显色剂溶液，充分振荡混合。室温避光孵育

。

迅速加入50

μL

终止液，轻轻摇动混匀。

终止后5

内读出OD

值，然后用OD

值计算结果。A.3.3

A.3.3.1

满足以下2个条件试验方成立 牛γ-干扰素阴性对照

值<0.13，且阴性对照重复孔OD值差≤0.04-干扰素阳性对照OD

值>0.7。A