香菇多糖沉降工艺研究

香菇多糖沉降工艺研究

氨基葡萄糖药物是一种化学品，具有抗炎作用。是由香菇多糖粗品经化学反应,经沉降、酸解提取、精制得到的高分子多糖,香菇多糖注射液及注射用香菇多糖临床上使用多年,疗效显著,毒副作用小,主要用于恶性肿瘤的辅助治疗、病毒性肝炎的治疗。我们对香菇多糖沉降反应的相关条件进行摸索和优化,其成品收率相对较高,质量指标均达到国家药品标准。1目的为香菇多糖沉降反应找出最佳工艺条件。2方法2.1原料、溶剂和试剂的初始要求2.2烷基三甲基溴化铵溶液香菇多糖粗品用纯化水溶解,过滤,滤液在搅拌条件下缓缓加入十六烷基三甲基溴化铵溶液,并用氢氧化钠溶液调节pH,使溶液的pH保持相对稳定,然后静置、离心,沉淀物经乙酸处理,碱溶醇析处理,再经乙醇洗涤、离心、乙醚洗涤、真空干燥、检测含量。3单因素沉降反应的试验3.1ctab法称210g香菇多糖粗品(030412批,自制,含量为31.2%),加纯化水140L溶胀溶解,过滤,高速离心机离去极少量的不溶物,得清液。将此清液混匀分7份,每份各加CTAB沉降剂15.0克,用氢氧化钠溶液调节反应液的pH到10.6,并使每份的体积相同,反应温度均为40℃,沉降时间相同,析出物经同法酸碱处理,乙醇、乙醚洗涤后真空干燥得成品检测。料水比对香菇多糖沉降的单因素试验:试验结果初步表明:调节水料倍数为500~1800,可以获得相对满意的收率和纯度。3.2ctab用量比对产品品质的影响称100g香菇多糖粗品(自制,030412批,含量为31.2%),加纯化水50L溶胀溶解,过滤,高速离心机离去极少量的不溶物,得清液。将此清液混匀分五份,每份加CTAB用量比分别为0.1、0.125、0.15、0.175、0.2,调节溶液pH值10.2,并使每份的体积相同,反应温度40℃相同,反应及沉降时间相同,析出物经同法酸碱处理,乙醇、乙醚洗涤后真空干燥得成品检测。沉淀剂的用量单因素试验:(结果见表1)由实验结果可初步判断,CTAB用量比为0.15时,可获得相对较高的纯化收率及纯度。3.3不同ph值的ctab法称140g香菇多糖粗品(030412批,自制,含量为31.2%),加纯化水100L溶胀溶解,过滤,高速离心机离去极少量的不溶物,得清液。将此清液混匀分五份,CTAB用量比为0.15,用氢氧化钠溶液调节反应液的pH值,将这组溶液的pH值调节为9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5。并使每份的体积相同,反应温均为40℃,沉降时间相同,析出物经同法酸碱处理,乙醇、乙醚洗涤后真空干燥得成品检测。pH值对香菇多糖沉降的单因素试验:(结果见表2)实验结果表明调节溶液pH为11左右,可以获得较好的收率和纯度,实验中发现产品的色泽随溶液的pH值升高而有所加深。3.4反应温度的确定称180g香菇多糖粗品(030416批,自制,含量为30.7%),加纯化水180L溶胀溶解,过滤,高速离心机离去极少量的不溶物,得清液。将此清液混匀分九份,CTAB用量比均为0.15,用氢氧化钠溶液调节反应液的pH值到11.0,将这组溶液的温度分别调节为10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃。并使每份的体积相同,反应时间相同,沉降时间相同,析出物经同法酸碱处理,乙醇、乙醚洗涤后真空干燥得成品检测。温度对香菇多糖沉降的单因素试验:(结果见表3)实验结果表明随温度上升,反应速度加快,当温度上升到45℃以上时,反应液的色泽加深,产品内在质量相对下降,故适宜的温度范围约在30~45℃。3.5反应时间的影响称120g香菇多糖粗品(030418批,自制,含量为30.3%),加纯化水100L溶胀溶解,过滤,高速离心机离去极少量的不溶物,得清液。将此清液混匀分6份,CTAB用量比均为0.15,用氢氧化钠溶液调节反应液的pH值到11.0,将这组溶液的温度调节为35℃。并使每份的体积相同,反应时间分别为15分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟、70分钟,沉降时间相同,析出物经同法酸碱处理,乙醇、乙醚洗涤后真空干燥得成品检测。反应时间对香菇多糖沉降的单因素试验:(结果见表4)实验结果表明反应时间太短,反应不完全,以40分钟效果较好,随时间的延长,收率和质量波动不是很明显,反应时间对收率和质量的影响不是很大。4香菇多糖沉降工艺的正交试验通过单因素初步试验,可大致判断出影响反应效果的主要因素为:料水比、沉降剂用量、反应温度、pH条件。在此基础上优化香菇多糖沉降工艺,设计四因素三水平正交试验L9(3)(在做正交试验时将反应时间均设为40分钟)。按照这几个因素设计正交试验表,通过正交试验,找出相对优化的工艺参数。5最佳工艺条件的确定按推算出的最优工艺组合做了一组验证性平行性试验,结果见表7。在该条件下香菇多糖平均得率为:10.99%,明显高于正交试验组中的最高值9.98。因此香菇多糖沉降的最佳工艺条件为:水料比为1000倍、沉降剂用量百分比为15%、反应温度为41℃、pH为11。平行性试验制成的产品经中国药科大学生物工程学院进行结构确证,符合文献报道,各项检测均符合香菇多糖国家药品标准。6最佳工艺条件的确定各因素对多糖得率影响的主次顺序依次为:pH>沉降剂与原料比>料水比>反应温度,其中pH对多糖得率影响最大。由表可知:A2B2C3D2为香菇多糖沉降反应的最佳工艺条件,