行一步走程的抗炎镇痛作用研究

行一步走程的抗炎镇痛作用研究

距离远处是卡ppa的一部分。etchamp.干燥的根。别名扣钮子(广东乳源)、独虎龙、黑皮蛇等,产于广东、广西、江西(大余)等地。性平,味苦、涩,有毒;功能活血散瘀,解痉止痛。用于治疗风湿关节痛,筋骨不舒,咽喉肿痛,腹痛。本实验对独行千里有效部位(DXQL)抗炎镇痛方面进行药效学研究,以期为临床应用提供科学依据。1大、小、小的适应证及试剂独行千里药材购自清平药市,经广州中医药大学鉴定教研室童家贇讲师鉴定为山柑科(Capparaceae)植物独行千里CapparisacutifoliaSweet[C.membranaceaGardn.etChamp.]的干燥根。独行千里有效部位自制:独行千里根茎干燥后粉碎,分别加入12、10、10倍量75%~80%乙醇回流提取3次,时间分别为2、1.5、1.5h,合并提取液,减压浓缩至浸膏,以1%~2%稀酸水酸化后,酸水液以氨水调PH至9,氯仿萃取,减压回收氯仿所得稠膏,采用酸性染料比色法进行含量测定,生物碱含量为63.7%,即得独行千里氯仿部位。阿司匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司,规格100mg/片,批号116966);正清风痛宁片(湖北正清制药集团股份有限公司,规格20mg/片,批号0906119),各药临用前以0.5%羧甲基纤维素(CMC)配成相应浓度的混悬液(阿司匹林片除去肠衣后配制);弗氏完全佐剂(FAC),美国Sigma公司产品(098K8729)。大鼠白介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)Elisa试剂盒,上海森雄科技实业公司产品;丙二醛(MDA)试剂盒,广州市齐云生物技术有限公司提供;冰醋酸、二甲苯、伊文思兰等试剂均为分析纯。1.2仪器、试药与仪器SPF级昆明小鼠(由广东省实验动物监测所提供),雌雄兼用,体重18~22g,合格证号SCXK(粤)2008-0015。SPF级SD大鼠(由广东省实验动物监测所提供),雄性,体重180~220g,合格证号SCXK粤)2008-0020。AT-858自动酶标仪(上海安泰分析仪器有限公司);UV2300型紫外可见光光度计(上海天美科学仪器有限公司);BP-211D电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司);6mm打孔器;ACS-1EAS型电子天平(精度0.5g,北京市菲姆斯科技开发公司产品)。2方法2.1.1灌胃给药、给药SD大鼠50只,适应性饲养3天,按体重随机分为5组:模型组、正清风痛宁片组(40mg/kg)、独行千里有效部位小剂量组(折算成药材量40g·kg-1)、中剂量组(80g·kg-1)、大剂量组(120g·kg-1),按1mL/100g体重灌胃给药,模型组给予生理盐水,各组给药容积相等。连续给药2天后。第3天用游标卡尺在测量正常足厚度之后,每只大鼠右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL,并在6h、18h、24h、3、5天分别测量致炎后足肿胀度,并在10、14、18、22、26天分别测定左后足趾(非致炎足)的厚度。2.1.2水肿度测定雄性SD大鼠50只,按体重随机分成5组。各组分别灌胃受试药物或等体积生理盐水,每日1次,连续7天。末次给药30min后,于右后足皮下注射1%角叉菜胶生理盐水溶液0.1mL,分别在致炎前和致炎后1、2、3、4h测量足爪容积,以致炎前后足爪容积的差值表示肿胀度。测量后处死动物,截取右后足,称重,冰浴条件下剪碎、匀浆,按所购试剂盒的操作步骤测定IL-1、TNF-α和MDA含量。2.1.3小鼠骨髓od值的测定小鼠50只,雌雄各半,随机分成5组。各组分别灌胃受试药物或等体积生理盐水,每日1次,连续7天。末次给药30min后,尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.2mL,随后立刻腹腔注射0.6%醋酸0.2mL,20min后脱颈椎处死小鼠,剖开腹腔用适量生理盐水反复冲洗,并收集洗出液,滤纸滤过,并调整容积至6mL,在3000r·min-1离心15min,取上清液于722型光栅分光光度计中在590nm处波长测OD值。比较各组的差异。2.1.4对醋酸致小鼠扭体反应的影响按2.1.3方法对小鼠随机分组,给药。末次给药1h后,每只小鼠左耳涂布二甲苯0.1mL致炎,右耳不涂作为对照。1.5h后将小鼠脱颈椎处死,用直径6mm打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片,秤重,以左、右耳片重量之差作为肿胀度,比较各组间差异。对醋酸致小鼠扭体反应的影响按2.1.3方法对小鼠随机分组,给药。末次给药30min后,各小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2mL,记录注射醋酸后40min内小鼠扭体次数。3药物的抗炎作用以足肿胀度为指标,采用SPSS13.0统计软件包进行单因素方差分析。急发性和继发性炎症实验结果分别见表1~2。从表1可知,24h内为急性炎症的发生期,与模型组相比,给药组各个剂量和阳性对照组对其均有明显抗炎作用。24h后为继发性炎症的形成期,各个给药组对继发性炎症形成虽有一定的抑制作用,但不是特别明显。3天后,给药组和阳性对照组的炎症抑制作用较弱。由此可见,独行千里有效部位大、中、小剂量组,对大鼠佐剂性关节炎急性炎症,均有抑制作用。从表2可知:18天以内是继发性炎症的形成期,药物对继发性炎症的形成有一定的抑制作用,作用相对缓和,无显著性。18天后,继发性炎症形成,药物的抗炎作用开始显效。与模型组相比,22天大、中剂量组和阳性对照组都有明显的抗炎作用(P<0.05)。26天大剂量组有极显著性差异(P<0.01),中剂量组与阳性对照组有显著性差异(P<0.05)。3.2影响角豆菌引起的大鼠脚肿胀3.3影响小鼠腹腔毛细管的渗透性从表5可知,与模型组相比,独行千里大、中剂量组与阳性对照组可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性(P<0.01)。3.4剂量对小鼠耳壳水肿的影响实验结果见表6,独行千里大、中、小剂量组与模型组相比,均呈不同程度的抑制小鼠耳壳肿胀作用,具有随剂量增加而作用增强的趋势,大剂量组有极显著性差异(P<0.01),中、小剂量组有显著性差异(P<0.05)。与阿司匹林组比较,大剂量组有显著性差异(P<0.05)。3.5影响醋酸大鼠扭转的反应实验结果见表7,与模型组比较,阿司匹林组、大剂量组均能显著减少小鼠扭体次数(P<0.01或P<0.05)。4制备大鼠aa基因突变的大中药的抗炎作用独行千里药材常用于治疗风湿关节痛(RA),RA以关节组织慢性炎症病变为主要表现,大鼠AA能较好地模拟人类RA,是中医药治疗RA的实验研究中被广泛运用的一种动物模型。IL-1和TNF-α是重要的炎症介质,低浓度时主要在炎症的局部起作用,对中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞有激活、趋化作用。MDA是自由基引发的脂质过氧化反应的一种产物,可以激活环氧化酶(COX),一方面促进花生四烯酸生成PG,导致细胞代谢紊乱诱发炎症;另一方面可影响白三烯代谢诱发炎症。本实验研究发现独行千里提取物对大鼠AA原发性病变有明显的抑制作用,对继发性病变也有显著治疗作用;抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀;抑制毛细血管通透性增加、减少小鼠耳廓肿胀度;有明显的镇痛作用;与模型组相比,大中剂量组可降低IL-1含量(P<0.01),显著降低TNF-α含量(P<0.05),降低MDA含量(P<0.01);提示其抗炎作用与降低炎症组织中的炎症因子IL-1、TNF-α和MDA含量有关。对独行千里提取物酸化后加碘化汞钾试液、碘化铋钾试液、硅钨酸试液,均显生物碱反应,提示其抗炎镇痛作用的活性成分为生物碱类成分,采用酸性染料比色法测定其含量为63.7%,在药效学指引下对活性成分的筛选分离是进一步研究的课