自动化法医dna提取系统在骨骼及磨牙中的应用

自动化法医dna提取系统在骨骼及磨牙中的应用

提取骨骼和牙齿的dna方法包括ctagram法。1材料和方法1.1材料表面选取骨骼33份,牙齿15份(每份2枚),均来自于日常检案中的不同个体。1.2主要设备和试剂1.2.1仪器AutoMateExpress1.2.2试剂PrepFilerExpressBTA1.3方法1.3.1研磨成骨粉的制备33份骨骼用刀将骨骼内、外表面均刮干净,清洗后晾干,在紫外灯下照射2h。在骨密质部位取一小块骨片用冷冻研磨机研磨成骨粉。此外,随机选取其中10份已清洗好的骨骼用电钻在骨密质部位钻取制成骨屑(手工处理)。15份牙齿(每份2枚)用刀片将表面刮干净,75%乙醇溶液及去离子水分别浸泡牙齿10min,在紫外灯下照射2h。取其中一枚牙齿用冷冻研磨机研磨成牙粉。此外,随机选取其中10份已清洗好的另一枚牙齿用牙齿粉碎器砸成粉末(手工处理)。1.3.2样本量与消化时间的分组随机选取用冷冻研磨机研磨的骨粉及牙粉样本共10份(骨粉6份,牙粉4份),根据不同的样本量(50、100、150mg)及消化时间(2、18h)将每份样本分成6组。根据所得DNA含量选择最佳样本量及消化时间。1.3.3自动响应取骨粉或牙粉置于管中,加入PrepFilerExpressBTA1.3.4pcr扩增条件采用Identifiler誖Plus试剂盒在9700扩增仪上进行扩增。扩增体系为10μL,其中反应液4μL,引物2μL,DNA4μL。扩增条件为95℃11min;94℃20s,59℃3min,59℃3min,30个循环;60℃30min。PCR产物用3130XL遗传分析仪电泳检测,GeneMapperID-X软件对结果进行分型。2结果2.1样本量大小对检测效果的影响表1显示,消化时间对DNA质量浓度的影响差异无统计学意义(P>0.05),而样本量为50mg的检材得到的DNA质量浓度明显低于样本量为100mg与150mg的检材(P<0.05)。虽然样本量为100mg与150mg的检材得到的DNA质量浓度差异无统计学意义(P>0.05),但从STR分型效果来看,样本量为150mg的检材其RFU值及峰值均衡性均优于样本量为100mg的检材。经过对样本量及消化时间的综合比较,本方法采用样本量为150mg及消化时间为2h来提取所有的骨骼及牙齿样本。2.2冷研磨机研磨样品的dna质量浓度和str分类结果经冷冻研磨机研磨的33份骨骼及15份牙齿样本采用AutoMateExpress2.3冷研磨样品与工艺处理样品获得的dna质量浓度的比较取冷冻研磨法和手工处理法处理后的各10份骨骼及牙齿样本,均采用AutoMateExpress2.4案例应用本实验室曾在2008年12月对1例清代遗骸(约150年以上)进行DNA检验,Y-STR分型与后代完全一致3不同处理方法所获得dna质量浓度的比较骨骼及牙齿中DNA含量低,又有坚硬的细胞外基质保护,使得此类检材的检验难度较大。检验步骤复杂繁琐、易污染、检出成功率低、取材量大、耗时长等问题一直以来都无法得到有效解决。本研究采用AutoMateExpress骨骼类样本使用冷冻处理与手工处理所获得的DNA质量浓度差异无统计学意义,工作中可结合实际选择处理方法。牙齿类样本使用