甾体激素类药物的分析药物分析

基本要求1．掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方法之间的关系。2．掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3．掌握甾体类药物的含量原理与方法。4．熟悉甾体类药物杂质检查的方法。返回当前第1页\共有67页\编于星期四\9点基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819概述当前第2页\共有67页\编于星期四\9点分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素当前第3页\共有67页\编于星期四\9点肾上腺皮质激素氢化可的松当前第4页\共有67页\编于星期四\9点肾上腺皮质激素醋酸地塞米松当前第5页\共有67页\编于星期四\9点肾上腺皮质激素曲安息龙当前第6页\共有67页\编于星期四\9点肾上腺皮质激素地塞米松磷酸钠当前第7页\共有67页\编于星期四\9点雄性激素甲睾酮当前第8页\共有67页\编于星期四\9点雄性激素丙酸睾酮当前第9页\共有67页\编于星期四\9点蛋白同化激素苯丙酸诺龙当前第10页\共有67页\编于星期四\9点孕激素黄体酮当前第11页\共有67页\编于星期四\9点孕激素醋酸甲地孕酮当前第12页\共有67页\编于星期四\9点雌性激素炔雌醇当前第13页\共有67页\编于星期四\9点雌性激素雌二醇当前第14页\共有67页\编于星期四\9点炔诺酮此外当前第15页\共有67页\编于星期四\9点炔诺孕酮返回当前第16页\共有67页\编于星期四\9点一、结构与性质

1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17

–

α–醇酮基还原性当前第17页\共有67页\编于星期四\9点2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯当前第18页\共有67页\编于星期四\9点3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应当前第19页\共有67页\编于星期四\9点4.雌性激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯返回当前第20页\共有67页\编于星期四\9点二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）当前第21页\共有67页\编于星期四\9点与硫酸显色反应

显色荧光加水稀释泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙

黄→蓝绿炔雌醚橙红

黄绿

↓红色

炔雌醇橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄

带橙清当前第22页\共有67页\编于星期四\9点(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OHˉ1、C17

–

α–醇酮基还原性呈色反应此外还有斐林试液、多伦试液当前第23页\共有67页\编于星期四\9点甾酮类激素药物呈色羰基试剂2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼当前第24页\共有67页\编于星期四\9点具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛3.甲酮基当前第25页\共有67页\编于星期四\9点黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色当前第26页\共有67页\编于星期四\9点有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ4.有机卤素茜素氟蓝

硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈色

当前第27页\共有67页\编于星期四\9点雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羟基当前第28页\共有67页\编于星期四\9点含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银6.乙炔基的沉淀反应↓当前第29页\共有67页\编于星期四\9点

(三)制备衍生物测定m.p.盐酸氨基脲苯丙酸诺龙△缩氨基脲衍生物1.缩氨基脲的生成m.p.约180℃（分解）2.酯的水解丙酸睾酮碱性条件睾酮m.p.为150℃~156℃当前第30页\共有67页\编于星期四\9点△４-3-酮、苯环、其他共轭结构（四）UV法1.结构依据240nm左右280nm左右当前第31页\共有67页\编于星期四\9点2.示例曲安西龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇20μg/ml浓度20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收，A为0.57～0.60，在239nm与263nm处的吸收度比值为2.25～2.45当前第32页\共有67页\编于星期四\9点结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（五）IR法当前第33页\共有67页\编于星期四\9点1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动当前第34页\共有67页\编于星期四\9点黄体酮结构特征：△４-3-酮、C17-酮基当前第35页\共有67页\编于星期四\9点1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键当前第36页\共有67页\编于星期四\9点（七）TLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。当前第37页\共有67页\编于星期四\9点（八）HPLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）

方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。返回当前第38页\共有67页\编于星期四\9点三、特殊杂质检查（一）其他甾体的检查

检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.

当前第39页\共有67页\编于星期四\9点检查方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）当前第40页\共有67页\编于星期四\9点（1）TLC法（高低浓度对比法）

判定方法：

规定杂质斑点数目

规定杂质斑点颜色当前第41页\共有67页\编于星期四\9点例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1）浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60μg/ml层析：供试液点样、展开、斑点检出。

对照液判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。当前第42页\共有67页\编于星期四\9点（2）HPLC法（主成分自身对照法）判定方法：

规定杂质峰数目规定杂质峰面积当前第43页\共有67页\编于星期四\9点硒的检查（二）来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢有毒方法药物氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定当前第44页\共有67页\编于星期四\9点（三）有机溶剂残留量的检查（灵敏度法）甲醇不得出峰检测限=3.1ng丙酮≤5.0%内标法+校正因子以地塞米松磷酸钠为例GC法当前第45页\共有67页\编于星期四\9点地塞米松磷酸钠检查甲醇和丙酮精密称取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)与丙酮100μl(≈79mg)置100ml量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得出现甲醇峰。当前第46页\共有67页\编于星期四\9点（二）游离磷酸盐的检查地塞米松磷酸钠对照品比色法供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝：740nm对照液：同上当前第47页\共有67页\编于星期四\9点（对照液0.0035%KH2PO4）返回当前第48页\共有67页\编于星期四\9点（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）四、含量测定测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。当前第49页\共有67页\编于星期四\9点示例：黄体酮的含量测定

色谱条件：固定相ODS，流动相甲醇-水（65:35），检测波长254nm，内标物己烯雌酚系统适用性试验：n>1000，R符合规定。

当前第50页\共有67页\编于星期四\9点测定样品：黄体酮原料、注射液。

定量方法：内标法当前第51页\共有67页\编于星期四\9点（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药苯环280nm（±）雌激素当前第52页\共有67页\编于星期四\9点示例：醋酸地塞米松片的含量测定（1）配制供试液

（2）测定：240nm

（3）计算

当前第53页\共有67页\编于星期四\9点肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理异烟腙（黄）酮基异烟肼-3CHCl（缩合）1.异烟肼比色法（三）比色法当前第54页\共有67页\编于星期四\9点异烟腙（黄色）当前第55页\共有67页\编于星期四\9点（2）方法对照品法55℃异烟肼挥去乙醇对照液供试液A暗45′当前第56页\共有67页\编于星期四\9点（3）讨论反应速度（反应专属性）A.C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反应反应专属性C3－酮基当前第57页\共有67页\编于星期四\9点B.溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇当前第58页\共有67页\编于星期四\9点C.水分、温度、O2与光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不挥发溶剂、不吸收水分时→O2与光线无影响t℃↑→ν↑当前第59页\共有67页\编于星期四\9点D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸:异烟肼=2:1盐酸浓度0.0074mol/L异烟肼浓度0.00365mol/L最大A当前第60页\共有67页\编于星期四\9点

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性（1）原理2.四氮唑比色法有色甲瓒四氮唑盐醇酮基-a-17COH-[还原]当前第61页\共有67页\编于星期四\9点三苯甲瓒↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）[H]当前第62页\共有67页\编于星期四\9点蓝四氮唑（BT）当前第63页\共有67页\编于星期四\9点（2）方法对照品法25℃氢氧化