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文档简介
液相色谱分析
主讲:文娜新疆分析测试中心0991-383592113899992951讲课提纲一、色谱法基础二、液相色谱仪组成及工作原理三、液相色谱固定相和流动相四、液相色谱仪定性、定量方法五、液相色谱操作条件的选择第一章色谱基础本章内容:液相色谱发展史液相色谱的基本概念影响峰形扩展的因素固定相——CaCO3颗粒流动相——石油醚
色带第一节色谱的发展史一、起源二、色谱的发展:30~40年代发展了柱分配色谱、纸色谱50年代发展了气相色谱、薄层色谱60年代发展了高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的,是一种以液体做流动相的新色谱技术。从分析原理上讲,现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化
操作。经典的液相色谱法,流动相在常压下输送,所用的固定相柱效低,分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。因此,高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。三、液相色谱分离原理及分类和气相色谱一样,液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相(或在惰性载体表面涂上一层液膜)、离子交换树脂或多孔性凝胶;流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子(以下称溶质)与溶剂(即流动相或洗脱液)以及固定相分子间的作用,作用力的大小,决定色谱过程的保留行为。按分离机制分:
分配色谱法
吸附色谱法
离子交换色谱法体积排阻色谱法亲合色谱法化学键合相色谱法
正相分配色谱反相分配色谱按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较
吸附色谱分配色谱离子色谱体积排阻色谱亲和色谱固定相
全多孔固体吸附剂
固定液载带在固相基体上
高效微粒离子交换剂
具有不同孔径的多孔性凝胶
多种不同性能的配位体键联在固相基体上
流动相
不同极性有机溶剂
不同极性有机溶剂和水
不同pH值的缓冲溶液
有机溶剂或一定pH值的缓冲溶液
不同pH值的缓冲溶液,可加入改性剂
分离原理
吸附与解吸
溶解与挥发
可逆性的离子交换
多孔凝胶的渗透或过滤
具有锁匙结构络合物的可逆性离解
液相色谱与气相色谱的比较液相色谱所用基本概念:保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相,而液体和气体的性质不相同;此外,液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同,所以,液相色谱与气相色谱有一定差别,主要有以下几方面:四、高效液相色谱法的特点分离效能高
柱效可达2×103~5×104块/m理论塔板数,远远高于气相色谱填充柱103块/m理论塔板数的柱效选择性高可分析不同类型的有机化合物及其同分异构体,还可分析在性质上极为相识的旋光异构体检测灵明度高紫外检测器最小检出量可达10-9g;荧光检测器最小检出量可达10-12g。分析速度快相对经典液相色谱,分析时间大大缩短。第二节色谱基本理论
定性参数定量参数柱效参数分离参数一、色谱参数续前
(一)色谱流出曲线和色谱峰1.色谱流出曲线是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线,又称为色谱图。2.基线是在操作条件下,没有组分流出时的流出曲线。一、色谱流出曲线和有关概念
二、定性参数(一)保留值1.保留时间(retentiontime;tR)
是从进样到某组分在柱后出现浓度极大时的时间间隔,即从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔。2.死时间(deadtime;t0)
是分配系数为零的组分,即不被固定相吸附或溶解的组分的保留时间。
3.调坐整保分留时蒙间(ad缩慧ju立st详ed演r宪et队en映ti舞on尽t描im穷e;)4.保出留体横积(re泛te告nt俘io堡n森vo葱lu沈me;VR)是从臭进样虑开始保到某脾个组狱分在诞柱后出现艘浓度苹极大静时,恨所需难通过锡色谱锦柱的流动颈相体宫积。2.半什峰宽(pe云ak足w课id刚th烤a熟t郊ha屿lf矮h通ei甩gh胆t;W1/城2)是峰而高一哨半处禾的峰参宽。W1/匀2=2德.3味55σ3.峰宽(pe脖ak能w青id孕th;W)是通目过色拣谱峰渠两侧森拐点起作切际线在逃基线价上所踪蝶截得遣的距劫离。W=4σ或W=1锋.6斑99W1/炸2四、分离纳参数若R=1,两峰包基本柱分开。若R=1功.5,两峰主完全登分开(基线两分离)。2.基本灾分离书方程歪式(1)柱着色谱a项取席决于矮柱效,n↑注,a项↑b、袄c项相含关在GC中:b项主较要受腔色谱踪蝶柱性炎质影蔽响c项主间要受际柱温图影响在HP权LC中:b项主烟要取复决于揪流动汽相的完种类c项主兵要取岭决于疏流动票相的牢配比3.容运量因漠子(ca扮pa野ci颤ty肝f润ac毙to赠r;k)组分摆在固扎定相雀和流当动相厅中的含量(m)之比士。(一虎)影葬响板值高因垄素的添讨论1.涡倚流扩忧散(ed岭dy般d询if顽fu举si血on歪)也称犬为多叛径扩细散。A=2dp---肾--填充神不规子则因像子dp--桶--填料(固定易相)颗粒嫩的平粱均直翠径二、绒液相洁色谱加法速刺率理输论(一辽)Gi饿dd日in留gs液相统色谱龙速率涂方程遮式Gi扭dd贝in秒gs与Sn洒yd赠er等人阿提出贯的液索相色悲谱速辩率方拔程式贯:H=He+Hd+Hm+Hsm+Hs或:H=A+B/u+Cmu+Csmu+Csu讨论吼:1.流动昨相流报速与方板高渴的关泳系H=A+Cuu∝H2.涡流畏扩散编项A=2λdp采用丝式小粒稼度、隆球形懒固定丸相。消常用3~出10μm的填草料。株匀浆灰法装礼柱。3.传质稻阻抗耍系数在液叛相中胳,采葬用化份学键赔合相妙,“塘固定驾液”碌只是朽在载伍体表甜面的题一层贱单分壤子层危,因李此,爬在液店相中悠的传吐质阻息抗可谊以忽格略。闷则:H=A+Cmu+Csmu4.传质蚀阻抗演对板宫高的滩影响①Cm及Csm都与暮固定迫相的就粒径粘平方dp2成正绝比,砖与扩钉散系含数Dm成方卧比。眨因此态,采鸡用小砍粒度佣固定鹊相及丙低粘墨度流透动相狡。②高柱柱温可讲以增欣大Dm,但是猫,有殿机溶厉剂为涨流动孔相时申,容杂易产帜生气提泡,租因此躲,一铅般采缠用室湾温。(二旁)柱屑外效伶应色谱桨峰展糠宽的葬总方科差,明等于门柱内够、柱户外及县其他辆独立甩因素着的方监差和狗:2.柱外飞峰展狗宽(狐柱外烈效应穷,σ外)一、涛影响恩分离浩的因丑素(fa走ct住or醋s谜in导fl充ue晴nc日ed慨s相ep行ar节at膏io预n)1.影响分离科的因唇素与估提高烂柱效袭的途氏径在高催效液帝相色蒜谱中,液体椅的扩醒散系膀数仅衫为气室体的桥万分度之一,坟则速挎率方嘴程中交的分件子扩劳散项B/大U较小秒,可斗以忽侨略不紫计,即:H=捆A+杀Cu故液兼相色雾谱H-拳u曲线填与气哗相色戒谱的陷形状骄不同劈燕,如降图所拔示。2.流速流速预大于0.邻5cm案/s时,H~u曲线是一缎段斜车率不宴大的乖直线遥。降议低流速,浸柱效阿提高冤不是掘很大遗。但顷在实糕际操作艘中,泊流量薄仍是鼻一个伶调整腿分离北度和出疲峰时兵间的会重要手可选揪择参臂数。3.固定泄相及兆分离惕柱气相沈色谱刻中的位固定奇液原鹿则上捡都可舅以用执于液强相色健谱,拥其选怜用原初则与博气相书色谱校一样杰。但引在高齿效液党相色萝谱中垦,分忙离柱俩的制混备是颂一项薄技术茫要求望非常微高的扯工作液,一标般很团少自凝行制纸备。第二简章HP民LC仪器锯的简赔介及肾工作示原理本章弃内容出:往复打式活沟塞泵灰的结责构及庙工作爽原理手动册精样圣器(翁六通露阀)涌结构秧及工昼作原挣理常见胜检测它器检雹测的形原理第一窄节闭高起效液隔相色置谱仪高效球液相来色谱能仪由高压征输液混系统系、进病样系振统、断分离总系统状、检爹测系队统、愚记录片系统等五丛大部嘴分组李成(参见图溪)。分析项前,男选择种适当潜的色植谱柱绩和流托动相裂,开兆泵,倚冲洗谈柱子档,待驾柱子必达到咏平衡派而且叫基线凉平直敌后,转用微挂量注累射器渣把样冰品注锁入进剃样口嘴,流割动相击把试权样带肆入色博谱柱绒进行语分离燃,分谅离后晃的组上分依巷次流祥入检落测器龄的流渣通池求,最甚后和铜洗脱天液一痰起排来入流赢出物购收集向器。根当有甲样品直组分够流过性流通拔池时华,检钉测器惠把组辛分浓欲度转仁变成替电信漠号,扎经过锯放大亚,用萌记录膏器记目录下农来就翠得到顽色谱素图。歇色谱鸭图是脖定性用、定胖量和甲评价哨柱效卡高低绸的依掘据。HP低LC结构:输液想系统;进样戏系统;分离折系统;检测崖系统;梯度怪洗脱腊装置;数据粮处理葱系统第二槐节鼓系济统介拣绍一、针高压农输液诵系统高压遗输液奥系统浙由溶剂范贮存健器、写高压含泵、倡梯度当洗脱锤装置蜘和压丝式力表等组允成。1.溶剂修贮存宫器溶剂祖贮存望器一职般由痕玻璃大、不今锈钢联或氟商塑料歌制成技,容唯量为1到抗2L,用来稻贮存的足够怜数量价、符王合要迅求的鸟流动路相。注意:密期闭、汉经0.钥45µm滤膜县过滤分!2.高压贼输液星泵高压震输液粮泵是兰高效燃液相凉色谱族仪中番关键翠部件灰之一邮,其龄功能络是将溶筝剂贮喊存器职中的猾流动构相以痰高压誓形式讯连续蕉不断岔地送咳入液勇路系挎统,化使样裳品在贴色谱木柱中翻完成京分离蕉过程。由串于液息相色蒜谱仪起所用呀色谱狼柱径挥较细绢,所类填固币定相折粒度驱很小锡,因长此,剪对流愉动相勉的阻章力较般大,去为了筋使流坛动相苗能较偏快地映流过陆色谱忧柱,做就需戒要高漂压泵螺注入府流动辣相。第二装节周系近统介倒绍对泵商的要米求:叔输出木压力庭高、束流量么范围间大、趁流量跪恒定阳、无绳脉动匙,流馋量精柱度和拳重复名性为0.迁5%左右休。此特外,威还应朵耐腐迎蚀,投密封摄性好递。高压辞输液剂泵,复按其期性质问可分收为恒压片泵和恒流惊泵两大忠类。恒流设泵是冬能给方出恒克定流电量的箩泵,强其流且量与占流动爆相粘孤度和育柱渗扬透无星关。恒压闻泵是瞒保持紫输出桂压力牙恒定武,而然流量膏随外昨界阻辰力变阻化而旺变化代,如赢果系毛统阻鸽力不震发生售变化疑,恒唐压泵返就能容提供卷恒定添的流禾量。泵图第二尖节换系副统介宋绍3.梯度叠洗脱衡装置梯度秩洗脱就是工在分亲离过浆程中遮使两别种或头两种广以上狭不同撕极性迁的溶袍剂按您一定巩程序扎连续船改变乒它们逐之间猫的比坚例,码从而约使流幼动相隔的强智度、魔极性古、pH值或丘离子弃强度栋相应尚地变鼻化,越达到专提高戴分离精效果距,缩尖短分舰析时湿间的辰目的选。梯度币洗脱牌装置谨分为滩两类全:一类店是外梯庸度装昌置(又冬称低熔压梯预度)徐,流衔动相严在常演温常例压下衔混合目,用梨高压逢泵压咬至柱溉系统悲,仅侄需一塌台泵备即可榨。另一庭类是内梯阶度装汤置(又趴称高扑压梯感度)咱,将斯两种须溶剂补分别窃用泵繁增压景后,惨按电终器部和件设脖置的则程序活,注间入梯姓度第二伴节就系树统介景绍混合友室混合,彼再输埋至柱疾系统鞋。梯度夸洗脱匹的实倘质是通宿过不城断地该变化坛流动补相的朗强度丢,来遣调整猎混合雷样品蹲中各伤组分的k值,角使所自有谱娱带都时以最坦佳平此均k值通德过色桂谱柱昼。它羊在液躲相色奶谱中薯所起悔的作陕用相读当于搂气相妇色谱长中的蝴程序雪升温蒸,所饺不同穴的是陷,在李梯度圣洗脱弄中溶疮质k值的未变化罚是通慨过溶么质的诸极性甘、pH值和船离子阴强度著来实帽现的兼,而钢不是神借改叨变温禁度(讨温度浓程序城)来尤达到形。二、蓬进样肃系统进样腊系统冤包括班进样跳口、喝注射张器和它进样那阀等磁,它于的作碗用是粪把分雷析试棕样有咽效地暗送入若色谱季柱上拼进行消分离暮。进样坏系统采用肆六通昂阀进膏样使用辟手动宴进样巩器是般要注犯意以捧下事幻玉项:进样远针:沙应选康用液察相专侮用的酱平头救针。进样暗量:缠要么绝小于运定量库环体厚积的浑一半狱,要略么满建刻度疏进样摘(需卧要推岩进3~榨5倍定葡量环郑体积原的样尸品)进样绕动作袄:在Lo距ad状态恰下动宁作要栗平缓款,以后防样饿品冲果出。真进样抚后先婚切换伸到In晕je两ct状态硬再拔惊针,艳以防锻倒吸许或产柱生气顽泡。清洗仰进样货口:寇在In惊je夏ct状态牵清洗咬进样衫口。废液陡口:持废液奶管的直出口险应于礼进样衰口水扰平,俊以防误样品再倒流振泄露案或产践生虹粱吸。自动盾进样阔器:国是由贪计算份机自踪蝶动控融制定氏量阀盘,按套预先袍编制寺的操撇作程书序工景作。玩取样得、进疏样、舞复位醉、样拳品管择路清煌洗和饱样品颂盘的再转动燃,全饥按程确序自沿动进反行。第二仍节妻系倚统介尚绍三、就分离贷系统分离饼系统丧包括淹色谱民柱、窄恒温杂器和鲜连接甜管等旷部件姿。色痛谱柱脸一般双用内宗部抛牌光的乳不锈挥钢制虾成。瞧其内柄径为2费~仅6mm兴,柱长宰为10爸~均50cm蛾,柱形卧多为振直形类,内换部充畜满微王粒固纠定相抵。分离尸部分柱温秩一般位为室雾温或霸接近土室温奇。在以异下几述种情孟况需破要精顷确控蝇制柱剑温:在一链些法阶定标甘准分钓析方哄法中储,要毒求保翅留时干间具傅有再架现性诞。必须焰通过倾改变享柱温疗来提绒高分止离效泡率。对高躬分子邀化合铜物或位粘度示大的铁样品验,分袖析时坚柱温执必须宿高于他室温蛮。四、改检测属器检测振器是突液相屠色谱拼仪的恨关键晚部件盘之一棕。对检怎测器旅的要宫求是或:灵敏晒度高灭;重复秋性好总;线性坦范围轰宽;死体怜积小侮;对温搭度和谅流量恒的变虾化不沙敏感砖等。第二影节猛系偷统介蠢绍在液母相色霜谱中四,有腊两种拴类型煤的检席测器钓:一类纷是溶质野性检木测器,它树仅对上被分础离组估分的谱物理修或物巾理化误学特泡性有碰响应雨。属哭于此献类检泛测器遵的有穴紫外台吸收个检测百器(UV窄D)雾、荧光叶检测碰器(FL介D)察、电化策学检炒测器夹(EC犹D)等。姓灵明注度高头,适票用于俗痕量丝式分析幸和梯匙度洗今脱。另一辨类是总体马检测攀器,它批对试父样和轨洗脱州液总烧的物罪理和优化学假性质煮响应垂。属辰于此惨类检略测器司有示悼差折去光检储测器快(RI鸦D)保、电导浆检测的器(CD离)等。嚷灵明视度低写,不窝适用苍于痕笛量分破析和创梯度控洗脱捎。检测熄系统紫外棵检测政器:(常用)根据想朗伯—比尔卷定律豪,样蒙品浓柏度越宫大,榨产生掏的信针号越大赏.灵敏占度高赤,线蠢性范呼围广视,对奏温度轮和流私速不差敏感故,适打于梯蹦度洗考脱。可分克为:固定这波长修、可理变波地长和止二极路管阵睬列检执测三侦种类倚型可变窗波长府检测千器示鸦意图光电缝二极眨管阵是列吸胳光度歼检测隆器是同节时可愈以得庸到吸堵光度腐、波将长、迷时间——这样餐三维逝情报苦的检期测器示差叶折光选检测般器它是桶通过露连续晚监测鸣参比江池和惭测量辽池中当溶液借的折国射率驳之差锤来测用定试卖样浓蛛度的舅检测称器。至洗脱拢液组下成的叶变化捞会使期折射偏率变蜘化很惑大,肝因此巧,这架种检变测器蚊也不机适用劝于梯枣度洗矮脱。荧光休检测画器利用勉某些害溶质阶在受弊紫外颈光激椒发后编,能婚发射撕可见梦光(啄荧光介)的鹊性质稼来进馆行检税测的首.无探荧光载物质六,可驰使其库与荧队光试质剂反仪应,浑制成厘可发膝生荧须光的抱衍生羡物再雀进行娃测定d.荧光态检测宰器缠(fl倡uo忘re淡sc故en春ce斑d栗et敬ec狗to建r)高灵卸敏度惯、高在选择潮性;对多芒环芳知烃,是维生堪素B、黄曲着霉素妹、卟屋啉类丹化合细物、挖农药教、药陡物、别氨基酱酸、私甾类蹲化合程物等轻有响界应。第三木章电固另定相炼结构本章蝇内容甚:固定司相载诸体结汽构正相吓色谱兽固定讨相键合昏相色矿谱固剪定相第三炕章础高弄效液倦相色录谱的宜固定幼相蜜和流炉动相一、等固定奖相高效犹液相育色谱枕固定技相以承勤受高叔压能瞒力来分处类,舍可分残为刚性口固体司和硬梁胶两大拐类。刚性践固体召以二氧粱化硅为基股质,汗可承鉴受7.殿0108~1浆.0109Pa的高抵压,氏可制继成直醒径、忌形状掘、孔杀隙度悼不同披的颗汁粒。得如果稠在二待氧化犁硅表吓面键拒合各田种官虾能团蓄,可卵扩大突应用鲜范围虑,它愁是目劝前最筛广泛峰使用牲的一凭种固删定相或。硬胶浪主要绑用于反离子佩交换近和尺纯寸排盒阻色辽谱中期,它亿由聚苯溪乙烯捕与二永乙烯皂苯基偶交联稼而成。可列承受蚁压力君上限完为3.当5108Pa震。固定丛相按孔隙牢深度分类驶,可遥分为鸡表面脉多孔抬型和姻全多邀孔型梢固定呜相两婚类。第三绝章标高乔效液桨相色词谱的阀固定袄相舱和流雨动相1.表面陆多孔倚型固探定相它的炉基体炼是实气心玻缎璃球翻,在炎玻璃估球外拾面覆例盖一鼠层多戴孔活披性材产料,菌如硅吴胶、贿氧化野硅、绒离子执交换什剂、落分子脉筛、密聚酰黎胺等义。这暂类固追定相仗的多升孔层乡丰厚度承小、些孔浅圾,相险对死姐体积握小,糖出峰棉迅速田、柱毙效亦从高;多颗粒规较大衬,渗妙透性堆好,怀装柱踪蝶容易生,梯辫度淋耐洗时株能迅救速达虫到平椒衡,廉较适搁合做旧常规渡分析观。由滔于多众孔层法厚度贤薄,耐最大饿允许约量受爱到限近制。2.全多喂孔型稼固定舌相由直森径为10nm的硅识胶微监粒凝升聚而催成。劳这类分固定赴相由扭于颗尘粒很量细(5~钉10m)倘,孔仍习然较宪浅,胀传质农速率断快,印易实袜现高咱效、验高速域。特倒别适它合复清杂混叙合物馋分离默及痕羞量分放析。第三中章责高表效液雅相色莲谱的邀固定骡相恼和流劝动相在正匆相键却合相早色谱暖法中宗使用江的是诞极性悲键合团固定丛相。杠它是插将全循多孔羡微粒鼻硅胶露载体稳,经沉酸化法处理衔制成少表面掩含有只大量前硅羟绩基的禽载体幸后,炭再与尝含有宪胺基强(—NH菌2)躁、腈基舟(-CN万)、醚基(—O—当)的硅靠烷化盐试剂坛反应划,生间成表已面具功有胺枕基、爷腈基声、醚培基的巷极性株固定您相。第三请章搭高织效液应相色芒谱的结固定绣相往和流眠动相在反劳相键死合相茧色谱收法中娱使用底的是短非极概性键言合固钢定相通。它崖是将班全多具孔微歼粒硅喊胶载名体,长经酸泪化处猪理制啊成表啄面含喂有大畏量硅凳羟基枣的载傲体后敢,再腾与含戴有烷武基链排(C4耀、C烛8、头C1灯8)或苯岛基的酿硅烷货化试豆剂反秋应,极生成悲表面僚具有嫌烷基各或苯牌基的音非极是性固捧定相。二、付液相胃色谱汽的流案动相辞(mo雾bi刺le害ph烘as渗es献o捆f后L期C)1.流动蹦相特相性(1)液涛相色司谱的崖流动斧相又岁称为宏:淋贼洗液铅,洗讯脱剂役。流嫩动相嫁组成另改变霸,极用性改壮变,伟可显格著改控变组锦分分洋离状累况;(2)亲矩水性剖固定醒液常房诚采用陈疏水征性流唉动相贿,即乏流动姿相的株极性榆小于醒固定湖相的纯极性都,称齐为正码相液蜂液色弱谱法距,极塘性柱详也称杜正相润柱。二、级液相键色谱刚的流柳动相恒(mo馋bi馆le剖ph解as窑es烛o栽f发L街C)(3)若燥流动取相的繁极性辽大于高固定堤液的若极性东,则削称为俘反相丑液液丹色谱忽,非化极性么柱也督称为凳反相轨柱。锦组分有在两走种类艘型分森离柱纺上的摄出峰宝顺序国相反盗。2.流动堪相类揭别按流题动相茶组成泰分:单篮组分杂和多守组分峡;按极期性分:极馋性、简弱极尘性、耕非极醉性;按使政用方汗式分:固裤定组悦成淋委洗和诊梯度孩淋洗格。常用浇溶剂:己翅烷、编四氯侮化碳盖、甲六苯、亚乙酸岂乙酯援、乙欧醇、漠乙腈、菌水。采用途二元掠或多进元组状合溶暂剂作粱为流躲动相怪可以你灵活寄调节芽流动相的涛极性窝或增悬加选棋择性宗,以恒改进愤分离冷或调轧整出沃峰时散间。3.流动厚相选芹择在选航择溶山剂时廉,溶乱剂的栋极性毁是选乘择的作重要枪依据攀。采用找正相工液-液分杏配分牲离时拥:首碎先选阔择中虏等极龙性溶烈剂,土若组分竞的保峰留时嘴间太翻短,箩降低继溶剂笋极性聋,反擦之增担加。也可肯在低雀极性升溶剂谦中,淘逐渐细增加繁其中尤的极深性溶和剂,森使保留时响间缩秘短。常用分溶剂横的极亩性顺拾序:水(最大)落>甲酰恰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧藏六环>四氢巾呋喃>甲乙丢酮>正丁瓶醇>乙酸玻乙酯>乙醚>异丙醚>二氯障甲烷>氯仿>溴乙椅烷>苯钻>四氯抗化碳>二硫请化碳>环己旧烷>己烷>煤油(最小)4.俯选腊择流瓣动相临时应委注意谅的几蚁个问急题由于料高效俘液相尿色谱及中流仍动相起是液准体,流它对煌组分曲有亲怒合力延,并活参与岁固定鲁相对桌组分甘的竞败争,食因此优,正诵确选吸择流刻动相家直接朋影响羽组分撕的分木离度扑。对堆流动纸相溶股剂的无要求赏是:(1)溶进剂对袍于待报测样节品,举必须跟具有针合适奏的极姻性和捐良好欣的选顾择性懒。(2)溶迫剂与前检测墙器匹敏配。链对于汤紫外膨吸收跟检测著器,薄应注贫意选赚用检这测器漂波长沸比溶剂哭的紫狸外截少止波浴长要长点。所旺谓溶哀剂的长紫外抓截止将波长庭指当帐小于截止轧波长蠢的辐储射通奋过溶洁剂时营,肉溶剂更对此蒜辐射穗产生耽强烈尖吸收终,此爷时溶怪剂被听看作侵是光妻学不靠透明称的,大它严耍重干期扰组触分的梁吸收连测量诱。对于底折光择率检僚测器用,要崇求选犬择与塑组分费折光顾率有俱较大激差别妻的溶索剂作凉流动助相,叛以达蒜到最创高灵第敏度起。(3)高掩纯度由于年高效旧液相壤色谱抄灵敏水度高叹,对幻玉流动筐相溶蔽剂的签纯度练也要著求高明。防吊止微推量杂预质长艳期累环积损委坏色都谱柱青和使郑检测慨器噪叠声增短加。归不纯视的溶痰剂会丹引起驱基线申不稳瘦。第三斗章煌高口效液签相色君谱的涨固定错相妨和流突动相(4)化扣学稳裳定性昆好(5)低研粘度磨(粘给度适源中)若使猴用高枝粘度音溶剂飞,势观必增预高压偷力,惑不利你于分仿离。悟常用嫌的低肺粘度害溶剂室有丙播酮、话甲醇炊和乙筹腈等往;但洁粘度接过低录的溶弊剂也惹不宜铁采用醒,例岁如戊跌烷和重乙醚螺等,探它们蛛容易叹在色桨谱柱仓或检筹测器侦内形作成气际泡,寒影响召分离捡。第四肠章耳液锅相色痰谱仪捡定性桶、定丹量方捏法色谱兔法分离蚁好,定性最难色谱施分析甜分三请个阶汤段仪器届调试操作未条件棉选择定性绸定量--华-保留绵值定偷性--苦-峰高,峰面左积定舟量4.岩1定性保留版值定鸭性(1)利饼用已程知标颠样对研照定包性优点俊:简裂单缺点萌:要凯有纯设样,蹲适用催于已签知物封,操作辰条件兄要稳橡定2、趣利用骡紫外雄或荧借光光膏谱定轻性停泵伟做全洁波长羽光谱恩扫描3、煮收集坑柱后俱留出愚组分臭,再因用其抽他化恐学或蔽物理别方法哗定性如:旗红外宽光谱尤、质自谱、核磁闻共振第等4.凶2定愧量分藏析1.外标腾法(标准艘曲线学法)用待授测组牛分的哗纯样忙制标涉准曲肥线优点态:快溜速简骑单,只要踪蝶待测钢组分由出峰吉且完富全分冻离即纽奉可缺点以:绝烘对法,进样截量,操作仇条件肃要不变2.内标习法(外加傅标准盈法)不能千全出踢峰或析只需颜测某励几个半组分碍时采楼
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