如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染

如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第1页免疫检测是当前生物学检测方法中用途最广泛一个方法。含有高度准确、灵敏、特异特点。可用于免疫学基础理论和应用研究，也可应用于生物学研究各个领域。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第2页免疫指标一、免疫球蛋白

1、免疫球蛋白G(IgG)[参考值]：8-17g/L

2、免疫球蛋白M(IgM)[参考值]：0.29-3.44g/L

3、免疫球蛋白A(IgA)[参考值]：0.72-4.29g/L二、补体

1、补体成份C3[参考值]：0.78-2.10g/L

2.补体成份C4[参考值]：0.17-0.48g/L

3.C反应蛋白（CRP）[参考值]：0-8mg/L如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第3页胞外菌感染免疫反应及免疫指标改变如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第4页常见胞外菌病原菌主要致病物质白喉杆菌白喉毒素破伤风杆菌破伤风痉挛毒素脑膜炎球菌内毒素，荚膜，菌毛金黄色葡萄球菌侵袭性酶，各种毒素淋球菌荚膜肺炎球菌菌毛、IgA酶链球菌侵袭性酶，各种毒素如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第5页免疫机制1.皮肤黏膜屏障作用在普通情况下，只有当皮肤黏膜因机械损伤或昆虫叮咬失去完整形后，致病菌才能侵入。借居于皮肤黏膜正常菌群产生抗生素拮抗致病菌定居并阻止其闯过黏膜上皮。更主要是，黏膜分泌物中含有免疫球蛋白。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第6页2.吞噬细胞细菌一旦突破皮肤或粘膜屏障与侵入机体组织后，吞噬细胞就发挥作用，主要是中性粒细胞。在普通情况下，细菌可被吞噬毁灭，只有毒性强，数量多细菌才能进入血液或其它器官，需由肝、脾、血液中吞噬细胞继续吞噬。有致病菌含有抗吞噬作用。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第7页3.补体经过两个机制杀菌：直接溶菌作用和调理作用。补体经过经典路径和旁路路径被激活。在血清中溶菌作用依赖于补体膜攻击复合物形成。膜攻击复合物沉积于细菌外膜，嵌进外膜使其失去完整性，造成细菌溶解。补体亦可介导中性粒细胞，吞噬细胞调理吞噬作用。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第8页4.抗体即使补体是抗胞外菌感染主要原因，但单独补体系统不足以有效杀灭或调理吞噬病原菌。许多主要胞外菌去除，主要靠体液免疫系统特异性抗体作用及补体感染菌去除，也可由抗体协同作用而得到加强。IgA尤其是sIgA可干扰细菌黏附。抗体Fab段与抗原结合，Fc段与细胞受体结合，经过搭桥而促进吞噬作用。抗体与毒素结合，可掩盖毒素活性个别，毒素与抗毒素形成复合物可快速被吞噬细胞去除。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第9页临床上最为常见是病原体抗原检测和宿主血清抗体检测。

患者样本中若有病原体抗原检出，即可表明有该病原体存在；病原体感染机体时可诱导产生对应抗体，特异性抗体检出是临床诊疗主要依据。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第10页病原体抗原检测抗原检测：ELISA等ELISA:是一个利用酶标识抗原或抗体，在固相载体上进行抗原或抗体测定方法。抗原或抗体吸附到固相载体表面后，仍保持其免疫活性。抗原或抗体与酶形成结合物后，仍保持各自免疫活性和酶活性。结合物中酶可催化底物水解、氧化或还原，从而生成有色产物。 主要方法：间接法、双抗体法和竞争法如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第11页常见血清学检测方法：

凝集试验

----直接凝集试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、冷凝集试验沉淀试验

----琼脂扩散法、对流免疫电泳免疫标识技术

----免疫荧光试验、ELISA、免疫印迹试验如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第12页一、病原菌检测

（一）标本采集和运输

细菌感染检验

（二）细菌分离培养与判定

1.形态结构检验2.分离培养判定3.生化试验4.血清学判定5.动物试验6.药品敏感试验如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第13页细菌分离培养与判定普通程序标本（或增菌后）接种普通琼脂平板血琼脂平板选择培养基平板

培养特征：生长条件菌落特征溶血环特征等染色镜检：依据形态特征初步判定生化反应：如肠道杆菌乳糖发酵试验如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第14页纸片法：只可定性试管法：可定量（测MBC、MIC）E-test：可定量（只可测MIC）血清学判定：判定细菌种、型毒力判定内、外毒素检测动物试验：家兔、豚鼠等药敏试验如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第15页（三）病原菌抗原检测

EIA,IF,Westernblotting（四）检测病原菌核酸

核酸杂交

PCR

基因芯片（genechips）如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第16页致病菌检验程序:如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第17页病毒感染免疫反应及免疫指标改变如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第18页病毒致病机制直接：杀细胞性病毒感染宿主细胞后，可引发细胞生物大分子代谢紊乱，造成细胞膜结构及细胞骨架改变，而致细胞死亡，称之为细胞病变。（cytopathiceffect）间接：非杀细胞型病毒感染宿主细胞后，尽管不直接杀伤和破坏宿主细胞，通常宿主细胞仍可保持增殖分化。但这类病毒常可长久连续性存在于宿主细胞内。更为严重是，这种病毒可改变机体免疫应答反应，经过免疫抑制及免疫损害作用，造成免疫病理改变，造成疾病发生。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第19页抗病毒免疫机制1.抗体抗体不但能够作用于病毒本身，也可作用于病毒感染细胞。中和性抗体可与病毒结合中和病毒。非中和性抗体即使本身不能中和病毒感染性，但却能调理增强巨噬细胞、颗粒性细胞、淋巴细胞、NK细胞吞噬或杀伤作用。抗体和病毒特异性结合，亦可经过经典路径激活补体，溶解感染细胞。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第20页2.补体补体能够增加中和抗体活性，调理吞噬，溶解病毒感染细胞。有补体能够直接溶解病毒。一些病毒与补体结合后能上调体液免疫应答。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第21页3.干扰素干扰素抗病毒活性，主要经过IFN诱生有宿主细胞编码抗病毒蛋白来实现。IFN与受体结合后，开启酪氨酸激酶，磷酸化3种不一样蛋白，并形成DNA结合转录因子，与IFN可诱导基因调控区14bp结合，开启各种抗病毒蛋白合成。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第22页4.CTL病毒特异性CTL在去除细胞内感染病毒中起关键作用。即使详尽机制至今还未完全明了，但CTL杀伤时有能量消耗，且需要镁离子参加，被认为是主动过程。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第23页病毒感染检验方法电镜技术血清学试验分子生物学技术病毒分离判定标本采集与送检如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第24页一、标本采集与送检标准：1.尽早采取：发病早期

2.部位适宜：由感染部位采取

3.冷藏速送：装有冰块或干冰容器内（一）供分离病毒、检出核酸及抗原标本（二）检测特异性抗体标本

采集双份血清，4-20℃保留如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第25页病毒材料采集与检验结果关系采取标本时期检验病毒及其成份测定抗体潜伏期及前驱期刚发病或急性期恢复期及康复期较难查见最多查见极难查见未增多未增多或增多不显著显著增多（常超出4倍）如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第26页病毒分离是诊疗病毒感染金标准，一旦阳性，即可确诊。不适合用于快速诊疗，操作复杂，试验成本高，阳性检出率低等有时不得不分离病毒，比如发觉了一个新病毒病，必须分离病毒进行研究，或者分离株判定对流行病学有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望取得天然弱毒株等。二、常规分离与判定如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第27页（一）病毒分离标本采集杀灭杂菌（青链霉素）接种判定病毒种型易感动物出现病状鸡胚病变或死亡细胞培养细胞病变三大方法如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第28页（二）病毒判定1.形态学判定2.血吸附和血凝作用感染细胞含有吸附红细胞能力感染细胞培养液中有许多游离病毒存在，含有凝集红细胞作用如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第29页红细胞吸附正常细胞（1）血吸附作用吸附试验可经过特异抗血清抑制来到达判定含有吸附特征病毒如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第30页（2）血凝作用血凝试验血凝抑制试验如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第31页（3）病毒成份直接检测用免疫学或分子生物学技术直接检验感染细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第32页三、电子显微镜检验

透射电子显微镜

（3）免疫电镜技术(Immuneelectronmicroscopy，IEM)（1）免疫凝集电镜技术（2）免疫电镜定位技术酶标识染色

如何通过免疫指标检测反应病毒或胞外菌感染第33页四、血清学试验

是一个常见诊疗病毒病方法。可采取ELISA、琼脂扩散、中和试验、标识抗体技术等免疫血清学方法检验病畜抗体消长情况和发病组织中病毒抗原。如何通过免疫指