如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座

一、猪瘟ELISA原理——阻断（竞争）ELISA

抗体抗原加入样品洗涤+酶标识物洗涤+底物蓝色淡蓝色终止读数阻断（竞争）ELISA原理比如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第1页猪瘟疫苗免疫评定—关注两点阳性率：猪瘟抗体（阻断率（Blocking）≥40%，判为阳性结果；30%＜Blocking＜40%，判为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结果）；免疫合格率：阻断率（Blocking）≥50%，即为免疫合格。免疫合格百分比即为免疫合格率。

如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第2页变异系数：CoefficientofVariation(CV)

变异系数计算是平均个体改变，以平均滴度背离百分数来表示公式以下

标准偏差（STDEV）CV=X100%

平均阻断率CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡、相同反应CV≥60%,显示了群内猪只滴度反应改变高于正常预计值如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第3页猪瘟检测应用免疫评定：商品猪：猪瘟二免后4-6周，要求：阳性率≥80%,CV≤40%种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求：免疫合格率≥80%（严格一点，要≥90%）,CV≤40%后备猪（全群检测）：进入隔离舍后1-2周、进入配种舍前1个月（6-6.5月龄），要求：Blocking≥40%，阴性猪补打疫苗，3周后复检，不合格淘汰。如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第4页猪瘟检测应用仔猪首免日龄确实定：选30-60头仔猪，日龄和体重相近，每窝1-2头，确认没有野毒感染风险，不接种猪瘟疫苗连续采血：出生后7天、14天、21天、28天、35天、42天检测抗体水平要求：CSFAbBlock≤30%仔猪占20%-40%时为首免日龄(依据感染压力和平均阻断率而定)。如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第5页二、蓝耳ELISA原理——间接ELISA

抗体抗原加入样品洗涤+酶标识物洗涤+底物蓝色无色终止读数间接ELISA原理如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第6页结果判断结果判定：蓝耳抗体（S/P≥0.4，判为阳性结果；S/P<0.4，判为阴性结果）免疫猪群0.4＜S/P≤2.5；对于过高抗体种猪，隔离喂养，2周后采血检测，若抗体处于上升趋势种猪则淘汰非免疫猪群S/P值≥0.4淘汰或隔离喂养如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第7页应用公猪季度性监测全部公猪

，一年4次要求：

S/P≥2.5公猪暂停使用(1-2个月)或PCR确认感染状态母猪季度性监测母猪

要求：S/P应主要在2.5≥S/P≥0.4(90%母猪抗体在免疫后转阳)后备母猪和后备公猪在引进种群前1个月，全群监测要求：S/P≥2.5和S/P≤0.4暂停引入繁殖群如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第8页应用动态检测4周龄、10周龄猪群，每次20-30样本主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，(对于不稳定群体,延迟转群或免疫等)，假如S/P≥2.5百分比超出5%，则判断该场蓝耳不稳定，有感染；没有则稳定。如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第9页三、伪狂犬伪狂犬gE：结果成立条件：阴性对照平均值-阳性对照平均值必须大于或等于0.3；不然试验无效。判定结果：假如S/N值低于或等于0.60，样品应判定为阳性；假如S/N值大于0.70，样品应判为阴性；处于0.6~0.7样品判定为可疑，间隔两周时间可重新检测。伪狂犬病毒gE片段gB片段疫苗病毒片段如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第10页猪群PRV感染情况普查采样要求公猪群：全部采样生产母猪群：随机采样30个样本15周龄后生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本检测方法IDEXXPRVgIELISAS/N≤0.6阳性，S/N＞0.7阴性0.6<S/N≤0.7隔离2周后重复检测普查结果分析：低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化高感染群：种猪阳性率10%以上，低于30%，可做净化；高于30%，经过疫苗控制，来稳定猪群如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第11页伪狂犬疫苗免疫评定—针对阴性场商品猪群免疫疫苗后4-6周，随机采样20-30份要求：gE抗体检测全部为阴性；gB抗体检测阳性率≥95%如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第12页伪狂犬评级标准：伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性稳定场伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体阳性率到达20%以上，则为阳性不稳定稳定场如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第13页应用—净化母猪群,公猪群(全部)过去6-12个月没有使用全病毒灭活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗

若S/N≤0.6则淘汰（对于怀孕母猪:能够先隔离,产后2周淘汰）;若0.6<S/N≤0.7淘汰或隔离2周后重复检测,阳性者淘汰;间隔6,12个月重复检测全群,若前后两次检测全部为阴性，则后续检测不需要全群采样,能够按季度检测:每群随机采样15-20份;若季度检测时出现阳性猪只,其所在猪舍则需要全部检测,阳性淘汰如何看抗体检测结果及检测应用专家讲座第14页商品群随机抽样检测