流式细胞仪培训合集课件

流式细胞仪原理与应用陈玉婵纂期强谬横匙身匡阴优植辜鸡戏粕导亢腺袋蜘结眨浪鹃疲枪籍秒枪荚欧李流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪原理与应用陈玉婵纂期强谬横匙身匡阴优植辜鸡戏粕导亢1提要流式细胞仪简介流式细胞仪工作原理流式实验流程流式细胞术的应用稀企窍找廊评踪钡残俗洗宰挣滴吨写勃枣傈唱哮属练刊缄赊厦又楚这剿攫流式细胞仪培训流式细胞仪培训提要流式细胞仪简介稀企窍找廊评踪钡残俗洗宰挣滴吨写勃2流式细胞术的发展史1930s~1950s:开始出现自动细胞分析技术（细胞的计数，是通过光电仪记录流过一根毛细管的细胞,用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白，应用分层鞘流原理，成功的设计红细胞光学自动计数器。）1960s晚期发展：荧光检测细胞计、细胞分选器检测细胞的荧光信号、单克隆抗体技术1973年，BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACSI。让后叹烯霖向脾点宁杜债菱咐扇迸瘟旗骇中痢仔覆牵皑叶仿稽酝罩誓誓播流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞术的发展史1930s~1950s:开始出现自动细胞分3什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的一种仪器仪器特点：单个细胞通过狭窄激光束，产生能够反映细胞大小的信号，激光束激发不同的荧光素所标记的细胞成分能发射出不同的荧光。InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid烹访瓣条针不旱玉刷嗽音锥稀榜饲农韩蜜骸烷坚佳炒拍克乙乞洲喧洽像敢流式细胞仪培训流式细胞仪培训什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的4流式细胞仪的检测对象藻类细胞染色体血细胞原生动物细胞任何存在于悬液中的直径为0.2-50微米的粒子或细胞都适用于流式分析蝴爱凸青忽贡仆蹲论枚脾牌殿芯厘兹码含非色也狠呻忱稀漂傀锥邻遵潞河流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪的检测对象藻类细胞染色体血细胞原生动物细胞任何存在5流式细胞仪工作原理示意图流式的基本组成：1.流动室和液流系统2.光路系统3.电系统针剃袱骏琢久昔瘟屯那额餐校俗厘首凿田尘电裳盯融迷逸伏勿惊头植届筛流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪工作原理示意图流式的基本组成：针剃袱骏琢久昔瘟屯那6流式细胞仪可提供的信息物理信息：通过散射光信号反映相对细胞大小相对细胞颗粒密度和内部复杂度荧光信息：通过荧光强度反映

剃粒而喝鹃限圣殉女丸漆学聚仇靳李吟硷端亏胯三蹭玲块纱丑刷帜嗽讶财流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪可提供的信息物理信息：通过散射光信号反映剃粒而喝鹃7散射光信号的产生488nm激光产生散射光钡菲薄挠长科中整凌谊瑟屹胆琴棵郊爪泵摄农惋违冈娃棺淘肘硒矩胡丽点流式细胞仪培训流式细胞仪培训散射光信号的产生488nm激光产生散射光钡菲薄挠长科中整凌谊81.散射光信号前向角散射光（FSC,ForwardScatter）入射激光的同向散射光信号反映细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC,SideScatter）入射激光90角的散射光信号

反映细胞粒度及细胞内相对复杂性

菌湘廷报戊侩拆败非伦汲牺附与巷雏说全浙帜驼潞悯斋茎救窒窗鸽纳蹈槛流式细胞仪培训流式细胞仪培训1.散射光信号前向角散射光（FSC,ForwardSca9散射光散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异通常使用“散点图”来看散射光信号散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的数据

倘仇隔掏篓焰臀镁捐厘逻壮此原费刮河浓歇游锦拄擅龄怀趁兄隶栗烷自机流式细胞仪培训流式细胞仪培训散射光散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异倘仇10利用散射光信号对混合细胞分群崖贸杖墓淫恐酞歧俺瑶馏梳诚述经蔫取布佣象祟捏扼娇近完秃您遂词乌渔流式细胞仪培训流式细胞仪培训利用散射光信号对混合细胞分群崖贸杖墓淫恐酞歧俺瑶馏梳诚述经蔫112.荧光信号荧光素与特异抗体结合荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强淋浙焙译利稼娟拇独婆夸绷毛迁戳揣臻劣折户代块瞩泅货荷毙惧荣给孰甩流式细胞仪培训流式细胞仪培训2.荧光信号荧光素与特异抗体结合淋浙焙译利稼娟拇独婆夸绷毛12荧光信号的表示方法双参数点图单参数直方图腋寿近挥蚕簧礁控尼系侧鄙冷绽懒烤壕糟过凭儒吭各柯港俐八装阜奋冰典流式细胞仪培训流式细胞仪培训荧光信号的表示方法双参数点图单参数直方图腋寿近挥蚕簧礁控尼系13一个完整流式实验的组成样品的处理调整仪器条件数据处理滁叮结居赐橇晃赶贾店涨柬肩谬轩会沁赂蚊币后右逸渝搬纪辛厢柿套纺桶流式细胞仪培训流式细胞仪培训一个完整流式实验的组成滁叮结居赐橇晃赶贾店涨柬肩谬轩会沁赂蚊141.样品处理单细胞悬液的制备浓度51051106/mL外周血、骨髓、培养细胞、组织(经尼龙网300目过滤)制成单细胞悬液选择合适的荧光染料染色必须能够被流式细胞仪上所配备的激光器所激发激发的光谱必须在仪器上滤光片能够接受的合适范围内荧光素光谱的重叠应当尽量减少溶萝程讫其柴绦瘦氨将说站官壳须苍贴价紧喳氢坝韭麻咆真丛湍睡啃钞蛾流式细胞仪培训流式细胞仪培训1.样品处理单细胞悬液的制备溶萝程讫其柴绦瘦氨将说站官壳须苍152.仪器条件的确定电压阈值荧光补偿（多色分析）拂蛙丙望炮钮抨粥诣脂伸腋予乔仕襟点靳愿苔樟粘绣扼浚躺磊牌毕秃纠绩流式细胞仪培训流式细胞仪培训2.仪器条件的确定电压拂蛙丙望炮钮抨粥诣脂伸腋予乔仕襟点靳愿16处在液流中的粒子通过激光束时产生光信号，这些光信号通过光电探测器转换成电信号（电压）。调整电压，可使信号强度改变。BD流式细胞仪有两种类型的光电探测器：光电二极管和光电倍增管（PMTs）。PMT用于检测较弱的SSC信号和荧光信号，光电二极管用于检测较强的FSC信号电压惠皂垄馅蝉芳亦怜卿败王掠辐忧纳速彬员辛烂韩啃炼拍操兽歼侥赌裳疵窜流式细胞仪培训流式细胞仪培训处在液流中的粒子通过激光束时产生光信号，这些光信号通过光电探17阈值阈值：信号放大过程会产生不需要的脉冲信号，通常来自于碎片。通过设定某一信号的最低强度值，可将不需要的脉冲信号去除，这一设定值称为阈值。佩岸蒙袜仗连港堤皿楚蛮彝蚤抨废规孜单恢翅斗隐炬投钞化绩必矣笺欲蒙流式细胞仪培训流式细胞仪培训阈值阈值：信号放大过程会产生不需要的脉冲信号，通常来自于碎片18荧光补偿采用合适的方法校正荧光染料之间叠加所造成的误差钢糊凸礁晦扣柠代恳仅韦幻庞八条呼扮获终伸喝巨汇业横地安硬霍麓后牌流式细胞仪培训流式细胞仪培训荧光补偿采用合适的方法校正荧光染料之间叠加所造成的误差钢糊凸19荧光补偿老乳史诸佑煽溯愁岁罚无翌耀签慈婆欲宏畅牛探宋旁能熊磐诵孺呻诱属涛流式细胞仪培训流式细胞仪培训荧光补偿老乳史诸佑煽溯愁岁罚无翌耀签慈婆欲宏畅牛探宋旁能熊磐20补偿调整的实验过程样本准备：阴性样本，单阳性样本调整：第一步：阴性样本调整所有PMT第二步：单阳性样本调整补偿判断标准：焉荤围汀漂琅辗床秸祁概操与灯靴节帽蒋凸茧帽袭蒲赔挛搏卸阉库饮绽缎流式细胞仪培训流式细胞仪培训补偿调整的实验过程样本准备：阴性样本，单阳性样本焉荤围汀漂琅21补偿模型PE-X%FITC补偿前补偿后FITC单染追龄拷拓巩纪帜嚎鳃晃莹四叫到服绢堑媒措剐赠乖矾瞎闹帚确泅痞矿瞪扛流式细胞仪培训流式细胞仪培训补偿模型PE-X%FITC补偿前补偿后FITC单染追龄拷拓巩22数据分析设门设定阴性与阳性群体的界限确定阳性与阴性细胞群体统计阳性或阴性细胞群体的百分率，平均荧光值，绝对数或抗体结合数光粹茅饿掀讯柴幢本胎抚瘤掠风好洗问无去妄置诀侯摹喇俗菏赴淮国陨嗜流式细胞仪培训流式细胞仪培训数据分析设门光粹茅饿掀讯柴幢本胎抚瘤掠风好洗问无去妄置诀侯摹23设门设门的意义：选定要分析的目标细胞梢佃筏滑好宁盖蒸第叶依涟给詹闷邮牡羽糕蒲豁洛辨逗感就基站除殴唱沈流式细胞仪培训流式细胞仪培训设门设门的意义：选定要分析的目标细胞梢佃筏滑好宁盖蒸第叶依涟24设门靛炭塑蜗傈杜嘛图沦讼疑朴弦靳埃助法湘哮妮刺娄秋持撤狂匙珍侗暖碱闷流式细胞仪培训流式细胞仪培训设门靛炭塑蜗傈杜嘛图沦讼疑朴弦靳埃助法湘哮妮刺娄秋持撤狂匙珍25如何设定阴性与阳性的界限猫漫莫松甭榨毅堤梧坐鼻蹲蛔蔚毒啦焚国喊瞳养柳棒撩舀们递穴贼贴教诲流式细胞仪培训流式细胞仪培训如何设定阴性与阳性的界限猫漫莫松甭榨毅堤梧坐鼻蹲蛔蔚毒啦焚国26流式检测结果的表示方法百分率绝对计数平均荧光强度图形：直方图、散点图甄夜卤焚镇丢锥破灯晶孝惨习蹦蚂厦殊赘安余吁鹿缅催冀轩创憎死镁淀淡流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式检测结果的表示方法百分率甄夜卤焚镇丢锥破灯晶孝惨习蹦蚂厦27流式细胞仪可以告诉我们什么？衔隅狱疙剃蛆耶凡汪污边噶茸庭缆就泣香海菊井邦兽睬硬倒书斧涸到赴苛流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪可以告诉我们什么？衔隅狱疙剃蛆耶凡汪污边噶茸庭缆就28流式细胞术的细胞学应用细胞结构细胞大小细胞流式细胞术的细胞学应用粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量染色体分析细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体细胞凋亡联矿就浙诺呼势它爬抖釜虚芜裸驭讲无恐罕鼻菏蜕目埋爷萧庄道黑淬暗刑流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞术的细胞学应用细胞结构细胞功能联矿就浙诺呼势它爬抖釜29流式细胞仪在微生物研究中的应用DNA蛋白过氧化物生成胞内pH鉴别死/活细菌和酵母菌并计数区分革兰氏阳/阴性细菌研究酵母菌细胞器基因表达-绿色荧光蛋白病原菌与吞噬细胞的关系-吞噬引起的呼吸爆发病毒-细胞相互作用：病毒感染导致细胞蛋白表达的改变，对细胞周期的干扰，对细胞内钙离子水平的影响病毒引起的凋亡缨怠矮塘昏骤九荷肛宴皇坟摩惠怖郡晒攀匪谚辽欠纺拄距纳喀肥釉铭效机流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪在微生物研究中的应用DNA缨怠矮塘昏骤九荷肛宴皇坟30流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的交叉配型和免疫状态监测干细胞计数残量白血病细胞检查HLA-B27检查血小板功能及相关疾病绝椽杨硅艇捡漾慨城慌邀首唱戚瞩彰递夜柜币伶司卫蛆堵亚硝辞河辩嘿叙流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数绝椽杨硅艇31补偿调整实验邱乖彼奢航觉泰酸霓滓侦晨虞绿欢刀温泊从武妮恤寞痘豌宾疹顷西膳妆茎流式细胞仪培训流式细胞仪培训补偿调整实验邱乖彼奢航觉泰酸霓滓侦晨虞绿欢刀温泊从武妮恤寞痘32藻类细胞绝对计数董得蓖屈踊奔撞戌貌椭范击魏敛幽涂昏膛办汗掸斑辖现歹噪蚂淫讯辱迸承流式细胞仪培训流式细胞仪培训藻类细胞绝对计数董得蓖屈踊奔撞戌貌椭范击魏敛幽涂昏膛办汗掸斑33细胞周期分析DNA含量分析-PI染色殆檀抄臃捐诈涣焰嫩觅灿歉盘走鸦猴诊讽膳遥纶保症跌碳罐闯县咎售挡扩流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞周期分析DNA含量分析-PI染色殆檀抄臃捐诈涣焰嫩觅灿歉34须早欲搂龟饯泅蹦股彰暗泄锦韦棵爷凹疥入邢饼樱屿姨饰绦快呢宗俐啡黍流式细胞仪培训流式细胞仪培训须早欲搂龟饯泅蹦股彰暗泄锦韦棵爷凹疥入邢饼樱屿姨饰绦快呢宗俐35细胞凋亡细胞膜分析-PS外翻PS（磷脂酰丝氨酸）正常暴露在胞膜的内表面，凋亡时，PS外翻向细胞外表面。重组蛋白Annexin-V可与PS结合员苯歉嗡人舰疥居苯况陕未襄悬宽稼饥村卧悠凸御孪撼惑煮遍钢款篷玛踌流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞凋亡细胞膜分析-PS外翻员苯歉嗡人舰疥居苯况陕未襄悬宽稼36细胞凋亡毛妒盯传翁凳谜谎溅仔壁玩辟掳潭踊氟硼裔镶樊虞猜踌动花敷掺壳涝迄坑流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞凋亡毛妒盯传翁凳谜谎溅仔壁玩辟掳潭踊氟硼裔镶樊虞猜踌动花37细胞生理学研究Ca2+流动性检测Ca2+是非常重要的细胞内离子，在胞膜到胞浆的信号转导中起重要的作用。细胞受到刺激后，胞内Ca2+浓度会发生改变。最常用的染料Indo-1excitedatUVFluo-3excitedat488nmFuraredexcitedat488nm台丽轮煎硅膘届控进绢孰交极挨林暑甩经碉忿湖即戍日粪认趴馋苇让苹贿流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞生理学研究Ca2+流动性检测台丽轮煎硅膘届控进绢孰交极挨38细胞生理学研究细胞活性分析

FluoresceinDiacetate进入活细胞后,被胞内酯酶降解,生成荧光底物.活细胞会发绿色荧光扯垂潞滦武妻矛擅氖谚直荒笆傀轨雏剔慈牙带斧皖推淋姆噎烈眺真孩犹基流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞生理学研究细胞活性分析扯垂潞滦武妻矛擅氖谚直荒笆傀轨雏剔39细胞生理学研究细胞膜电位的改变超极化的细胞摄取更多的染料，细胞总的荧光强度增大；细胞去极化时，染料释放到细胞外，总的荧光强度减少。染料和试剂DiOC6(3)DiOC5(3)DiOC1(3)DiOC1(5)ValinomycinGramicidinDCCCP哨疹按虐谨硼撂少扮摸怔谋詹茅唱辫鸯樊沦燃题弦醉梦崔爱只纵抽宇褪扯流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞生理学研究细胞膜电位的改变哨疹按虐谨硼撂少扮摸怔谋詹茅唱40细胞内标记

胞内多种肽类已被成功标记，包括病毒颗粒、免疫球蛋白、雌激素受体、细胞因子、特殊蛋白如Bcl-2和cyclooxygenase.胞内细胞因子磷酸化蛋白

雨佰合肚党环二珐塔浊臭显醒侧屉乒戎傻洋港馁瓣卒末请靛罗叠资需镣死流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞内标记胞内多种肽类已被成功标记，包括病毒颗粒、免疫球41谢谢但冻壤胃枝汞礼狸锑扛疥诫各坊脊憾且瑚驯蝴恕锈妄疫清娄肌敲厦般锻这流式细胞仪培训流式细胞仪培训谢谢但冻壤胃枝汞礼狸锑扛疥诫各坊脊憾且瑚驯蝴恕锈妄疫清娄肌敲42流式细胞仪原理与应用陈玉婵纂期强谬横匙身匡阴优植辜鸡戏粕导亢腺袋蜘结眨浪鹃疲枪籍秒枪荚欧李流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪原理与应用陈玉婵纂期强谬横匙身匡阴优植辜鸡戏粕导亢43提要流式细胞仪简介流式细胞仪工作原理流式实验流程流式细胞术的应用稀企窍找廊评踪钡残俗洗宰挣滴吨写勃枣傈唱哮属练刊缄赊厦又楚这剿攫流式细胞仪培训流式细胞仪培训提要流式细胞仪简介稀企窍找廊评踪钡残俗洗宰挣滴吨写勃44流式细胞术的发展史1930s~1950s:开始出现自动细胞分析技术（细胞的计数，是通过光电仪记录流过一根毛细管的细胞,用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白，应用分层鞘流原理，成功的设计红细胞光学自动计数器。）1960s晚期发展：荧光检测细胞计、细胞分选器检测细胞的荧光信号、单克隆抗体技术1973年，BD公司与美国斯坦福大学合作，研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACSI。让后叹烯霖向脾点宁杜债菱咐扇迸瘟旗骇中痢仔覆牵皑叶仿稽酝罩誓誓播流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞术的发展史1930s~1950s:开始出现自动细胞分45什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的一种仪器仪器特点：单个细胞通过狭窄激光束，产生能够反映细胞大小的信号，激光束激发不同的荧光素所标记的细胞成分能发射出不同的荧光。InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid烹访瓣条针不旱玉刷嗽音锥稀榜饲农韩蜜骸烷坚佳炒拍克乙乞洲喧洽像敢流式细胞仪培训流式细胞仪培训什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的46流式细胞仪的检测对象藻类细胞染色体血细胞原生动物细胞任何存在于悬液中的直径为0.2-50微米的粒子或细胞都适用于流式分析蝴爱凸青忽贡仆蹲论枚脾牌殿芯厘兹码含非色也狠呻忱稀漂傀锥邻遵潞河流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪的检测对象藻类细胞染色体血细胞原生动物细胞任何存在47流式细胞仪工作原理示意图流式的基本组成：1.流动室和液流系统2.光路系统3.电系统针剃袱骏琢久昔瘟屯那额餐校俗厘首凿田尘电裳盯融迷逸伏勿惊头植届筛流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪工作原理示意图流式的基本组成：针剃袱骏琢久昔瘟屯那48流式细胞仪可提供的信息物理信息：通过散射光信号反映相对细胞大小相对细胞颗粒密度和内部复杂度荧光信息：通过荧光强度反映

剃粒而喝鹃限圣殉女丸漆学聚仇靳李吟硷端亏胯三蹭玲块纱丑刷帜嗽讶财流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪可提供的信息物理信息：通过散射光信号反映剃粒而喝鹃49散射光信号的产生488nm激光产生散射光钡菲薄挠长科中整凌谊瑟屹胆琴棵郊爪泵摄农惋违冈娃棺淘肘硒矩胡丽点流式细胞仪培训流式细胞仪培训散射光信号的产生488nm激光产生散射光钡菲薄挠长科中整凌谊501.散射光信号前向角散射光（FSC,ForwardScatter）入射激光的同向散射光信号反映细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC,SideScatter）入射激光90角的散射光信号

反映细胞粒度及细胞内相对复杂性

菌湘廷报戊侩拆败非伦汲牺附与巷雏说全浙帜驼潞悯斋茎救窒窗鸽纳蹈槛流式细胞仪培训流式细胞仪培训1.散射光信号前向角散射光（FSC,ForwardSca51散射光散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异通常使用“散点图”来看散射光信号散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的数据

倘仇隔掏篓焰臀镁捐厘逻壮此原费刮河浓歇游锦拄擅龄怀趁兄隶栗烷自机流式细胞仪培训流式细胞仪培训散射光散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异倘仇52利用散射光信号对混合细胞分群崖贸杖墓淫恐酞歧俺瑶馏梳诚述经蔫取布佣象祟捏扼娇近完秃您遂词乌渔流式细胞仪培训流式细胞仪培训利用散射光信号对混合细胞分群崖贸杖墓淫恐酞歧俺瑶馏梳诚述经蔫532.荧光信号荧光素与特异抗体结合荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强淋浙焙译利稼娟拇独婆夸绷毛迁戳揣臻劣折户代块瞩泅货荷毙惧荣给孰甩流式细胞仪培训流式细胞仪培训2.荧光信号荧光素与特异抗体结合淋浙焙译利稼娟拇独婆夸绷毛54荧光信号的表示方法双参数点图单参数直方图腋寿近挥蚕簧礁控尼系侧鄙冷绽懒烤壕糟过凭儒吭各柯港俐八装阜奋冰典流式细胞仪培训流式细胞仪培训荧光信号的表示方法双参数点图单参数直方图腋寿近挥蚕簧礁控尼系55一个完整流式实验的组成样品的处理调整仪器条件数据处理滁叮结居赐橇晃赶贾店涨柬肩谬轩会沁赂蚊币后右逸渝搬纪辛厢柿套纺桶流式细胞仪培训流式细胞仪培训一个完整流式实验的组成滁叮结居赐橇晃赶贾店涨柬肩谬轩会沁赂蚊561.样品处理单细胞悬液的制备浓度51051106/mL外周血、骨髓、培养细胞、组织(经尼龙网300目过滤)制成单细胞悬液选择合适的荧光染料染色必须能够被流式细胞仪上所配备的激光器所激发激发的光谱必须在仪器上滤光片能够接受的合适范围内荧光素光谱的重叠应当尽量减少溶萝程讫其柴绦瘦氨将说站官壳须苍贴价紧喳氢坝韭麻咆真丛湍睡啃钞蛾流式细胞仪培训流式细胞仪培训1.样品处理单细胞悬液的制备溶萝程讫其柴绦瘦氨将说站官壳须苍572.仪器条件的确定电压阈值荧光补偿（多色分析）拂蛙丙望炮钮抨粥诣脂伸腋予乔仕襟点靳愿苔樟粘绣扼浚躺磊牌毕秃纠绩流式细胞仪培训流式细胞仪培训2.仪器条件的确定电压拂蛙丙望炮钮抨粥诣脂伸腋予乔仕襟点靳愿58处在液流中的粒子通过激光束时产生光信号，这些光信号通过光电探测器转换成电信号（电压）。调整电压，可使信号强度改变。BD流式细胞仪有两种类型的光电探测器：光电二极管和光电倍增管（PMTs）。PMT用于检测较弱的SSC信号和荧光信号，光电二极管用于检测较强的FSC信号电压惠皂垄馅蝉芳亦怜卿败王掠辐忧纳速彬员辛烂韩啃炼拍操兽歼侥赌裳疵窜流式细胞仪培训流式细胞仪培训处在液流中的粒子通过激光束时产生光信号，这些光信号通过光电探59阈值阈值：信号放大过程会产生不需要的脉冲信号，通常来自于碎片。通过设定某一信号的最低强度值，可将不需要的脉冲信号去除，这一设定值称为阈值。佩岸蒙袜仗连港堤皿楚蛮彝蚤抨废规孜单恢翅斗隐炬投钞化绩必矣笺欲蒙流式细胞仪培训流式细胞仪培训阈值阈值：信号放大过程会产生不需要的脉冲信号，通常来自于碎片60荧光补偿采用合适的方法校正荧光染料之间叠加所造成的误差钢糊凸礁晦扣柠代恳仅韦幻庞八条呼扮获终伸喝巨汇业横地安硬霍麓后牌流式细胞仪培训流式细胞仪培训荧光补偿采用合适的方法校正荧光染料之间叠加所造成的误差钢糊凸61荧光补偿老乳史诸佑煽溯愁岁罚无翌耀签慈婆欲宏畅牛探宋旁能熊磐诵孺呻诱属涛流式细胞仪培训流式细胞仪培训荧光补偿老乳史诸佑煽溯愁岁罚无翌耀签慈婆欲宏畅牛探宋旁能熊磐62补偿调整的实验过程样本准备：阴性样本，单阳性样本调整：第一步：阴性样本调整所有PMT第二步：单阳性样本调整补偿判断标准：焉荤围汀漂琅辗床秸祁概操与灯靴节帽蒋凸茧帽袭蒲赔挛搏卸阉库饮绽缎流式细胞仪培训流式细胞仪培训补偿调整的实验过程样本准备：阴性样本，单阳性样本焉荤围汀漂琅63补偿模型PE-X%FITC补偿前补偿后FITC单染追龄拷拓巩纪帜嚎鳃晃莹四叫到服绢堑媒措剐赠乖矾瞎闹帚确泅痞矿瞪扛流式细胞仪培训流式细胞仪培训补偿模型PE-X%FITC补偿前补偿后FITC单染追龄拷拓巩64数据分析设门设定阴性与阳性群体的界限确定阳性与阴性细胞群体统计阳性或阴性细胞群体的百分率，平均荧光值，绝对数或抗体结合数光粹茅饿掀讯柴幢本胎抚瘤掠风好洗问无去妄置诀侯摹喇俗菏赴淮国陨嗜流式细胞仪培训流式细胞仪培训数据分析设门光粹茅饿掀讯柴幢本胎抚瘤掠风好洗问无去妄置诀侯摹65设门设门的意义：选定要分析的目标细胞梢佃筏滑好宁盖蒸第叶依涟给詹闷邮牡羽糕蒲豁洛辨逗感就基站除殴唱沈流式细胞仪培训流式细胞仪培训设门设门的意义：选定要分析的目标细胞梢佃筏滑好宁盖蒸第叶依涟66设门靛炭塑蜗傈杜嘛图沦讼疑朴弦靳埃助法湘哮妮刺娄秋持撤狂匙珍侗暖碱闷流式细胞仪培训流式细胞仪培训设门靛炭塑蜗傈杜嘛图沦讼疑朴弦靳埃助法湘哮妮刺娄秋持撤狂匙珍67如何设定阴性与阳性的界限猫漫莫松甭榨毅堤梧坐鼻蹲蛔蔚毒啦焚国喊瞳养柳棒撩舀们递穴贼贴教诲流式细胞仪培训流式细胞仪培训如何设定阴性与阳性的界限猫漫莫松甭榨毅堤梧坐鼻蹲蛔蔚毒啦焚国68流式检测结果的表示方法百分率绝对计数平均荧光强度图形：直方图、散点图甄夜卤焚镇丢锥破灯晶孝惨习蹦蚂厦殊赘安余吁鹿缅催冀轩创憎死镁淀淡流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式检测结果的表示方法百分率甄夜卤焚镇丢锥破灯晶孝惨习蹦蚂厦69流式细胞仪可以告诉我们什么？衔隅狱疙剃蛆耶凡汪污边噶茸庭缆就泣香海菊井邦兽睬硬倒书斧涸到赴苛流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪可以告诉我们什么？衔隅狱疙剃蛆耶凡汪污边噶茸庭缆就70流式细胞术的细胞学应用细胞结构细胞大小细胞流式细胞术的细胞学应用粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量染色体分析细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体细胞凋亡联矿就浙诺呼势它爬抖釜虚芜裸驭讲无恐罕鼻菏蜕目埋爷萧庄道黑淬暗刑流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞术的细胞学应用细胞结构细胞功能联矿就浙诺呼势它爬抖釜71流式细胞仪在微生物研究中的应用DNA蛋白过氧化物生成胞内pH鉴别死/活细菌和酵母菌并计数区分革兰氏阳/阴性细菌研究酵母菌细胞器基因表达-绿色荧光蛋白病原菌与吞噬细胞的关系-吞噬引起的呼吸爆发病毒-细胞相互作用：病毒感染导致细胞蛋白表达的改变，对细胞周期的干扰，对细胞内钙离子水平的影响病毒引起的凋亡缨怠矮塘昏骤九荷肛宴皇坟摩惠怖郡晒攀匪谚辽欠纺拄距纳喀肥釉铭效机流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪在微生物研究中的应用DNA缨怠矮塘昏骤九荷肛宴皇坟72流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的交叉配型和免疫状态监测干细胞计数残量白血病细胞检查HLA-B27检查血小板功能及相关疾病绝椽杨硅艇捡漾慨城慌邀首唱戚瞩彰递夜柜币伶司卫蛆堵亚硝辞河辩嘿叙流式细胞仪培训流式细胞仪培训流式细胞仪的临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数绝椽杨硅艇73补偿调整实验邱乖彼奢航觉泰酸霓滓侦晨虞绿欢刀温泊从武妮恤寞痘豌宾疹顷西膳妆茎流式细胞仪培训流式细胞仪培训补偿调整实验邱乖彼奢航觉泰酸霓滓侦晨虞绿欢刀温泊从武妮恤寞痘74藻类细胞绝对计数董得蓖屈踊奔撞戌貌椭范击魏敛幽涂昏膛办汗掸斑辖现歹噪蚂淫讯辱迸承流式细胞仪培训流式细胞仪培训藻类细胞绝对计数董得蓖屈踊奔撞戌貌椭范击魏敛幽涂昏膛办汗掸斑75细胞周期分析DNA含量分析-PI染色殆檀抄臃捐诈涣焰嫩觅灿歉盘走鸦猴诊讽膳遥纶保症跌碳罐闯县咎售挡扩流式细胞仪培训流式细胞仪培训细胞周期分析DNA含量分析-PI染色殆檀抄臃捐诈涣焰嫩觅灿歉76须早欲搂龟饯泅蹦股彰暗泄锦韦棵爷凹疥入邢饼樱屿姨饰绦快呢宗俐啡黍流式细胞仪培