乳与乳制品病原微生物检验方法志贺氏菌的检验

1、乳与乳制品病原微生物检验方法志贺氏菌的检验 YLNB 4.41.仪器及器材1.1 架盘药物天平:0500g,精确至0.5g 1.2 均质器或灭菌乳钵。1.3 恒温培养箱：361，421.4 冰箱1.5 灭菌广口瓶:500mL。1.6 灭菌锥形瓶:500mL,250mL。1.7 灭菌平皿:直径90mm1.8 显微镜：10100。1.9 硝酸纤维素滤膜:150mm50mm, 0.45m。临用时切成两张,每张70mm50mm,用铅笔划格,每格6mm6mm。每行10格,分6行。灭菌备用。2. 培养基和试剂2.1 CN增菌液:按GB 4789.28中4.17规定。2.2 HE琼脂:按GB 4789.28

2、中4.21规定。2.3 SS琼脂:按GB 4789.28中4.22规定。2.4 麦康凯琼脂:按GB 4789.28中4.24规定。2.5 伊红美蓝琼脂(EMB):按GB 4789.28中4.25规定。2.6 三糖铁琼脂(TSI):按GB 4789.28中4.26、4.27规定。2.7 葡萄糖半固体管:按GB 4789.28中4.31规定。2.8 半固体管:按GB 4789.28中4.30规定。2.9 葡萄糖铵琼脂:按GB 4789.28中3.8规定。2.10 尿素琼脂(pH7.2):按GB 4789.28中3.15规定。2.11 西蒙氏柠檬酸盐琼脂:按GB 4789.28中3.5规定。2.12

3、 氰化钾(KCN)培养基:按GB 4789.28中3.16规定。2.13 氨基酸脱羧酶试验培养基:赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基,按GB 4789.28中3.12规定。2.14 糖发酵管:棉子糖、甘露醇、甘油、七叶苷及水杨苷,按GB 4789.28中3.2规定。2.15 5%乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.32规定。2.16 蛋白胨水、靛基质试剂:按GB 4789.28中3.13规定。2.17 志贺氏菌属诊断血清。3 检验程序 志贺氏菌检验程序如下:检 样 25g+GN225ml36,68hHE琼脂或SS麦康凯或EME36,1824h 挑取可疑菌落 TSI，葡萄糖半固体如左述的各种发应结果

4、TSI底层产酸，斜面产碱,H2S不产气，无动力进一步的生化试验血清学分析葡萄糖铵试验、西蒙氏柠檬盐 赖氨酸,尿素,KCN水扬苷和七叶苷生化分群试验非志贺氏菌葡萄糖铵或任何其他阳性结果志贺氏菌分群及分型结果非志贺氏菌报 告4方法41 增菌 称取检样25g,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内,固体食品用均质器以8 00010 000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化,于36培养68h。培养时间视细菌生长情况而定,当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。42 分离和初步生化试验42.1 取增菌液1环,划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个;

5、另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板1个,于36培养1824h,志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。42.2 挑取平板上的可疑菌落,接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落,以防遗漏,经36培养1824h,分别观察结果。42.3 下述培养物可以弃去: a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物; b. 在1824h内发酵乳糖、蔗糖的培养物; c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物; d. 产气的培养物; e. 有动力的培养物; F. 产生硫化氢的培养物.42.4 凡是乳糖、蔗糖不发酵,葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体),无动力的菌株,可做血清学分型和进一步的生化试验。42.5 生化试验和血清学试验按照GB/T4789.5-2003进行。5