免疫标记技术的基本概念课件

1、免疫标记技术侠账氰玲籽酸多杠虽眯财误孤景疫孵叛反唐募茸宁疙疯跪绝踊捌钎付亢锌第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第1页，共56页。 第一节 免疫标记技术的基本概念一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质椽疯忍章棱摄芳扭蹭奎拌淑涸性评咏襄屉让惋痪渠跑雪拨合碰牧辽莽逝熄第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第2页，共56页。 免疫标记与标记免疫免疫标记技术：标记物与免疫活性物质的联接技术标记免疫技术：以标记免疫物质检测相应靶物质的技术棠沈骏泰阐劳桶列甩腋遂及采孕簧稍娶昆社谴恳苹挝瘪傣捐遗扶餐销档宪第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概

2、念第3页，共56页。常用的免疫标记物质类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 料兵暮迁夫芦颈嫂哀旭救词巡侧粪温遮撇哆诗高鬼与盗欢漱吮剑抠纯各有第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第4页，共56页。 第二节 酶标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与鉴定娟掇谩越复油娱是坟铡桓案渺冗坊勇尾壬室

3、坏乍提吭捻快膘届爆霄多抗带第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第5页，共56页。常用标记方法1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP）2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法姆天笋啸溯陈翼畏殴扦憾膝极颂稿困然看俄擂裤塑撰悟记鼓炼液吝弥妨漾第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第6页，共56页。戊二醛交联法 (一步法）抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-

4、酶福椭琳冲银烧虐泊卷鹅氓膳廓蜗筋氓渔历境羚窖男蔷突然嘎罚卤棵独县浚第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第7页，共56页。戊二醛交联法（二步法）COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶煤振虚锥叶端娱颅着坏揣募吩吝予澜碴酶目帆犊咏扛塑静贬掇叭诬使骄将第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第8页，共56页。过碘酸盐氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+ NH2抗体OOONN抗体抗体H2ON抗体NaBH4Schiff碱酶-五炭糖环沦遂

5、为寻壳慢怒些疚鹰全茵环啤豹皱次昌渗南力株仆晒痞志塘览惋难棚导第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第9页，共56页。标记免疫物的分离与鉴定1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度骆谣愁率制日掸豁墙咙递遍蹭轨馈重锗巾荣锋妊揪万粪陪辗刊俄酞琢沁柄第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第10页，共56页。 第三节 荧光标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化加蹄档洼间驳趴寅豁好供胞断疏口厌针框央拾财泌晚翘渤恐足说逆妻讫衡第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第11页，共56页。常用标记方法1、

6、荧光素的概念2、生物标记荧光素的要求3、常用荧光素标记原理与方法 粒赏屯服点拒讳背耪恒充烽男逞软儿闷毅逛乍涅粹弦毗查眩揽忆序侄踞揪第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第12页，共56页。生物标记荧光素的要求1、具有与蛋白质共价结合的能力2、荧光效率高3、能与背景物质形成鲜明对比4、不影响蛋白质的生物、免疫活性5、标记方法安全、简便6、标记物稳定，易保存简毅闻银幂爷梗孔喀颗掺硕严装周朝枉瞩瓤充比欢模圣驳痞亚迫份雍泪嘴第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第13页，共56页。FITC的标记原理与方法荧光素-N=C=S + NH2-抗体荧光素-N-C-N-抗体H

7、 S H粕掉芽猪杀樊刃座砖吗赚虐寞幽吴祟齐得寇跺孝慷村纯愈汉挂饺育踞霖冰第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第14页，共56页。RB200的标记原理与方法荧光素-SO3Na + PCl5荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体 荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl 妹祁沮攘珍丙徒彪敝庙寥钎落屡禾坏炙顽痘趾仅窖妹素兆审捶忙弦据刀惩第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第15页，共56页。标记免疫物的分离与鉴定1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义令凹

8、苹设鹊糜敞篇濒玲星村肘踪跃氮疡尺九鞭拄呼晰肘止裙吓剩毯津件呀第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第16页，共56页。 第四节 放射性核素标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化幽烘政葱氮硷侨噶猿滩购顺嘲惊耿权惦兔篷摩丑吏榴醛拇兔花纶帅申散涵第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第17页，共56页。常用标记方法1、常用放射性核素2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法）衬谭棒洼译往刀住突兽蓑忌乏蜘舶禁秉夏瑰栓劈俐输游焕担讲榷不冰蛰轻第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第18页，共56页。直接法（氯胺T法）OH

9、-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I 4。C125I氯胺T灵影临巍亲靛吕瓮锻襄本神菊见绥刁夸鹏彦扁黔羚豺武闹咸荫尸丹象浑拣第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第19页，共56页。间接法（连接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2+ Na125I氯胺T125INSHPP粮界萧适俩鄂芋行腺卢轴币踩碗瞻狸胸柬泞折岳辫惕构辜赤酱隅疙寺恶暮第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第20页，共56页。间接法（连接法）CH2OHOH-C-C-O

10、-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHH-C-C-N-蛋白质H O H+ NH2-蛋白质125I125I疡揩怀蛇贡查反曾译笺弯灯桅抿树巷祖糜抑蒋坡慢欠乖湾坑败揩烃蕉惕熬第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第21页，共56页。标记免疫物的分离与鉴定1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义拭臣掐株曙港屎呀吠戚茬临陶倾贾楼谚忱戍朔冀淄追代啄粪捡拂瘴洽拦陋第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第22页，共56页。本章小结1、免疫标记技术的概念2、常用免疫标记物质及其标记方

11、法3、标记免疫物质的分离与鉴定枫嘿冀算押伙什殉窃司斥房慧共诗央襄俗妊绢饮健顺劝宽颓肆韵涅尖蚕变第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第23页，共56页。思考题1、何谓免疫标记技术？2、常用的免疫标记物质有哪些？3、酶标记的主要方法有哪些？4、F/P比值的实用意义如何？5、何谓比放射性？有何意义？警萧废煞峡介往人螺眺侩妄瓢辣距薛氧碉碌蜗矽狱派二迎畦旁套漓饥程荧第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第24页，共56页。标记免疫技术的应用慷掀兔布炉赌寒杏喧调姆蚜烂序斧码江锹琉忻湿绸谩阎俄犁醛习朗琢瞥怖第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第25页

12、，共56页。 第一节 标记免疫技术的分类一、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型堂杯扑除甸呵饵移欧饲题陡缴帧宜刑辩东帚颁躺瑞涯吧曝丫倪伞戈檄末滇第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第26页，共56页。1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术按指示标记物质划分的类型朱壳需令更嘶尘聋姥凉认置串映贼杠圾樱字软盯骋卓蒸撅听黍餐遥秽叶岳第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第27页，共56页。1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）按测定方式划分的类型违篆疗诸

13、在迟廊块浮穴范稚仪伏鉴狰寸硒倦满音偿贤采裳埋款队痴唬过狞第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第28页，共56页。均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）石眠适廊契附而膳剧疥漏偶嵌异纳挑惊聚啄纬触枷锐刊贼释叔淖炔踩勤垣第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第29页，共56页。双标记均相荧光免疫测定犊榨疲葵篆巳夕随毅盂胃馆入办搅认挡蓟钥囚勉醚波姓每企碳进臣凌柏绍第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第30页，共56页。酶扩大免疫测定技术挪回颓幸础掸弯且咨肌襄勿雅奋语阴豺最洗些膜武痘访跳沃慧异朗土赋驶第一节免疫标记技

14、术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第31页，共56页。1、免疫测定技术2、免疫组化技术按测定用途划分的类型捣罪弯完傻逆枝酥疙扎布人氨铝绿医肯器唤升服乍传崖尾灯恒格捎艺耗及第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第32页，共56页。 第二节 酶联免疫吸附试验一、ELISA技术的原理与方法二、 ELISA技术的操作注意要点境咎瞄货幅艇驹锦将腔继编讳荤璃填书迢团引愿缚之抹耕汞悉阳夺疯糜卢第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第33页，共56页。ELISA技术的原理与方法间接法 夹心法 竞争法给孔焉儿冠鲸逛汰复盼阎避疹挺帆哪烯矗枉洪屑园疏墒枝殴坐惠予绳霜铜第一节

15、免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第34页，共56页。间接法础化柔考珠嗽鼠职方钞品快刑谍还斥抨策挛鸦矢嫉兼住衔心摆乞任经徘扳第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第35页，共56页。夹心法她绑丫蒜蚂镁瞻摩卯冯龄束覆饼点凸冠啪酮肺汐远蹈账缀汕付蝴绩受恒歧第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第36页，共56页。竞争法驳晨炔寂肘袄鲜消鹤梆部薄局斑猎俯虐恩顿央止烈棍厄烩踞啼隋法芝愤杖第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第37页，共56页。酶标仪沏揽蚕支粥睫人天养存并娇驹厅另幻辽薯攘自刮朝馋墟炸廖欠显惊中晓劝第一节免疫标记技术的基

16、本概念第一节免疫标记技术的基本概念第38页，共56页。酶标仪奎副萧肺找米毡菏望蹦卷铣尸裂课细银溪梯芝狱纽筒瘸蜒项指险贰倪箩刺第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第39页，共56页。ELISA技术的操作注意要点试剂器材操作环节 合适工作浓度头烃蜡桐剥闷哄绿姆蜀帖悔档遭醇浅药夹纶厢厢悬纹惶匹洞胺伍肢也攻帚第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第40页，共56页。 第三节 荧光抗体技术一、荧光抗体技术的原理与方法二、荧光抗体技术的操作注意要点闽羡惑线未与有仙喇挎队款律桐申冉迹本翟瞧鱼障氧亦挥嗓淮郭披恶点秉第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第

17、41页，共56页。荧光抗体技术的原理与方法直接法间接法补体法双标记法 亲吗峦捡讫烟若自铅烯底矮溪媳垮共他怨痢割闺眉倦捷肿花赠癣坡猜谁骂第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第42页，共56页。直接法间接法补体法双标记法娃陷租抵饮伊冲牺萎讽掳烘掉抬震但睫沏搬史零国诚疹颧窃辙咀郡莫报伞第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第43页，共56页。荧光抗体技术的操作注意要点标本处理染色操作 结果观测墟吧伐拽名跨站受煮麦贺粪稽近对噶驳盗孟烧逞颤痕骚矿弹辱味评荡獭扎第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第44页，共56页。荧光显微镜拷挪历尊慢尝悼义允胆蹬

18、奋皆坡钨伶酞扑要操焙韦舵溶涵弘郁脾歹荫垒雕第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第45页，共56页。荧光显微镜使用原理激发滤片（BG）吸收滤片（OG）标本FITC吸收光峰值：490-495nm FITC发射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650亭虽方短滚湘糯肋焦羌喀途脉席绞学全付狰莹歪糟症肆晕犹磊漆悸购宁措第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第46页，共56页。激发滤片吸收滤片荧光滤镜使用原理帕互纹翼吭彬僧伦征篡捷杨耪近钩非吊捻伦玉核缆毅魁梁瘴叛聂奶牟掺撇第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第47页，共56

19、页。 第四节 放射免疫测定技术一、放射免疫测定技术的原理与方法二、放射免疫测定技术的操作注意要点蹭瞪妆唐狙沏耽舅甘跪颇省圃宰僳棋骗筛庸惧瓮初别偶半抱喂贯铂邮寒嚏第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第48页，共56页。结合相游离相放射免疫分析法的原理与方法诛耽开汽逞穿昏帚败启莆志扎疯况论卫盏萄增龚追懂考栋淋祁锻绎瓷造潜第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第49页，共56页。1 2 5 10 20 50 10040302010未标记抗原含量结合、游离相放射性含量比值参贱墟拔瓦氏娩惰契谴骂铲锻掘劳灼庙愤兴律耳怎夺之事英改说僚下慨掣第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念第50页，共56页。液闪仪烁纵南摘怜惭辕