生物制药十五章

1、会计学1生物制药十五章生物制药十五章17961796年，年，琴纳琴纳从患牛痘挤奶女工的痘疱中，分离疱浆，接种于从患牛痘挤奶女工的痘疱中，分离疱浆，接种于8 8岁男岁男孩的手臂上，获得对天花免疫力。孩的手臂上，获得对天花免疫力。类别类别死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制剂性状制剂性状杀死的杀死的病原微生物病原微生物弱毒或无毒弱毒或无毒的病原微生物的病原微生物接种量、次数接种量、次数量量大大、次数多（、次数多（2-32-3）量量小小、1 1次次保存、有效期保存、有效期易保存，较稳定易保存，较稳定不易保存，不易保存，4 4 数周数周失效失效免疫效果免疫效果较差、不持久较差、不持久较好，维持较好，维持1-51

2、-5年或更长年或更长安全性安全性会出现发热、全身或局会出现发热、全身或局部反应部反应有时会感染致病有时会感染致病两种类型疫苗特征比较两种类型疫苗特征比较1、基因工程基因工程疫苗疫苗 （gene engineered vaccine)p 利用利用DNA重组技术重组技术克隆并表达保护性抗原基因，用克隆并表达保护性抗原基因，用表达的抗原产物表达的抗原产物或或重组体本身重组体本身制成的疫苗。制成的疫苗。p包括包括 基因工程基因工程亚单位亚单位疫苗疫苗、 基因工程基因工程载体载体疫苗、疫苗、 核酸核酸疫苗、疫苗、 基因缺失基因缺失活疫苗活疫苗蛋白工程蛋白工程疫苗等。疫苗等。 Def:Def:基因工程表达

3、的基因工程表达的蛋白抗原蛋白抗原纯化后制成的疫苗。纯化后制成的疫苗。p 优点：优点：产量产量高高、纯度、纯度高高、安全性、安全性高高；用于用于病原体难培养病原体难培养或有潜在致癌性，或有免疫病理作用或有潜在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。的疫苗研究。p 缺点：缺点：与传统亚单位疫苗相比，与传统亚单位疫苗相比，免疫效果较差免疫效果较差。p 增强免疫原性增强免疫原性：筛选完整的颗粒性结构；加入有：筛选完整的颗粒性结构；加入有免疫佐剂免疫佐剂 基因工程基因工程亚单位亚单位疫苗疫苗 基因工程载体疫苗基因工程载体疫苗(gene engineering vector vaccine)(gene eng

4、ineering vector vaccine)p 利用微生物做载体，在利用微生物做载体，在微生物中表达微生物中表达保护性抗原基因保护性抗原基因，把，把微生物微生物制成疫苗。制成疫苗。优点优点：1 1、活疫苗活疫苗，抗原，抗原不需纯化不需纯化;2;2、不需多次免疫，载体本不需多次免疫，载体本身可发挥身可发挥免疫佐剂免疫佐剂效果。效果。缺点缺点：载体为：载体为特定的微生物特定的微生物载体，曾感染过载体，曾感染过腺病毒或者接种卡腺病毒或者接种卡介苗介苗的人，对载体微生物已具有免疫力，的人，对载体微生物已具有免疫力，再次再次接种后接种后不易不易繁殖繁殖，会影响，会影响免疫效果免疫效果。 核酸疫苗（核

5、酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine）：或称或称基因疫苗基因疫苗用用能够表达抗原的基因能够表达抗原的基因制成疫苗。制成疫苗。优点优点： 易于制备、便于保存、可易于制备、便于保存、可多次免疫多次免疫并且容易制成多联并且容易制成多联多价疫苗。多价疫苗。缺点缺点： 是否会是否会整合到染色体整合到染色体上引起癌变；上引起癌变； 能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗体的产生，能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗体的产生，免疫耐受等。免疫耐受等。 基因缺失活疫苗（基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccinegene deleted

6、live vaccine）：去除与毒）：去除与毒力有关的基因获得的力有关的基因获得的缺失突变毒株缺失突变毒株制成的疫苗。（缺失制成的疫苗。（缺失毒素毒素A A单位单位的或的或其他毒力相关基因其他毒力相关基因的霍乱活菌苗已上市）的霍乱活菌苗已上市）优点：优点：突变性状明确、稳定；突变性状明确、稳定；不易返祖、毒力恢复；不易返祖、毒力恢复；是研究安全有效的是研究安全有效的新型疫苗新型疫苗的重要途径。的重要途径。 蛋白工程疫苗（蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine protein engineering vaccine ）：）：p 抗原基因抗原基因加以改造加以改造，使

7、之发生，使之发生点突变点突变、缺失缺失、甚至进、甚至进行行不同基因或结构域不同基因或结构域的人工组合，达到增强其的人工组合，达到增强其免疫原免疫原性性，去除有害作用或副反应去除有害作用或副反应的一类疫苗的一类疫苗2 2、遗传重组疫苗、遗传重组疫苗 （genetic recombinant genetic recombinant vaccinevaccine）：用）：用遗传重组方法遗传重组方法获得重组微生物制成获得重组微生物制成的疫苗。的疫苗。3 3、合成肽疫苗、合成肽疫苗(Synthetic peptide vaccine)(Synthetic peptide vaccine)：用化学方法：用

8、化学方法合成能够诱发机体产生免疫保护的合成能够诱发机体产生免疫保护的多肽多肽制成的疫苗。制成的疫苗。优点：优点： 纯度和安全性纯度和安全性高高；副作用小副作用小；可长期在常温；可长期在常温下保存；下保存；缺点：缺点： 抗原性抗原性单一单一；免疫原性；免疫原性弱弱。 合成肽抗原合成肽抗原联合使用联合使用提高免疫原性。提高免疫原性。4 4、抗独特型抗体疫苗、抗独特型抗体疫苗 （antiidiotype vaccineantiidiotype vaccine）：）：用与用与特定抗原的免疫原性相近的抗体特定抗原的免疫原性相近的抗体（ab2ab2）做抗原）做抗原制成的疫苗。制成的疫苗。目前此疫苗尚处于理

9、论性研究阶段。目前此疫苗尚处于理论性研究阶段。 一、灭活菌苗制造一、灭活菌苗制造二、二、活菌苗制造活菌苗制造三、疫苗的制造三、疫苗的制造灭活菌苗，种类、苗型甚多，但制造的基本程序差别不大。 一、灭活菌苗制造一、灭活菌苗制造基本流程菌液菌液佐剂佐剂+ +乳乳 化化分装和保存分装和保存原料配置灭活菌液灭活菌液灭活 灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取最适当的灭活条件进行。表表 几种灭活菌苗的灭活方法几种灭活菌苗的灭活方法 一、灭活菌苗制造一、灭活菌苗制造蛋白质、肉浸液等原料蛋白质、肉浸液等原料培养基培养基病原菌分离病原菌分离菌菌 种种弱毒菌种弱毒菌种配置、灭菌鉴定

10、减毒检验配制灭菌检验配制灭菌原原 料料佐佐 剂剂死菌液死菌液配苗、乳化配苗、乳化灭活菌苗灭活菌苗培培 养养原液原液配配 苗苗活菌苗活菌苗保护剂保护剂菌菌 液液分装、冻干分装、冻干分分 装装杀菌原原 料料活化活化种子种子检定检定3、病毒疫苗制造、病毒疫苗制造1、病毒性禽胚培养疫苗制造2、 细胞培养制造疫苗细胞培养制造疫苗3、病毒性动物组织疫苗制造 细胞类型：细胞类型：原代细胞原代细胞和传代细胞传代细胞两类根据根据病毒种类病毒种类、制备疫苗工艺制备疫苗工艺流程选择不同的细胞流程选择不同的细胞。（脊髓灰质炎活疫脊髓灰质炎活疫苗选择苗选择verovero细胞；狂犬病弱毒细胞疫苗采取细胞；狂犬病弱毒细胞

11、疫苗采取BHK21BHK21细胞增殖病毒等细胞增殖病毒等）。二、病毒性细胞培养疫苗制造二、病毒性细胞培养疫苗制造 病毒接种病毒接种培养有培养有同步与异步同步与异步。 同步同步：在细胞：在细胞分装同时或不久分装同时或不久接种毒种。接种毒种。异步：异步：在在细胞形成单层后细胞形成单层后接种毒种，接种毒种，如如乙型脑炎疫苗乙型脑炎疫苗，细胞形成单层后细胞形成单层后倾去培养液，按倾去培养液，按1%-1%-2%2%量接种量接种毒种，经吸附后毒种，经吸附后加入维持液继续进行培养加入维持液继续进行培养，待，待70%-85%70%-85%以上细胞病变以上细胞病变时收获。时收获。 收获收获收获时间和方法收获时间

12、和方法依疫苗性质而定依疫苗性质而定。 二、通过细胞培养制造疫苗二、通过细胞培养制造疫苗（五）配（五）配 苗苗 1 1灭活疫苗灭活疫苗 不同灭活剂对不同病毒灭活剂对不同病毒的作用也不同。向细胞毒液内按规定细胞毒液内按规定加入灭活剂加入灭活剂，在一定的温度下作用一定的时间，有的灭活剂还需加入阻断剂中止灭活阻断剂中止灭活。灭活疫苗配置通常都需加入佐剂加入佐剂，充分混合、分装，制成灭活疫苗。2 2冻干苗冻干苗 细胞毒液内按比例加入保护剂或稳定剂保护剂或稳定剂，充分混合、分装，进行冷冻真空干燥制成冻于疫苗。 二、通过细胞培养制造疫苗二、通过细胞培养制造疫苗动物或胚胎动物或胚胎组组 织织毒毒 株株种种 毒

13、毒灭活灭活病毒病毒消消化化鉴定培育培养培养检验检验检验检验配制原原 料料佐佐 剂剂传代传代细胞细胞配配 苗苗（乳化、混匀）（乳化、混匀）死疫苗死疫苗原代原代悬液悬液生长细胞生长细胞配配 苗苗活疫苗活疫苗保护剂保护剂原原 苗苗冻干、分装冻干、分装分分 装装灭活灭活原原 料料原原 料料细胞培养液细胞培养液配制剪碎剪碎种种 子子鉴定扩增收获收获配制灭菌17961796年，年，琴纳琴纳从患牛痘挤奶女工的痘疱中，分离疱浆，接种于从患牛痘挤奶女工的痘疱中，分离疱浆，接种于8 8岁男岁男孩的手臂上，获得对天花免疫力。孩的手臂上，获得对天花免疫力。Def:Def:基因工程表达的基因工程表达的蛋白抗原蛋白抗原纯化后制成的疫苗。纯化后制成的疫苗。p 优点：优点：产量产量高高、纯度、纯度高高、安全性、安全性高高；用于用于病原体难培养病原体难培养或有潜在致癌性，或有免疫病理作用或有潜在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。的疫苗研究。p 缺点：缺点：与传统亚单位疫苗相比，与传统亚单位疫苗相比，免疫效果较差免疫效果较差。p 增强免疫原性增强免疫原性：筛选完整的颗粒性结构；加入有：筛选完整的颗粒性结构；加入有免疫佐剂免疫佐剂 基因工程基因工程亚单位亚单位疫苗疫苗 蛋白工程疫苗（蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine