质量控制在保证疫苗的安全性和有效性中的作用

1、质量控制在保证疫苗的安全质量控制在保证疫苗的安全性和有效性中的作用性和有效性中的作用中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所疫苗的适用人群疫苗的适用人群 接种人群接种人群: -以健康人为适用人群以健康人为适用人群 -儿童儿童疫苗的分类疫苗的分类 使用目的，主要分为使用目的，主要分为 预防性疫苗，是目前主要的疫苗预防性疫苗，是目前主要的疫苗 治疗性疫苗治疗性疫苗 预防性疫苗又可分为预防性疫苗又可分为 活疫苗：麻疹、风疹、腮腺炎、乙脑、活疫苗：麻疹、风疹、腮腺炎、乙脑、OPV等等 灭活疫苗：狂犬、流感、灭活疫苗：狂犬、流感、IPV等等 重组疫苗：乙肝、重组疫苗：乙肝、HPV等等 亚单位和组份疫

2、苗：流感亚单位疫苗，多糖类亚单位和组份疫苗：流感亚单位疫苗，多糖类疫苗的两个要素疫苗的两个要素 安全性安全性 适用人群为健康人群，因此，安全性为首要考虑的要素适用人群为健康人群，因此，安全性为首要考虑的要素 本报告中安全性只涉及质量控制保证疫苗的安全性，不本报告中安全性只涉及质量控制保证疫苗的安全性，不 涉及疫苗内在原因产生的副反应问题。涉及疫苗内在原因产生的副反应问题。 有效性有效性 有效性是指应用该疫苗后，使个体达到预防感染该病原有效性是指应用该疫苗后，使个体达到预防感染该病原 的能力的能力 由于疫苗主要由病原体或大分子物质（蛋白、多糖等）组成，由于疫苗主要由病原体或大分子物质（蛋白、多糖

3、等）组成，存在较多的可变因素。在生产过程中进行严格的质量控制有助于保证存在较多的可变因素。在生产过程中进行严格的质量控制有助于保证疫苗的安全性和有效性，另外，保证疫苗质量的连续性。疫苗的安全性和有效性，另外，保证疫苗质量的连续性。 疫苗的质量控制涉及疫苗生产的全过程，遵守疫苗的质量控制涉及疫苗生产的全过程，遵守GMP原则，符合药原则，符合药典中通则和个论的要求。典中通则和个论的要求。第一部分：疫苗质量控制中的安全性第一部分：疫苗质量控制中的安全性 考虑要点考虑要点第二部分：疫苗质量控制中的有效性第二部分：疫苗质量控制中的有效性 考虑要点考虑要点 内内 容容一，起始原材料，须符合药典中要求，重点

4、考虑：一，起始原材料，须符合药典中要求，重点考虑： 1. 生产用菌毒种：生产用菌毒种： 例：减毒活疫苗，毒种的安全性考虑要点包括：例：减毒活疫苗，毒种的安全性考虑要点包括： 神经毒力（猴体试验或其它敏感动物）神经毒力（猴体试验或其它敏感动物） 毒种传代稳定性（突变、返祖），结合有效性制订毒种代次毒种传代稳定性（突变、返祖），结合有效性制订毒种代次 2.生产用基质生产用基质 原代细胞：重点为外源因子、逆转录酶等因素原代细胞：重点为外源因子、逆转录酶等因素 生产活疫苗时，应来自生产活疫苗时，应来自SPF级动物级动物 传代细胞：制订细胞库，对外源因子、致瘤性检定（限定代次）传代细胞：制订细胞库，对外

5、源因子、致瘤性检定（限定代次） 人二倍体细胞：鉴别、核型检查等人二倍体细胞：鉴别、核型检查等 鸡胚：制备毒种或活疫苗时应为鸡胚：制备毒种或活疫苗时应为SPF级鸡胚级鸡胚 第一部分：疫苗质量控制中的安全性考虑第一部分：疫苗质量控制中的安全性考虑起始原材料质量控制起始原材料质量控制3. 动物原性材料动物原性材料 牛血清、胰酶等，进行必要的外源因子检测，不允许从牛血清、胰酶等，进行必要的外源因子检测，不允许从疯牛病疫区进口此类原材料疯牛病疫区进口此类原材料4. 其它材料其它材料 4.1 化学试剂（灭活、裂解、纯化、稳定剂等）化学试剂（灭活、裂解、纯化、稳定剂等） 应使用药用级应使用药用级 例：某企业

6、的稳定剂成份导致异常毒性不过关例：某企业的稳定剂成份导致异常毒性不过关 4.2 生产用水生产用水 4.3 抗生素，抗生素， 严禁使用青霉素或严禁使用青霉素或-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 将来要求在细胞维持液中不得添加抗生素将来要求在细胞维持液中不得添加抗生素 国产疫苗中庆大霉素检测结果国产疫苗中庆大霉素检测结果疫苗名称疫苗名称批号批号结果（结果（ug/ml）麻疹麻疹200805130146麻疹麻疹200805060142麻腮麻腮200805030170MMR200805050180风疹风疹200805130248麻风麻风200805100246麻疹麻疹2008051210.037麻疹麻疹20

7、08060990.021流感流感0.0001国产疫苗中卡那霉素检测结果国产疫苗中卡那霉素检测结果疫苗名称疫苗名称批号批号结果（结果（ug/ml）水痘水痘2008070102200807010281水痘水痘2008070202200807020282水痘水痘2008080942008080944.4水痘水痘2008090992008090993.6MMR200807020120080702011.6MMR200807090120080709015.5 二、生产过程中控制，必须符合二、生产过程中控制，必须符合GMP原则原则1. 生产条件严格控制，例如：生产条件严格控制，例如： 1.1 活疫苗培养温

8、度：活疫苗培养温度：OPV疫苗中温度升高时，病毒容疫苗中温度升高时，病毒容易返祖，导致猴体神经毒力试验不过关。易返祖，导致猴体神经毒力试验不过关。 1.2 灭活温度及时间：对灭活疫苗至关重要，尤其是采灭活温度及时间：对灭活疫苗至关重要，尤其是采用野毒株生产疫苗时。用野毒株生产疫苗时。1955年发生在美国的年发生在美国的“卡特门卡特门”事件，未充分灭活的脊灰疫苗导致事件，未充分灭活的脊灰疫苗导致60名儿童和名儿童和89名接触名接触者发生脊髓灰质炎。者发生脊髓灰质炎。 1.3 病毒裂解剂浓度、温度及时间：流感裂解不充分，病毒裂解剂浓度、温度及时间：流感裂解不充分，在小年龄儿童中导致副反应增加在小年

9、龄儿童中导致副反应增加 1.4 纯化设备及条件：防止纯化能力下降后增加疫苗的纯化设备及条件：防止纯化能力下降后增加疫苗的副反应副反应 三、生产材料产生的残留物质检测三、生产材料产生的残留物质检测 1. 传代细胞的外源传代细胞的外源DNA残留量残留量 考虑考虑DNA残留量残留量 考虑残留考虑残留DNA片段大小片段大小 2. 传代细胞的宿主蛋白残留量传代细胞的宿主蛋白残留量 安全性考虑安全性考虑 制品纯度考虑制品纯度考虑 正在建立正在建立Vero细胞残留蛋白含量检测方法细胞残留蛋白含量检测方法 3. 原代细胞宿主成份原代细胞宿主成份 如：鸡胚卵清蛋白如：鸡胚卵清蛋白 4. 内毒素内毒素 来源：生产

10、材料中含有，容器具引入来源：生产材料中含有，容器具引入 总的来讲，制品纯度越高，上述残留成份越少，疫苗的安全性越高总的来讲，制品纯度越高，上述残留成份越少，疫苗的安全性越高 企企 业业标标 准准结果结果 (Ave 2SD) 总蛋白总蛋白(ug/ml)卵清卵清蛋白蛋白(ng/ml)企业的结果企业的结果检定所结果检定所结果总蛋白总蛋白卵清蛋白卵清蛋白总蛋白总蛋白卵清蛋白卵清蛋226.62.50.8175.82.828.361.82500750361.336.1551.0102.3320.711.7583.3115.734401000193.026.9200.00.0212

11、.043.5241.021616.3337.765.9162.27.1452.339.85300250248.515.1125199.518.6130.957.564201000281.531.0364.1215.5258.929.8313.2145.97540800345.834.522.632.5263.011.984.757.985001000315.640.4507.6119.6/401.877.695001000374.657.4469.2173.5282.3432.086.8102401000220.0322.0-370.012600400192.212.

12、116.96.9192.429.787.560.5136001000277.113.524.411.6223.331.532.87.214/2000/200.00.0/187.037.015100-330100145.07.10.1129.80.86.00.7流感疫苗总蛋白、卵清蛋白检验结果分析流感疫苗总蛋白、卵清蛋白检验结果分析 四、生产工艺中引入的四、生产工艺中引入的残留物质检测残留物质检测 1. 培养基中成份培养基中成份:不使用人血清不使用人血清,可用人血白蛋白可用人血白蛋白 2. 牛血清残留牛血清残留(致敏物质致敏物质) 3. 生产工艺中采用的化学试剂生产工艺中采用的化学试剂 灭活剂：

13、甲醛等灭活试剂灭活剂：甲醛等灭活试剂 裂解剂：裂解剂：Tween80, TritonX100,乙醚等乙醚等 防腐剂：硫柳汞，苯酚，防腐剂：硫柳汞，苯酚，2-苯氧乙醇苯氧乙醇 佐剂：氢氧化铝佐剂：氢氧化铝 特点：大多数为限度实验特点：大多数为限度实验 某些检测项目为生产过程中的控制，或在原液中进行某些检测项目为生产过程中的控制，或在原液中进行检测，在成品中不含有检测项目，企业应建立可靠的检测方检测，在成品中不含有检测项目，企业应建立可靠的检测方法并进行充分验证。如乙醚检测，如采用人工嗅觉法则不可法并进行充分验证。如乙醚检测，如采用人工嗅觉法则不可靠，而靠，而HPLC或气相法则更加准确。或气相法则

14、更加准确。 异常毒性试验与疫苗的安全性异常毒性试验与疫苗的安全性 异常毒性试验主要用于检测疫苗中与制品无关的任何毒性，异常毒性试验主要用于检测疫苗中与制品无关的任何毒性，如错误添加、混淆等导致的明显的毒性。如错误添加、混淆等导致的明显的毒性。 限于剂量和动物数量，该试验不能充分反应或代替疫苗的限于剂量和动物数量，该试验不能充分反应或代替疫苗的安全性。欧美国家要求工艺验证后，一般不再进行该项目安全性。欧美国家要求工艺验证后，一般不再进行该项目常规检测。常规检测。 疫苗中的不安全因素在大量人群使用时得以体现疫苗中的不安全因素在大量人群使用时得以体现 只有进行严格的生产过程控制，采用可靠、准确的检测

15、方只有进行严格的生产过程控制，采用可靠、准确的检测方法才能保证疫苗的安全性法才能保证疫苗的安全性 我国在异常毒性检测中发现一些问题，如疫苗稀释液渗透我国在异常毒性检测中发现一些问题，如疫苗稀释液渗透压或冻干保护剂成份导致的注射后瞬间反应。压或冻干保护剂成份导致的注射后瞬间反应。疫苗的有效性疫苗的有效性 研发阶段：主要依赖于临床试验，在双盲、研发阶段：主要依赖于临床试验，在双盲、随机对照试验中确定随机对照试验中确定 生产阶段：依靠严格的生产和质量控制保生产阶段：依靠严格的生产和质量控制保证疫苗质量（包括有效性）的连续性证疫苗质量（包括有效性）的连续性 第二部分：疫苗质量控制中的第二部分：疫苗质量

16、控制中的 有效性考虑要点有效性考虑要点1. 生产用菌毒种：核心问题生产用菌毒种：核心问题 1.1 与预防疾病的对应关系：不同血清型与预防疾病的对应关系：不同血清型 1.2 菌毒株的免疫原性：药典中规定对主种子进行免疫菌毒株的免疫原性：药典中规定对主种子进行免疫 原性检查，多数活疫苗规定在人体中检查。原性检查，多数活疫苗规定在人体中检查。 如：麻疹毒株主种子批，接种健康易感儿童至少如：麻疹毒株主种子批，接种健康易感儿童至少30名，抗体阳名，抗体阳 转率不低于转率不低于95。 1.3 毒种传代次数：尤其是减毒活疫苗，不同代次的免毒种传代次数：尤其是减毒活疫苗，不同代次的免 疫原性有差别。例如：疫原

17、性有差别。例如：OPV疫苗，毒种传代次数有疫苗，毒种传代次数有 严格限定。严格限定。 1.4 毒种保藏条件，一般为冻干或低温保藏。毒种保藏条件，一般为冻干或低温保藏。2. 生产用基质生产用基质 传代细胞和人二倍体细胞应建立细胞库系统，有效保证传代细胞和人二倍体细胞应建立细胞库系统，有效保证生产疫苗质量的连续性。生产疫苗质量的连续性。3. 生产中控制生产中控制 培养条件：培养基、血清等的细胞增殖能力培养条件：培养基、血清等的细胞增殖能力 收获次数：限定收获次数，细胞老化导致繁殖的病毒滴收获次数：限定收获次数，细胞老化导致繁殖的病毒滴度变化度变化 中间品的保藏条件：防止抗原聚合，病毒滴度下降中间品

18、的保藏条件：防止抗原聚合，病毒滴度下降 包装材料：抗原吸附在容器上包装材料：抗原吸附在容器上 疫苗有效性的保证疫苗有效性的保证 鉴别试验：鉴别试验：证明为本疫苗，防止混淆，尤其是多价疫苗证明为本疫苗，防止混淆，尤其是多价疫苗 有效成份含量有效成份含量 1. 活疫苗滴度：尽量采用冻干剂型，液体疫苗时需有合适的保护剂活疫苗滴度：尽量采用冻干剂型，液体疫苗时需有合适的保护剂 例如：例如：OPV液体疫苗中添加液体疫苗中添加1mol/L 的的MgCl, -20C冻存保藏冻存保藏 2. 灭活疫苗中抗原含量灭活疫苗中抗原含量 采用可靠的方法准确测定：基于抗原抗体的含量测定采用平行线法采用可靠的方法准确测定：

19、基于抗原抗体的含量测定采用平行线法 效期末标准：临床试验确定的抗原含量效期末标准：临床试验确定的抗原含量 放行标准：结合稳定性考核数据在效期末标准上适当增加抗原放行标准：结合稳定性考核数据在效期末标准上适当增加抗原 含量，保证效期末标准含量，保证效期末标准 例如：流感疫苗中有效成份标示量为例如：流感疫苗中有效成份标示量为15ug/剂剂, 稳定性考核一年稳定性考核一年 下降下降2ug /剂剂, 则企业放行标准应为则企业放行标准应为17 /剂。剂。 3. 制品的装量：附加量保证可抽出体积制品的装量：附加量保证可抽出体积血凝素含量20.025.030.035.040.045.014710131619

20、222528313437404346495255制品编号血凝素含量（ug/ml）企业甲1企业甲3企业B中检所甲1中检所甲3中检所B巴斯德流感结果分析图流感疫苗血凝素趋势图流感疫苗血凝素趋势图重组乙型肝炎疫苗重组乙型肝炎疫苗 稳定性：稳定性： 原液和半成品：制订储藏条件下的效期原液和半成品：制订储藏条件下的效期 成品：进行稳定性检查成品：进行稳定性检查 对冻干减毒活疫苗：热稳试验，热稳后滴度达到效期末标准对冻干减毒活疫苗：热稳试验，热稳后滴度达到效期末标准 水分含量测定：水分含量影响稳定性，应低于药典中标准水分含量测定：水分含量影响稳定性，应低于药典中标准 效力试验参考品：效力试验参考品： 效力

21、试验是疫苗有效性的核心，基于生物活性测定方法的高变异性，在效力试验是疫苗有效性的核心，基于生物活性测定方法的高变异性，在效力测定时必须包含有明确含量标示（以及变异范围）的参考品，以便：效力测定时必须包含有明确含量标示（以及变异范围）的参考品，以便： 1. 证明该次测定有效证明该次测定有效 2. 对待测样品进行标定对待测样品进行标定 3. 监测效力试验方法和参考品的变化趋势监测效力试验方法和参考品的变化趋势 若企业采用自制参考品，应对国际参考品或国家参考品进行校正，采用若企业采用自制参考品，应对国际参考品或国家参考品进行校正，采用多次测定数值进行统计分析，确定含量及变异范围，并保藏在合适条件下，

22、多次测定数值进行统计分析，确定含量及变异范围，并保藏在合适条件下，制订参考品的趋势图，监测参考品的变化。制订参考品的趋势图，监测参考品的变化。 脊灰国家参考品滴定趋势图脊灰国家参考品滴定趋势图疫苗有效性总结疫苗有效性总结 临床试验确定临床试验确定 包括：剂量探索包括：剂量探索 免疫原性：有替代指标时免疫原性：有替代指标时 保护效果：最有说服力的证据保护效果：最有说服力的证据 上市后监测：大量人群应用后的实际效果上市后监测：大量人群应用后的实际效果 生产中进行控制保证疫苗的有效性生产中进行控制保证疫苗的有效性 包括：保证生产的连续性包括：保证生产的连续性 准确的效力试验方法准确的效力试验方法 稳

23、定性稳定性 定义定义 生物制品批签发，是指国家对疫苗类制品、生物制品批签发，是指国家对疫苗类制品、血液制品、用于血源筛查的体外生物诊断试剂以及血液制品、用于血源筛查的体外生物诊断试剂以及国家药品管理当局规定的其他生物制品，每批制品国家药品管理当局规定的其他生物制品，每批制品出厂上市或进口时实行强制性资料审查、实验室检出厂上市或进口时实行强制性资料审查、实验室检验后决定是否签发上市的管理制度。验后决定是否签发上市的管理制度。 生物制品批签发是一项重要的科学的生物制品生物制品批签发是一项重要的科学的生物制品管理制度。管理制度。 国家食品药品监督管理局第国家食品药品监督管理局第11 11号令：生物制

24、品批签发管理办法号令：生物制品批签发管理办法我国实行批签发的法律基础我国实行批签发的法律基础 中华人民共和国药品管理法（第四十一条）中华人民共和国药品管理法（第四十一条） 中华人民共和国药品管理法实施条例（第三中华人民共和国药品管理法实施条例（第三十九条）十九条） 疫苗流通及预防接种管理条例疫苗流通及预防接种管理条例( (第十七条第十七条) ) 生物制品批签发管理办法生物制品批签发管理办法 进口药品管理办法进口药品管理办法批签发产品的销售批签发产品的销售 我国批签发实施过程我国批签发实施过程准备阶段准备阶段试行阶段试行阶段正式实施阶段正式实施阶段 20012001年年1212月我国开始试行批签

25、发（月我国开始试行批签发（EPI 5EPI 5种制品）种制品） 20022002年年1212月颁布了月颁布了生物制品批签发管理办法（试行）生物制品批签发管理办法（试行） 20032003年年1 1月月1515日开始正式实行批签发日开始正式实行批签发 20042004年年6 6月颁布了月颁布了生物制品批签发管理办法生物制品批签发管理办法 20062006年年1 1月月1 1日对所有疫苗实施批签发管理日对所有疫苗实施批签发管理 20072007年年1212月月3131日对所有血液制品实施批签发管理日对所有血液制品实施批签发管理执行批签发机构执行批签发机构 国家食品药品监督管理局主管全国批签发工作。

26、国家食品药品监督管理局主管全国批签发工作。 由国家药品监督管理当局指定药品检验机构承担批由国家药品监督管理当局指定药品检验机构承担批 签发检验和资料审核。签发检验和资料审核。批签发制品质量执行标准批签发制品质量执行标准生物制品批签发检验和生物制品批签发检验和/或资料审核的标准或资料审核的标准现行的现行的中国药典中国药典国家食品药品监督管理局批准的其他药品标准国家食品药品监督管理局批准的其他药品标准l企业药品注册标准企业药品注册标准l进口药品注册标准进口药品注册标准 同时需提供制品生产国政府的批签发合格证同时需提供制品生产国政府的批签发合格证资料审查资料审查资料审查及实验室检验资料审查及实验室检验 l样品检验样品检验 全部项目检验全部项目检验 部分项目检验部分项目检验 企业申请批签发时应提供的资料企业申请批签发时应提供的资料批准文件（下列其中之一）批准文件（下列其中之一）l药品批准文号药品批准文号l进口药品注册证或医药产品注册证进口药品注册证或医药产品注册证l体外生物诊断试剂批准注册证明体外生物诊断试剂批准注册证明提交资料提交资料l生物制品批签发申请表生物制品批签发申请表