胶体金法在HIV抗体检测中的应用

1、1.D NA marker(bp2.阳性对照3.阴性对照48.样本PCR产物3讨论喹诺酮类药物有多种,因很多结构含氟,也称为氟喹诺酮类药物,其典型的代表药物为环丙沙星。早期研究发现淋球菌氟喹诺酮耐药性的发生与细菌染色体上氟喹诺酮耐药性决定区(QRDR上DNA螺旋酶和拓扑异构酶I V有关。直到1994年,才由美国Belland首次揭示了淋球菌环丙沙星耐药性与DNA螺旋酶A亚单位(gyr A基因和拓扑异构酶I V C 亚单位(par C基因之间的相关性。DNA螺旋酶是一种型的DNA拓扑异构酶,DNA螺旋酶A亚基(Gyr A由gyr A编码,DNA螺旋酶是氟喹诺酮类药物的主要作用靶位,gyr A基因

2、的突变可造成药物靶位点A亚基发生改变,影响它与药物结合的能力,使淋球菌表现出对该类药物的耐受性;也是造成淋球菌产生对喹诺酮类耐药的主要原因,DNA拓扑异构酶I V C亚单位(Par C由par C基因编码,gyr A和par C位点改变是淋球菌重要的耐药机制。DNA螺旋酶和拓扑异构酶是细菌细胞生长所必需的酶,喹诺酮类药物抗菌作用的原始靶位是细菌的DNA螺旋酶(即拓扑异构酶II,通过对抗其酶活性,干扰其DNA复制、转录,破坏其DNA结构,使细菌染色体断裂,从而起到杀菌作用。由于编码DNA螺旋酶A亚基和DNA拓扑异构酶I V C亚单位的基因发生点突变,形成编码另一种氨基酸的密码子,而使所编码的酶亚

3、基发生氨基酸取代,影响到喹诺酮类药物与靶位的结合,从而影响细菌对环丙沙星类药物的敏感性及耐药性的出现。本试验33株淋球菌对环丙沙星全部耐药,证实了临汾地区的淋球菌对环丙沙星的耐药率较高。耐环丙沙星淋球菌都扩增出了gyr A基因QRDR区域,证明QRDR在对环丙沙星的耐药中起重要作用。PCR方法对淋球菌的耐药性进行快速检测,克服细菌培养检测药物敏感性需要较长时间的弊端,对于促进临床合理应用抗生素将具有重要意义。参考文献:1王蓓,王长娴,糜祖煌.淋球菌对大观霉素与环丙沙星耐药性研究J.中国公共卫生,2005,21(3.2谢国艳.淋病奈瑟球菌耐氟喹诺酮类药物与gyr A和par C基因突变的相关性研

4、究J.中国感染与化疗杂志,2006,6(2:89. 3Belland RJ,Morris on SG,Is on C,et al.Neisseria gonorrhoeae ac2quires mutati ons in anal ogous regi ons of gyr A and par C in fluor o2quinol one resistant is olatesJ.MolM icr obi ol,994,14:3712380. 4Deguchi T,Yasuda M,Nakano M,et al.Rap id detecti on of pointmutati ons of

5、the Neisseriagonorrhoeae gyr A gene ass ociated with in2 creased suscep tibilities t o quinol onesJ.Jclin M icr obi ol,1996,34:225522258.(收稿日期:2008203216作者简介:侯临平(1972,女,山西临汾人,1997年毕业于青岛大学医学院,主管检验师,山西医科大学在职研究生。胶体金法在H I V抗体检测中的应用程庆,刘志伟,郑定容(深圳市宝安区西乡人民医院,广东深圳518102摘要目的:通过E L I S A双抗原夹心法和胶体金法检测H I V抗体的比较

6、,评价胶体金法检测H I V抗体的效果。方法:用胶体金法和E L I S A法检测H I V抗体。结果:用E L I S A法对11497份待测标本进行初筛,有19份标本为阳性;用E L I S A双孔实验和胶体金法对这19份阳性标本复查,其中两者复查结果均为阳性5份标本;未出现E L I S A双孔实验复查阳性,胶体金法复查阴性的情况。结论:抗2H I V初筛试验阳性S/CO值4.0的标本,胶体金法代替E L I S A 双孔复查是可行的。关键词H I V抗体检测;E L I S A法;胶体金法中图分类号R512.91文献标识码B文章编号167125098(20081722207202艾滋病

7、又称获得性免疫缺陷综合征(A I D S,由人类免疫缺陷病毒(H I V引起的,以细胞免疫缺陷为主要特征的传染病。H I V抗体的检测结果是H I V感染者和A I D S患者重要的诊断依据。目前,医院、疾病预防控制中心等H I V初筛实验室普遍采用E L I S A法对可疑人群进行筛选。本文将初筛实验阳性的标本分别用E L I S A双孔实验和胶体金法实验复查,探讨用胶体金法代替E L I S A双孔实验复查的可行性。1材料和方法1.1材料表1三种检测试剂方法试剂品牌批号有效期生产厂家试剂进行E L I S A双孔实验复查,同时用胶体金试纸板条复查(取40l待测样本加在试纸板条的加样区,再在

8、加样区的上方加1滴稀释液,30m in内观察并记录结果。对比这两种方法复查的阳性率。将初筛试验阳性的标本送深圳市疾病预防控制中心确诊。2结果2.1H I V抗体初筛从11497份标本中,用E L I S A法初筛,有19份标本阳性,两组A值与临界值(cut off的比值(S/ CO范围见表2。表211497份标本初筛阳性结果S/CO值范围试剂份数临界值S/CO4.0S/CO1.04.0S/CO<1.0丽珠69350.23366926科华45620.1180.2302845522.2H I V抗体复查将19份初筛阳性的血清标本同时用E L I S A双孔实验和胶体金法复查,结果见表3。表3

9、19份标本初筛与复筛结果方法S/CO4.0S/CO1.04.0初筛(EL I S A514复筛(EL I S A50复筛(胶体金法50确诊(免疫印迹法503讨论A I D S的流行已成为人类社会和经济发展的灾难,全球活着的H I V感染者已超过4300万人,自1985年我国发现首例A I D S患者以来,呈加速流行的趋势,疫情正在从高危人群向一般人群传播,截止到2007年底,我国估测存活的H I V感染者超过100万。因此,对H I V感染者的早期诊断,便于控制自身疾病的发展,也可以防止传染给他人。本实验发现,初筛实验中S/CO比值4.0的5份标本,用胶体金法和E L I S A法双孔实验复查

10、均为阳性,送深圳市疾病预防控制中心确诊也是阳性。可见,初筛试验阳性S/CO 值4.0的标本,可用胶体金法代替E L I S A法双孔实验复查,而且胶体金法操作简单。此外,对怀疑是H I V感染的急诊手术前患者采用胶体金法快速检测H I V抗体,可节省检测时间以赢得宝贵的手术时间,又可使医生在术中对可疑患者进行针对性预防,降低医源性H I V感染概率。但对于初筛S/CO 比值在1.04.0之间的标本,用E L I S A双孔实验进行复查未出现阳性,但在第一次初筛试验出现假阳性,这可能与血清中类风湿因子干扰有关1,造成E L I S A法检测H I V抗体试验假阳性。而用胶体金法复查均为阴性。本着

11、为患者负责的原则,我们仍将初筛实验中S/C O比值在1.04.0之间的标本送深圳市疾病预防控制中心确诊,最后也确诊为阴性。根据卫生部2004年“规范”中规定H I V抗体检测分初筛和复筛两个步骤,而确认试验(免疫印迹法操作复杂、费用昂贵,为减少受检人员的经济支出和实验人员的工作负荷,要求初筛实验尽可能的准确。在临床工作中,经典的初筛方法是E L I S A法,若为阳性再用E L I S A双孔实验复查,而E L I S A 双孔复查操作繁锁和耗时长,增加了实验人员的感染机会。因此笔者通过此实验认为:抗2H I V初筛试验阳性S/CO值4.0的标本,胶体金法代替E L I S A双孔复查是可行的

12、。参考文献:1许春向,吕蛛清.卫生化学M.第3版.人民卫生出版社,1993,10.2李宏,王哲,马丽萍,等.H I V抗体初筛与确认(WB测试结果对比分析J.中国卫生检验杂志,2003,13(6:7522753.(收稿日期:2008203222实验室对急性心肌梗死早期诊断指标的应用及评价常玉梅(解放军第252医院,河北保定071000摘要目的:探讨实验室对急性心肌梗死(AM I早期诊断指标,为临床诊断提供有价值的依据。方法:采用血清肌钙蛋白(cTn I和肌红蛋白(Mb免疫比浊定量测定法和肌酸激酶同工酶2MB(CK2MB活性定量测定法,仪器贝可曼,对53例AM I患者,126例不稳定性心绞痛患者

13、和22例骨骼肌损伤患者,24例健康对照组检测结果进行综合比较分析。结果:AM I组患者血清cTn I值明显高于健康对照组差异非常显著(P<0.01AM I组Mb值显著高于正常值,除骨骼肌损伤组Mb有明显升高外,其他对照组测定值均在正常范围以内,与AM I组有明显差异(P<0.01,cTn I及Mb 的灵敏性明显高于CK2MB。结论:Mb是早期首选诊断指标,cTn I有独特的特异性和更宽的时间诊断窗,cTn I、Mb以及CK2MB三项指标联合检测,在AM I早期诊断起着彼此互补的作用,并具有非常重要的临床意义。关键词急性心肌梗死;肌红蛋白;肌钙蛋白I;肌酸激酶同工酶2MB中图分类号R5