pcr技术及应用

1、pcr技术简史dna的复制核酸体外扩增的设想聚合酶链反应的发明atcgcgatagcgtagctgcgacctagc53tagcgctatcgcatcgacgctggatcg35解旋酶解链酶dna解旋解链合成引物子链延长pcr技术简史dna的复制核酸体外扩增的设想聚合酶链反应的发明atcgcgatagcgtagctgcgacctagc53tagcgctatcgcatcgacgctggatcg35dna解旋解链合成引物子链延长ggaucg5aucgcg5引物酶引物酶rna引物rna引物pcr技术简史dna的复制核酸体外扩增的设想聚合酶链反应的发明atcgcgatagcgtagctgcgaccta

2、gc53tagcgctatcgcatcgacgctggatcg35dna解旋解链合成引物子链延长ggaucg5aucgcg5tagcgctatcgcatcgacgct3atagcgtagctgcgaggatcg3dna聚合酶dna聚合酶pcr技术简史dna的复制核酸体外扩增的设想聚合酶链反应的发明 1971年，khorana提出：经过dna变性，与合适引物杂交，用dna聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆trna基因。 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，khorana的设想被人们遗忘了pcr技术简史dna的复制核酸体外扩增的设想聚合酶链反应

3、的发明1985年，美国pe-cetus公司的mullis等人发明了聚合酶链反应（pcr）基本原理是在试管中模拟细胞内的dna复制最初采用e-coli dna聚合酶进行pcr，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错耐热dna聚合酶的应用使得pcr能高效率的进行，随后pe-cetus公司推出了第一台pcr自动化热循环仪1993年，mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖 引物引物引物引物引物引物xx()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 20pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点标准的标准的pcrpcr反应体系反应体系4种dntp混合物 各200

4、umol/l引物 各10100pmol模板dna 0. .12ugtaq dna聚合酶 2. .5umg2+ 1. .5mmol/l1234522557294时间（min）温度（）pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点适温延伸3高温变性1低温退火2重复13步2530轮目的dna片段扩增100万倍以上dna双螺旋dna单链与引物复性dna变性形成2条单链子链延伸dna加倍pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点1234522557294时间（min）温度（）适温延伸3高温变性1低温退火2重复13步2530轮目的dna片段扩增100万倍以上dna双螺旋dna单链与引物复性

5、子链延伸dna加倍dna变性形成2条单链模板dna95pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点9550引物1引物2dna引物pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点50引物1引物2dna引物72taq酶taq酶pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点72第1轮结束95第2轮开始pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点955072taqtaqtaqtaqpcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点72第2轮结束pcr的基本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点模板dna第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增pcr的基

6、本原理pcr反应条件pcr过程pcr的特点灵敏度高1.皮克(pg=10-12)量级扩增到微克(ug=10-6)水平2. 能从100万个细胞中检出一个靶细胞3.病毒检测的灵敏度可达3个rfu4.细菌检测的最小检出率为3个细菌简便、快速1.一次性加好反应液，24 小时完成扩增2.扩增产物一般用电泳分析对标本的纯度要求低u血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等组织的粗提dna3 pcr的类型和应用 研究基因克隆，dna测序，分析突变 诊断细菌、病毒、寄生虫检测，诊断 人类基因组工程遗传图谱的构建，dna测序，表达图谱 法医犯罪现场标本分析 肿瘤各种肿瘤检测 其他 已知靶基因片段两测的序列 人类染色体端粒人类染色体端粒dna的荧光原位杂交照片的荧光原位杂交照片 逆转