FDA清洁验证检查指南

1、FDA清洁验证检査指南Validation of Cleaning Processes （7/93）清洁工艺验证清洁丄艺验证检查指南注:此指南是FDA检查官和其工作人员的参考资料。此文件不约束FDA,也不 赋予任何人任何权利，特权，利益或豁免权。介绍自从FDA的各文件，包括化学原料药检查指南和生物技术检查指南简单地提 出了清洁 验证这个话题之后，关于清洁工艺的验证已经引发了相当多的讨论。这 些官方的文件，都清楚地确定了对于清洁工艺需要被验证的期望。通过讨论那些已被认为可接受的（或者不可接受的）实际情况，此指南是为了建 立检查的连贯一致性。同时，必须意识到，与其他工艺验证一样，清洁验证的方 法也

2、不止一种。最后，所有过程验证的检查标准是，检查其科学数据能否证明该 系统始终如一地达到预 期LI的，结果稳定地符合预先制定的标准。本指南仅适用于设备的化学残留物的清洁验证。背景1963年GMP法规（133.4节） 要求如下“设备需要被维持在一个清洁、 有序的 状态”。还有一个很相似的关于设备清洁的章节是在1978年GMP法规（211.67节）。同这些法规相比，对于设备在使用前应被清洁的要求并不是什么新要求。当 然，对于设备FDA清洁的总的原则是为了防止产品污染或掺杂其它物质。从历史事件看来，检查 官发FDA现了一些明显的不卫生是由于设备的清洁和维护不到位，或防尘控制系 统不当。过去FDA更多的

3、关注于非青霉素类产品和青霉素类产品，或药品与笛类产品和激素类产品之间的交义污染问题。在过去的十年中，有大量的产品召回事 件都是山于实际的或潜在的青霉素交义污染。1988年的召回消胆胺树脂事件，使FDA对于潜在交义污染的问题日益重视。那次召回的原因是用于生产制剂的原料药被农业杀虫剂生产中低剂量的中间体和 降解物给污染了。造成这次交义污染的原因是III于重复使用了回收溶剂引起的。 而回收溶剂被污染的原因是山于对重复使用的溶剂桶缺乏控制。这些桶之前是用 于贮存杀虫剂生产线产生的回收溶剂，之后乂被重复地用于树脂生产线使用的回 收溶剂贮存。该公司对于这些溶剂桶缺乏有效的控制，对于贮存的溶剂缺少适肖 的检

4、测，对于溶剂桶的清洁过程也没有进行验证。一部分被杀虫剂污染的原料药被供给了在另一地址的厂进行最后的制剂生产，这就导致2了该厂的流化床干燥机的袋子被杀虫剂污染了。转而导致此厂生产的众多批次 产品被污 染，尽管该厂并不生产杀虫剂。1992年， 对一家海外原料药生产商发出了进口警告。 该厂使用相同设备生产 强效FDA笛类产品和非笛类产品。因此公司是多品种原料药生产厂家，FDA认为潜在交 义污染的可能性很大，对公众健康造成了严重的威胁。该公司只是在FDA检查的 近期才开展了清洁验证工作，而FDA认为该清洁验证工作是不当的。理山之一 是，工厂仅寻找没有前一种物质存在的证据。但是用薄层法检测洗涤水后，找到

5、 了设备中还残留了前一产品生产过程中反应副产物和降解产物的残留物。基本要求FDA期望公司建立书面的程序(SOPs)用于详细描述设备各部件的清洁的过程。如果公司用同一程序进行相同产品不同批次之间的清洗， 而使用不同程序进行转 产之间的清洗，公司的书面程序应明确说明这些不同的情况。同样，若水溶性残 留物与非水溶性残留物的清洗方法不同，则公司的书面程序也应说明两种情况， 并清楚地规定在何种情况下执行哪个程序。对于化学原料药生产中会产生柏油状 或粘胶状残留物的生产工序，因为这些物质不容易被清除，公司可以决定使用专 用设备。流化床干燥机的袋子，作为一种不容易被清洗的设备，也通常只被专用 于某一特定产品的

6、生产。对于清洁过程本身留下的残留物（清洁剂，溶剂等），也 必须被去除。FDA期望公司建立书面的清洁工艺验证通则。FDA期望这个清洁工艺验证通则规定，验证执行的负责人，批准验证工作的负 责人，接 受标准，再验证时间。FDA期望对于每一个生产系统或每一个设备，公司应预先制订具体的书面验证 方案，其中应明确规定如取样方法、分析方法（包括方法灵墩度）等方面的问题。FDA期望公司根据方案进行验证工作，并记录归档验证的结果。FDA期望形成一个最终的验证报告，报告应经过管理层的批准，并说明该清洗 方法是否有效。数据应该能够支持如下结论，残留物质已经被降低到一个“可接 受的水平”。清洁验证的评估笫一步是明确验

7、证LI的。我们曾发现有一些公司没有建立验证LI的。如常见一 些生产商，在清洁之后进行了大量的取样和检测程序，而没有真正去评估各步清 洗操作的有效性。在评估清洁工序时，有一系列的问题需要被关注。比如，到达 哪个点/程度，一个设备 或者系统算是清洁了，是不是一定要用手擦洗，用手擦洗达 到了什么效果，而只用一种溶剂清洗是达不到的，批和批之间或者产品和产品之 间，人工清洗的差异有多大，这些问题的答案，对于检查和评估清洁过程来说是非常重要的，因为检查官必须要全面评估 该过程的有效性。而且这些问题的答案也 有助于省去多余的步骤，能更有效地工作，从而为公司节约资源。检查每个设备有儿种清洗方法。理想的情况是一

8、个设备或系统拥有一套清洗工 艺。然而，这也取决于生产的品种，以及同一产品的不同批次之间（如大量生产） 或者不同产品的转产之间是否需要清洗。当清洗方法只用于同一产品的不同批次 之间（或同一中间体的不同批次之间），公司仅需要建立口视清洁”的标准。诸 如此类的批与批之间的清洁工艺，不需要被验证。设备的设计检查设备的设计，尤其是使用了半自动或全自动在场清洗系统的大型生产系 统，需要重点关注。比如，应使用没有球阀的卫生型管道系统。当使用了那些非 卫生型的球阀（这 在原料药工业中是普遍的），清洁工序就变的更困难。若在现场检查中发现使用了上述类型的设备系统，执行清洁程序的操作人员必 须了解问题的所在，并已进

9、行了关于系统和阀门清洁的特殊培训。检查该操作人 员是否了解系统，培训的水平和清洁操作的经验。并检查书面的已验证过的清洁 程序，判定系统是否已经被适当的确认和验证过。对于大型系统，比如使用了很长的转移/输送管道的，要检查流程图和管道图 纸从而确认 需要清洗的阀门，和是否有书面清洁规程。管道和阀门应标记，以便 操作人员识别。有时，阀门标识不当，无论在打印图纸上和实物上，都会导致不 正确的清洁操作。在清洁工序的相关文件中，必须检查是否包含了关键因素;确认并控制每次生 产结束后 至清洁开始的时间间隔。这对于局部用药物，悬浮剂和原料药的生产尤 其重要的。因为残留物干燥后，会直接影响清洁的效果。无论是否使

10、用了在线清洁系统，都应考虑设备清洁的微生物情况。这包括大量 的预防性 的措施，而不只是在染菌之后再除菌。应有证明，常规清洁和设备保存 不会有微生物的繁殖。比如，设备在保存之前应该干燥，清洁后不允许有任何积 水残留其中。对于无菌工艺的设备，或者非无菌的但有助于微生物增长的产品，清洁之后还 可能需灭菌或消毒。虽然灭菌或消毒程序已超出了本指南的范围，但要注意的 是，通过适当的清洁和设备保存来控制微生物， 是对接下来的灭菌消毒工序能够 达到无菌水平的保证。从/6无菌工艺应控制热原的观点来说，这一点也特别重要。因为设备灭菌工艺不一 定能够取得显著的灭活或去除热原的效果。书面清洗程序程序和文件要检查验证后

11、的清洗方法是否具体、详细，检查需要记录的项訂。我们曾见过 不少通用性的SOP,同时也见过其它使用批生产记录或者记录表格系统的，其要 求对每一步操作做出专门的文件记录。根据系统的复杂程度、清洗方法以及操作 人员培训程度和能力的不同，各种清洗工作或规程所需的文件数量也会有所不 同。当需要进行更为复杂的清洗过程时，必须对关键的清洗工序做出记录（如某些 原料药合成工序）。在这点上，应有专门的设备记录，包括清洗人员姓名、评估时 间。然而，对 于相对简单的清洗工作，仅记录“全部清洗工作已经被执行”就足 够了。其他因素，诸如清洗历史、清洗后测出的残留物水平、检验结果的可变性等有 时也要记录。例如，清洗之后的

12、残留物水平具可变性，而乂认定该清洗方法是可 接受的，则必须 证明清洗过程和工人操作的有效性。必须对清洗方法做出适当的评价，尤其是当认为工人操作有问题时，就要求有更为广泛的文件（指导）和记 录，并进行更多的培训。分析方法应确定用于残留物或污染物检测的分析方法的专属性和灵敬度。借助于先进的 分析技术，清洗和生产过程中极少的残留物或污染物也能够被检测出来。即使检 测不出污染物 或残留物水平，也并不能说明清洗之后不存在残留污染物，而只说 明样品中没有超过该分析方法灵敬度或检验限之外的污染物。公司应对分析方法 进行挑战性实验，即证明取 样方法能够从设备表面取回污染物，其收率是多少， 如50%, 90%等

13、。根据取样结果再做出结论是必须的。取样技术不当也可能得出相 反的结论（见下文）。取样可接受的通用取样方法有两种。最好是直接从设备表面取样，另一种方法是取 漂洗水样。a.表面直接取样法检查取样器材的类型，以及其对检测数据的影响，因为取样器材可能会干扰检 测。例如，取样拭子上的粘胶会干扰样品的分析。因此，在验证初期，必须确保 使用适当的取样介质和溶媒（用于从取样介质中提取样品），并且方便使用。直接取样法的优点在于:能够对最难清洗、能够到达的表面清洁程度进行评 价，从而建立单位面积上残留物/污染物的接受水平。此外，还能够取到“干的” 或不溶性残留物样品。b.漂洗液样品漂洗液取样法具有两点优势：能够对

14、较大表面进行取样；能够对到达不到的系统 或日常 无法拆卸的部位进行取样并做出评价。其缺陷是:残留物或污染物可能是不溶性或吸藏在设备中的。此时，可使用“脏点”类推法进行评价。对于“脏点”清洗的评估，特别是有干的残留物的，不能只检 测漂洗水样，而要检查“脏点”，从而确定清洗是否干净。当直接检测漂洗水样用于清洗方法验证时，应检查是否直接检测了漂洗水样中 的残留物或污染物。如若仅检测漂洗水样的水质情况（即使符合药典检测方法）， 而不测定其可能存在的污染物，这种做法是不能接受的。常规生产的中控C.日常生产的中间控制监测:一旦某清洁方法得到验证之后，日常监测可使用间接检测法，如电导率 检测。对于原料药生产

15、商来说，使用的反应罐和离心机，大型设备之间的管道连 接，只能对其漂 洗液取样。这种情况下，必须说明间接检测法与设备状况的相关 性。验证过程中，也应有书面证明:用间接法检测未清洗设备时，检验结果能够证 明该设备不能使用以及未清洗。即该检测结果能够得出不能够接受当前设备状况 的结论。（反证法）限度的建立对于清洁方法是否得到了验证，不打算建立统一的接受标准和方法。这也不切 实际，FDA因为在医药工业中，原料药、制剂产品以及设备种类太多。公司应根据自身对 该药品的了解建立合理的、实际可测的残留限度。为了建立合理的限度，确定分 析方法的灵敬度十分重要。已有工业界代表在文献或公开演讲上提出一些检测限 标准

16、，如lOppm;生物活性检测限标准，如正常治疗剂量的1/1000;或感官标准， 如“无可视残留物”等。要检查建立残留限量标准的方式。不同于制剂产品是已知残留物的化学成分 （如来自于活性成份、非活性成份、洗涤剂等），原料药可能会有部份反应物和其 他副产物不能得知。在建立残留限度时，仅关注主要反应物的残留限是不够的， 因为其它化学变量可能更难以除去。此时，除化学分析之外，可能还需要薄层等 其它方法。在原料药生产中，尤其是强效化学物质，如某些笛类物质，若不使用 专用设备，就必须考虑副产物残留的问题。检查的LI的是确保建立任何限度的依 据都是科学合理的。其它问题安慰剂为了评估和验证清洁方法，有些工厂在

17、相同设备、相同操作参数下生产安慰剂 （无效对照剂）。然后检测分析该批安慰剂是否受到了残留物的污染。然而，我们 已记录了使用安慰剂进行清洁验证的儿个问题。首先，无法肯定污染物是否均匀分布于生产系统内。如出料阀或混料机泄槽受 到了污染，分布于安慰剂中的污染物可能不均匀，通常会集中在出料最初阶段的 安慰剂中。此外，如果污染物或残留物的粒度较大，在安慰剂中的分布也可能不 均匀。有些工厂假定残留物会均匀地损耗于设备表面，这也是无效的结论。最终，任 何分析手段的能力都会因污染物的稀释而受到削弱。III于这些问题的存在，安慰 剂验证法应与漂洗液检测或直接取样检测结合使用。清洁剂re only added t

18、o facilitate cleaning during the cleaningprocess Thus, they should be easily removable Otherwise, a different detergentshould be selected 若使用清洁剂或肥皂清洁，应考虑检测残留物质时可能会遇到的困难。一个常 见问题是清洁剂的组成成分。许多清洁剂供应商不会提供详细的配方，使用户无 法评估其残留物。与药品残留物一样，工厂也应评估该清洁过程对于去除残留清 洁剂的有效性，这十分重要。然而，与药品残留物要求不同的是，清洗之后不得 有任何浓度的清洁剂残留（或对于高灵敏度

19、的分析方法而言，其残留浓度必须极 低）。清洁剂不是生产工序中的物质，而仅仅是用于帮助清洗而加入的物质。因 此，清洁剂应易于清除。否则，应选择另一种类型的清洁剂。检测直到清洁有些工厂的做法是，自清洗开始就一直重复地检测和评估多次检测结果，直到 洁净为止。他们对设备和系统进行取样、检测，再取样、复测，直至得到一个“可接受”的残留水 平。对于采用经过验证的清洁方法对设备或系统进行清洗 时，不应采取这种重复取样的做法。这种做法只有在极少数情况下可以接受。不 断地检测和取样只能说明，所采用的清洁方法没有得到验证。因为不断的复测实 际上反映并记录了这样一个事实，即进行低效的清洗之后，仍有超量的残留物污 染

20、物存在。/Chank实例解读：作为清洗验证（其实是任何研究活动），其实最核心的还是回答以下的问题：Why?为什么要做清洗操作，How to clean?怎么清洗,清洗的方法是什么？What is the criteria?清洗到什么程度，怎么判断已经清洗干净，What is the analysis method?清洗的检测方法是什么，用什么方法判断已经 清洗好，When and where to sample?取样的位置是什么，什么时间去取样,频率和 方法，用绕这儿个核心的问题，就可以把握清洗确认或是清洗验证的关键了。为了说明这个问题，我们先举一个最简单的例子。假设一个化学反应是A+B生成C

21、,其中的A+B的反应介质是乙醇，都在乙 醇中AB,易溶（溶解度为一毫升乙醇可以溶解10克以上的A,.B）。但是C不能 溶于乙醇在乙醇中不溶，一毫升乙醇只能溶解0.01克Co但是C在丙酮中可以 溶解，一毫升丙酮可以溶解10克以上的C）反应还有一个已知的朵质D（在乙醇 中不溶，一毫升乙醇只能溶 解0.01克D,但是D在丙酮中可以微溶，一毫升丙 酮可以溶解0.1克的D）o反应中使用300公斤的A,加上240公斤的B,反 应用的溶剂乙醇大约1000升。得到530公斤的C,和大约10公斤的Do一般 来说每批反应会投入过量的A,大概330公斤，所以最后混合物中还有残留的A大约30公斤。这是这个反应的简单描

22、述和背景介绍。我们先假设这个反应罐（2000升的塘玻璃罐，假设表面积达到10.5平方米）是专用于 这一步反应的，那么我们来看看怎么回答之前的那些问题：Why?为什么要做清洗操作，我们为什么要进行清洗呢，如果我们不对这个罐进行清洗，反应后，残留在系 统中的物质就有:A,B,C,D,和乙醇，这些物质对于后续批号的反应（因为是专用，就做这一步反应）来说，都是潜在的污染物。考虑到反应中使用的溶媒介质是有机溶媒（乙醇）。所以首先可以排除考虑微生 物的污染可能（因为微生物不会再这个系统中生存。一般只有存在水的系统才考虑 微生物的污染可能性）。你看看， 可能残留的是最大量为330-300=30公斤， 由于在

23、乙醇中的溶解度很 低，AC,D基本上都会析出固体，而被转移出去。这样会有在容器壁上残留的可能。由于 用量低，B且极易溶解于反应液中，而且不是过量的物质，即便有少量残留，肯 定也就在反应后残 留的母液中去了，可以不考虑了。对于下一个批号（批）的生产 来说，这些残留的A, 02C,就是主要的污染物。考虑到母液1000升，可以溶解至少10000公斤的A或B,残D留的30公斤A,基本上也都会溶解在母液系统中去了， 所以可以排除A的 残留可能性。就只需要考虑C和D To由于C是易溶解于丙酮的，所以即便530公斤的C都残留下来，最多需要53升的丙酮 就可以完全溶解了。如果全部残留，公斤的D需要的丙酮大概是

24、100升。比较这D10两个物质在丙酮的溶解性质，我们知道至少需要153升丙酮才可以全部溶解530公斤的C和10公斤的Do但是逻辑上分析，不可能有这么多的C和D残 留（否则就不要生产了都被残留下来污染下一批的生产了）。我们假设由于转运和 操作的不方便，残留的物，质占全部物质的10%,那么实际上就残留了53公斤的C和1公斤D,那么 只需要15.3升的丙酮就可以完全清洗设备了。但是常识也告诉我们，对于一个表 面积10。平米的5设备来说，一个2000L的大罐，15.3升的溶剂量连反应罐的 底部才勉强可以覆盖怎么可能去洗涤呢,所以，我们还是会选择反应罐1/5-1/3的量的溶剂去洗涤也就是最少400 ,升

25、的丙酮。我们可以发现这样的话。升的丙酮基本可以完全洗涤干净残留的东 西了。400到现在我们其实还没有回答为什么要清洗。其实你想如果我们不清洗，最直接 的后果就是残留的53公斤的C和1公斤的D会留到下个批号530公斤的C（批）中去。我们02为了降低这样的高达10%的上个批号的残留，所以我们必须 去清洗。如果这个真的就是一个专用设备，你想，如果我们选用了400升的丙酮清洗To公斤53那么可能残留下去的C（批号）就是0了，而01批号C中的杂质D,按照之前的计01算，也是不会存在的了。这样的一个专用设备你还需要验证吗,显然是不需要 了。你最多要做的就是，用400升的丙酮清洗后，在用点丙酮冲洗一下设备表

26、 面，分析以下冲洗 液来确认这个冲洗液中不含D就可以了（这里由于D和C在 丙酮中的溶解度差100被，而他们的残留量就差53倍，所以杂质D变成了最 差的考虑对象，只要D没有了，自C然就没有了。大多数的悄况下，的溶解度 不会差距这么大，如果有尽量考虑C,D CD都易溶的溶剂来清洗，这样C就可以作为考虑的对象了）。你完成这个部分的 讨论和有一个这样的冲洗液的检测数据，就可以结束清洗确认的活了，没有FDA会要求你再去 做更加验证的活了。如果你觉得风险已经收到控制了，对于专用设 备，清洗方面要干的活就结束了，下面的文字你可以不看了。好了，如果你实在是没有信心，一定要验证，我们就继续回答下面的问题。How

27、 to clean?怎么清洗，清洗的方法是什么？上面的讨论也可以看出来了，升的丙酮自然就可以清洗干净系统了。但是一次 就够400了的事情是否，可以再多做儿次，那当然了。你喜欢自然可以继续。最差的情 况就是你做一次400升的丙酮，把罐子关闭后，搅拌丙酮，尽可能的让丙酮接触 到这个罐子的所有面积，这样只要残留的物料一接触这个溶剂就会溶解进去了。你是否需要做其他的呢，当然了。如果你愿意，你可以分儿次操作（比如每次少 点，每次用200升，洗2-3次,按照之前的计算都是可以的也是足够的），也可 以采用加热和回流的方法来增加溶解度和清洗的覆盖面（温度越高，溶解度越 大）。这些都是你爱怎么做就怎么做的了。但

28、是不管如何，这里你需要定一个方法 出来，一个固定的清洗方法出来，这个方法会在后续的验证取样，以及最好的操 作SOP中变成一个固定的操作规程。比如我们选择的清洗方法是，笫一次采用300升的丙酮搅拌均匀30分钟后 放料，然后 第二次采用100升的丙酮冲洗罐表面。然后我们回答下一个问题What is the criteria?清洗到什么程度，怎么判断已经清洗干净，你既然洗了，你怎么知道洗到什么程度算是干净了，是可以接受的呢，我们这里 有儿个行业的标准可以用来参考。一个就是有名的0.10%,就是说洗到残留的01批物料占02批物料不超过02批物料总量的0.10%,这个是从ICH Q3的未知杂 质标准来的

29、。那么如果02批物料的批量是530公斤，0.10%就是0.53公斤。 残留的01批的C不能超过0. 54公斤，当01批的C只有0. 53公斤的时候， 其中的01批的D就只有0.01公斤了。那么请问这个时候你需要考虑这个01批的吗，它是远远低于主成分02批C的0. 10%的含D量的，所以显然可以不考虑(这也是我一直说的，主成分的杂质D在后续批号 的标准计算的时候可以忽略不考虑的本质原因)。好了，0.54公斤的01批的C是我们允许的最大的残留量，那么在10.5平 米的表面上如果这些物料时均匀分布的，他们每25平方厘米 会残留多少量呢，那就是(0. 54*1000g*25)/(10. 5*10000

30、)=0. 128g=128 mg.好，我们先到这里，休息一 下。看看另一个行业的标准。一般来说对于那些活性物质的，潜在毒性乂大的物质，我们可能会用lOppm作为清洗已经干净的标准，也就是说批的残留在批的中不能超过批的量的lOppm, 01C02C02C那就是最多只能残留530kg*10PPm=5. 4克，一样每25平方厘米会残留多少 量呢,那就是(5. 4*lg*25)/(10. 5*10000)=1. 28 mg.也就是和前面的数据差了100倍(其实很好理解，0. 1%和lOppm就是相差100倍)如果你不幸生产的物料是高活性的物料，比如抗肿瘤的东西，比如激素的东 西，你知道即便是2ppm它

31、的毒性、活性就有了，那么你的标准就要比lOppm好 要低了，就是那个数字的1/5,也就是变成了0.256 mg.这就是第三个标准，根 据你的物质生物活性标准来确认。那么我们一般用的LI测标准有多么精细呢，老外很较真，其实有这个数据的， 据说是4mg/cm2 (参考以下文献G. L. Four man and M. V. Mullen, Determining CleaningValidationAcceptance Limits for Pharmaceutical Manufacturing Operations, Pharm. Techno 1.17 (4),54-60 (1993),那么

32、也就是lOOmg,你发现没有这个和这个例子中的之前0. 1%的标准很接近。对于微生物呢，你的标准怎么定呢，等下再说。因为这里没有还涉及总的来说也就是回答这个问题的时候你需要建立的标准就是以上的四个标准 了。这是计算的标准，实际上最好你使用的方法足够敬感可以到这些限度，否则 你的标准定了也白定。所以就有了下面的一个问题需要回答了：What is the analysis method?清洗的检测方法是什么，用什么方法判断已经 清洗好，知道了吧，你要选的是可以敬感到检测到那么低浓度的C的方法才可 以。C?滴定，HPL还是TLC,这些都不重要，只要你的方法足够敏感可以分析检测 到你之前回答上个问题的

33、限度的方法就可以。什么指标和方法的敬感度相关，所 以你这个方法一定要验LOD证LOD的指标。你怎么确认这点，这是分析方法验证的环节了，你配一个浓度的C, g/ml,然 后等比lm例稀释下去，知道某个浓度比如0. 5, 0. 25. 0. 125. 0. 0625.0. 03125. 0. 016mg, 0. 00&0. 004mg/ml,你发现到0. OOlmg/ml的时候，信噪比到了3,那么这个浓度就 是你的LOD了。（当然可能更低）我们怎么把这个分析方法的LOD限度和之前假设的残留标准联系起来呢，发现 没有其实这是一个问题从两个方向拓展出来的，我们需要把他们联系起来了。就 要看下面的问题回

34、答了。When and where to sample?取样的位置是什么，什么时间去取样，频率和方法, 因为是验证，所以你需要再次描述你下你设定的清洗方法：第一次采用300升的丙酮搅拌均匀30分钟后放料，然后第二次采用100升 的丙酮冲洗罐表面。用什么方法取样，U测，但是不能作为唯一的方法。为什么，原因很简单，有 些0K人是近视（不是每个人都可以看到4mg/cm2）,有些地方很暗，看不清楚，有些 材质表面反光，看不清楚。为什么不能不用这个方法，也很简单，有些时候，你就 洗不到，有些时候物料可能结块在某个地方了。LI测的覆盖面会大。有不少检查 官会要求你们有照明设施来看，并要求证明那些边角可以看

35、到，就是这个原因。就剩下两个方法了，一个就是擦拭，一个就是漂洗液直接取样。对于我们设定 的方法，你喜欢什么取样方法呢，其实随便你用。好吧，我们先简单的，就用漂洗 液直接取样吧（具体来说，这个漂洗的方法也需要详细描述，比如是否需要把罐体 关闭状态漂洗，还 是敞开式的冲洗，取样的时候取的样品是漂洗后，还是冲洗期 间，这些都涉及到你具体 的取样操作，需要在验证记录中详细的交代）。我们洗了 两次，那就取样两次吧。为了操作的方便，我们每次就取100毫升漂洗液好了。 因为是漂洗的方法，所以我们残留的量就不需要折算容器的面积了。第一次清洗，我们可能残留的量在这100毫升溶剂中的浓度时多少呢，公斤/300升5

36、3=0. 177g/ml,如果真的这么高的浓度，我们之前设定的方法检测得到吗, 那当然别忘了我们的LOD是0.004mg/ml。笫二次漂洗呢，因为C的溶解度很 大（毫升丙酮溶解110克C,公斤相当于只需要5.3升丙酮就可以搞定了），所以 理论上53公斤在第一53次洗涤后，基本没有残留了，但是要知道可能之前300升的丙酮不会全部流岀罐外，不小心留了1升丙酮溶液在罐内，那就是残留了177克的物料0. 177/530=0. 033%,所以第二次100升的丙酮溶解完这些残留的物质后，我 们的取样浓度会是多少啊，等于1. 77mg/ml吧用我们之前的方法也是检测得出来的 吧,是的，可以。那么假设这个东，

37、西是这么多，算是洗干净了吗，第一次清洗后其实就干净了0.177/530=0. 033%，第二次假设不小心乂留下来1升丙酮，那么就是残留了1000*1.77mg/ml=l. 77g,就是0. 00177/530=3. 3ppm除非你这个的清洗标准是低于3. 3ppm,否则显然你 不需要在.清洗了。对于原料药来说，这个已经很干净了。如果我们采用的是擦拭的方法取样的，那这里乂有了关于擦拭的方法的有效性 和代表性能高的问题了。讨论代表性的时候，你就要详细交代，你计划在这个设 备的什么位置进 行取样，为什么在这些位置，为什么你认为这些位置可以代表整个 设备的全部，并综合考虑到了那些最难清洗到的部分,你需

38、要把这个设备的结构图 画出来，并在你讣划取样的位置做好图示。有效性就涉及到你需要做个模拟的擦 拭确认了。你要找一块和你要洗 的设备材质一样的物料来（一般可以找设备制造商 提供相同的物料），然后做成25cm2这样的一个方块，然后根据认为的加入已知数 量的C物质到这个25cm2中去（一般就是溶剂溶解后喷洒在表面，然后晾干）， 然后用一个棉签来回进行擦拭具体的擦拭路（线，擦拭次数，棋至是用的力量大 小，都需要详细的描述。然后将这个棉签溶解到指）定体积的指定溶剂中去，然后去分析这个溶剂中的C的浓度，算出C被擦下 来了多少数量，这个数量和你之前喷撒的C的数量的比值就是所谓的擦拭实验回 收率（一般可以接受

39、的范围是50%-130%） o当你确认了你的擦拭方法有可以接受的回收率的时候。你就可以在你选定的那 儿个指定的位置进行擦拭取样了。当然也一样，在第一次清洗后，你就下去取 样，选取一个一样 大小面积25cm2的区域，按照之询回收率方法一样的擦拭方法 （方向，来回次数，力道大小），然后用一定体积的溶剂来溶解，然后进行HPLC的分析。于是你就有了一系列的数据出来了。你就知道，每个你选择的具体位置 的残留量大小了。如果你的棉签都是溶解在100毫升的丙酮中的，平均回收率为67%（建议你做至少三个浓度的回收率涵盖，你设定标准的浓度。这个回收率说 明，如果你在设备表面如果实际残留了100克的东西，擦拭回来的

40、东西只有67g）那么按照之前的计算，如果你的标准设定是0. 10%,算是清洗干净的标准就 是128mg*67%/100ml =0. 86mg,/ml.如 果 是lOppm,那 这个浓 度就是0. 0086mg/ml.按照之前假设的LOD是0. 004mg/ml的标准，这些都是在LOD之上的，所以你就不需要担心这个分析方法不能有效的分析出来了。至此，你就完成了你的验证，证明用你选择的这个方法，可以很灵墩的检查出 你的残留的C,也可以有效的判断实际样品中是否有C残留了。你就可以按照设 定的清洗方法去，清洗三次，每次按照取样的位置和要求去取样，然后进行制定方法的分析，就会得到三组数据，来支持你判断这

41、样的清洗是否有效的结论了。 你的清洗验证就结束了。到这里可能你说，我都看懂了，也很简单，因为你设想的情况很简单，是专用 设备，乂是化合物的合成反应，乂不需要考虑微生物的污染。产品乂不会降解， 多么理想的状态啊，当然简单了。我的清洗验证顾问说，我们的问题很复杂的， 我们是非专用的设备，我们的辅料会降解，还会粘结成块，还会滋生微生物，用 的洗涤剂还必须有效去除才可 以。我们的情况用你的方法根本没有办法做的。你 是简化的情况，说起来简单，我们做起来很难的。真的如此吗，如果你真的认为如此，那么你就是根本没有学会清洗验证的思路，我之前教你 的你都忘记了。好，我们来看看为什么这么说吧。我们把问题开始复杂化

42、，在这个罐里我们还进行了另一个反应X+Y二W（是杂 质），X, Y V在丙酮中溶解，在乙醇，水中不溶解，反应的介质是丙酮（一样是1000升）。生产的W是溶解于水，微溶于丙酮的，杂质是不溶解于丙酮的，易溶 于水的。好了，这个设备V不是专用的了。公斤X和220公斤Y会生产出490公斤W和10公斤的V杂质。280批量也不一样了。这两个系列的生产还是交义的。你怎么清洗好，好麻烦啊，A, B, C. D和X, Y. W. V有了八个物质，溶剂系统也复杂了，这么多 丙酮，乙醇，水。选哪个好，别急，你还是先回答我的第一个问题吧：Why?为什么要做清洗操作，因为生产C的时候我们不希望有残留的A, B.D和之前

43、生产的X, Y. W, V影 响。（这个回答和之前的就多了四个物质罢了），考虑的时候原则还是一样的啊。 你就去找另一个溶剂出来，正好可以溶解或是正好对这些所有的东西都有一定的 溶解性能。比如你最后发现，中醇正好都可以溶解或是就V最难溶于屮醇（毫升 甲醇只能溶解0.1克V,毫升中11醇可以溶解1克W）,其他的都是易溶以上 的。你就只需要考虑V了。公斤的V会10全部留下来，最差的悄况就是全部留 下来了，那么就需要100升的甲醇来洗。而假设490公斤的W都留下来，你就 要用490升的甲醇来洗。显然还和以前一样，你就考虑你的W就可以了。还是定 位啥，就用500升的屮醇来洗肯定可以洗好了。有人说，你这样的情况是正好