整理好的酿酒分析实验指导书

1、酿酒分析实验指导 实验注意事项 实验课是提高教学质量的重要环节，通过实验巩固理论知识，培养独立工作能力， 为了保证实验顺利进行，实验前应注意以下几点： 1 每次实验前必须详细预习实验讲义，明确实验目的、原理方法及实验步骤，并在 记录本上拟出简单的实验原理、使用方法及操作时的注意事项。 2 实验时应严格按照实验步骤及试剂用量进行操作，不能任意变更。不熟悉的仪器 设备，应先请教老师后再使用。切勿随意乱动。 3 实验时如有问题发生，应首先用自己学过的知识，独立思考加以解决，努力培养 独立分析问题、解决问题的能力。如自己不能解决，可与指导老师共同讨论研究，提出 解决问题的方法。 4 实验进行时，必须把

2、随时观察到的现象和实验数据如实地记录在记录本上，不得 记在其他纸上，要养成良好的作原始记录的习惯。 5 实验中所有的玻璃仪器及其他器皿，应洗涤干净。桌面、地面要保持清洁。实验 完毕后，所有仪器设备应恢复原状。 6 必须遵守实验室的规则： 1) 室内不得高声谈笑，必须保持安静的实验环境。 2) 爱护仪器，不浪费药品、节省水电。遵守实验室的安全措施。 3) 公用仪器及试剂瓶，不要移动原有位置。注意瓶塞切勿盖错，以免污染试剂。用 毕后立即放回原处。对于有害药品应按实验室规定取用。 4) 滤纸、火柴棒、碎玻璃等投入废品缸，切勿丢入水池，以保证下水道畅通。 5) 所用仪器如有损坏，应自行登记并向指导老师

3、报告。 6) 保持实验室的整齐清洁， 个人所带与实验无关的东西， 如书包等物要放在指定地 方，不得乱放在实验桌上。 7) 最后一组实验人员，离开实验室时，应检查水电、门、窗等是否关闭，以保证实 验室的安全。 河北科技师范学院 二零零七年三月 实验一、葡萄酒酒度的测定 1、原理 以蒸馏法去除样品中不挥发性物质，用酒精计测得酒精体积百分数。查表加以温 度校正，求得20C时乙醇的体积百分数（, V/V），即酒精度。 2、仪器 酒精计 （ 分度值为 0.1 度） 全玻璃蒸馏器： 1000ml 100ml 容量瓶 100ml 量筒 3、试样的制备 用一洁净、干燥的 100ml 容量瓶准确量取 100ml

4、 样品于蒸馏瓶中。用 50ml 水分 三次冲洗容量瓶,洗液并入蒸馏瓶中,再加几颗玻璃珠。 连接冷凝器，以取样用的原容量瓶作接收器（外加冰浴）。开启冷却水，缓慢加热 蒸馏。 收集馏出液接近刻度，取下容量瓶，盖塞。于20 C水浴中保温30min，补加水 至刻度,混匀,备用。 4、分析步骤 将制得的试样倒入洁净、干燥的 100ml量简中，静置数分钟，待其中气泡消失； 轻轻放入洗净、 干燥的酒精计, 使其不得接触量筒壁, 同时插入温度计, 平衡 5min； 水平观测，读取与弯月面相切处的刻度示值，同时记录温度。 根据测得的酒精计示值和温度，查表，换算成20 C时酒精度。 所得结果表示至一位小数。 实验

5、二、葡萄酒总浸出物的测定 一、原理 用密度瓶发测定样品或蒸出酒精后的样品密度,根据密度值查表,求出总浸出物的 含量。 二、仪器与试剂 瓷蒸发皿： 200ml附温度计密度瓶 高精度恒温水浴：20.0 0.1 C100ml容量瓶 三、测定步骤 1 ）试样的制备 用100ml容量瓶量取100ml 20 C样品，倒入100ml的瓷蒸发皿中；于 80 C水浴上 蒸发至约原来体积的 1/3,冷却；将残液小心移入原 100ml 容量瓶中,用水多次荡洗蒸 发皿，洗液并入容量瓶中，于 20 C定容至刻度。 2）密度瓶质量的测定 将密度瓶（包括附温度计和侧孔罩）彻底洗净（用蒸馏水漂洗） ；干燥（依次用乙醇、 乙醚

6、洗涤并吹干） 。然后带温度计和侧孔罩称重。重复干燥和称重，直至恒重，得出密 度瓶的质量 （m） 。 3）蒸馏水质量的测定 取下密度瓶上的温度计，将新煮沸30min后冷却至15 C左右的蒸馏水注满密度瓶，插 上温度计，瓶中不得有气泡。将密度瓶浸入 （20.0 0.1） C的恒温水浴中，待内容物温度 达20C并保持10min后。用滤纸吸去侧管溢出的液体，使侧管中的液面与侧管管口齐 平，立即盖好侧孔帽；取出密度瓶，迅速擦干瓶壁上的水，立即称重。在同样条件下 做平行试验，求出平均值，作为密度瓶加蒸馏水的质量（m1）。 4）试样质量的测定 用制备好的试样将密度瓶冲洗 23次，然后注满密度瓶按 3的操作方

7、法操作，得出试 样加密度瓶的质量 （m2）。 四、计算 脱醇样品20C的密度p i ,以p i X 1.0018的值，查表求出总浸出物的含量 Jz （g/L） 实验三、 直接滴定法测定总糖或还原糖 一、实验原理： 将斐林试剂 A、B 液混合后，生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，沉淀很快与酒石酸钾钠 起反应，生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。这种络合物被葡萄糖还原，生成红色的 氧化亚铜沉淀。当达到终点时，稍微过量的还原糖立即把次甲基蓝指示剂还原，此时 溶液由蓝色变为无色，显示出氧化亚铜的红色指示定终点。用含糖样品溶液滴定已标 定的斐林试剂 A、B 液，就可以计算出样品中还原糖或总糖的含量。 二、仪器及试剂

8、： 1 、仪器： 调温电炉，分析天平，烘箱， 干燥器，水浴锅，滴定管等 2、试剂： 1）盐酸酸溶液（1 : 1）:取100ml的盐酸，缓慢倒入 100ml的水中，摇匀。 2） 氢氧化钠溶液（200g/L）:称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释定容至 500ml，摇 匀，贮于塑料瓶重。 3）斐林氏A : 34.7gCuSO4加水至500ml定容。斐林氏B: 173g酒石酸钾钠加50g 氢氧化钠加水至 500ml 定容 4）1%次甲基蓝指示剂:称量 1.0g 次甲基蓝，溶解于水中并稀释至 100ml。 5）2.5g/L标准葡萄糖溶液：精确称取经 105 C以下温度干燥至恒重的葡萄糖 2.5g （准

9、 确至O.OOOIg）,溶解于水中，稀释定容至1000ml。 三、操作方法： 1 、试样的制备 1）测总糖用试样 准确吸取一定量的样品（Vi）于100ml容量瓶中，使之含总糖为0.20.4g； 加5ml盐酸（1 : 1）溶液，加水至 20ml，摇匀； 于68 1C水浴上水解15min，取出，冷却； 用200g/L氢氧化钠溶液中和至中性，调温至 20C,加水定容至刻度（V2） 2）测还原糖用试样： 准确吸取一定量的样品（V1）于100ml容量瓶中，使之含还原糖为0.20.4g，加水定 容至刻度（ V2） 2、测定 1 ）斐林试液的标定：准确吸取斐林试液A、B各5.00ml，加水50ml，置250

10、ml三角 瓶中，在电炉上加入至沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的 蓝色消失呈红色时，加 2 滴次甲基蓝指示剂，继续滴加葡萄糖至蓝色消失为终点。记 录葡萄糖标准溶液消耗的体积。 另取斐林试液 A、 B 各 5.00ml 置 250ml 三角瓶中， 加水 50ml 和比上述实验少 1ml 的葡萄糖标准溶液加热至沸并保持2min，加2滴次甲基蓝指示剂，继续滴加葡萄糖至 蓝色消失为终点。记录葡萄糖标准溶液消耗的总体积。 2）预测：精确吸取斐林氏 A、B液各5ml，加水50ml，置于250ml三角瓶中，在沸 腾的状态下用制备好的试样滴定，当溶液的蓝色消失将呈红色时，加入次甲基蓝指示

11、剂 2 滴，继续滴定蓝色消退，记录用量。 3）测定：斐林试液 A、 B 各 5.00ml 置 250ml 三角瓶中，加水 50ml 和比上述实验少 1ml的试样溶液加热至沸并保持2min，加2滴次甲基蓝指示剂，继续滴加试样至蓝色 消失为终点。记录溶液消耗的总体积。 四、计算： F=C*V 式中： F-斐林氏 A、 B 液各 5ml 相当于葡萄糖的质量， g； C-葡萄糖标准溶液的浓度，g/L； V-消耗的葡萄糖标准溶液的总体积，ml； F X 3=*1000 （V1/V2）*V3 式中 : X 3- 总糖或还原糖的含量， g/L; F- 斐林氏 AB 溶液各 5ml 相当还原糖的重量(以葡萄糖

12、计) ，g； V1- 吸取的样品体积， ml ； V2- 样品稀释定容后的体积， ml； V3- 测定时消耗样品稀释液的体积，ml； 实验四、葡萄酒滴定酸的测定 、实验原理 葡萄酒中的有机酸在用标准碱液滴定时，被中和生成盐类。用酚酞做指示剂，当 滴定至终点时，根据耗用标准碱液量，可计算出样品中总酸含量。通常以该葡萄酒中 含量最多的酸来表示酸度。 、仪器及试剂： 1、仪器： 容量瓶滴定管移液管 三角瓶分析天平 2、试剂： 1%酚酞：称取 1.0g 的酚酞，溶于乙醇，用乙醇稀释至100ml 。 0.05MNaOH 标准溶液； 邻苯二甲酸氢钾 、实验方法： 1、标准溶液的配制与标定 1) 在粗天平上

13、称取约 100gNaOH ，加水 100ml 使之全部溶解，冷却后置于聚乙烯塑 料瓶中，密封，放置数日澄清后，取上清液2.8ml，加新煮沸过并已冷却的蒸馏水至 1000ml ，摇匀。 2) 将分析纯苯二甲酸氢钾于120C干燥箱中干燥 1小时至恒重，冷却称取0.10.2g 于 250ml 锥形瓶中，加入 50ml 蒸馏水溶解，加入 3 滴酚酞指示剂，用以上配好的碱液 滴定至微红色，计算氢氧化钠当量浓度。同时做空白试验。 氢氧化钠标准溶液浓度按下式计算： m C(NaOH)= (V 1-V2) X 0.2042 式中： C(NaOH) 标准氢氧化钠溶液的浓度 ,mol/L ； m 邻苯二甲酸氢钾的

14、质量，g； V1-滴定终点消耗氢氧化钠溶液体积,ml ； V2-空白试验消耗氢氧化钠溶液体积,ml ； 0.2042- 与 1.00ml 氢氧化钠标准溶液 C (NaOH) =1.000mol/L 相当的以克表 示的邻苯二甲酸氢钾的质量。 2、测定方法 取调温至20 C的样品25ml (V2),加入50ml蒸馏水将样品移入 250ml锥形瓶中, 同时加入2d酚酞指示剂，摇匀后，用标准碱液滴定至浅红色，并保持30s内不变色， 记录消耗的氢氧化钠标准溶液的体积( V1)。 空白试验：用同样的方法，只是不加入酒样，做空白试验。记录消耗标准碱液的体 积( V0)。 四、 计算： C*(V i-Vo)X

15、 Si X= X 1000 V2 式中： X 样品中滴定酸的含量(以酒石酸计) ， g/L； C标准氢氧化钠溶液的浓度 ,mol/L ； V0-空白试验消耗标准碱液体积 ,ml； V1-滴定终点消耗标准碱液体积 ,ml； V2-滴定时吸取样液体积 ml； Si-与1.00ml氢氧化钠标准溶液C(NaOH)=1.000mol/L相当的以克表示的试 样主体酸的质量。 S酒石酸= 0.075；S 苹果酸 = 0.067；S 柠檬酸= 0.064；S 草酸 = 0.045 实验五、葡萄酒挥发酸的测定 一、实验原理 以蒸馏的方式将样品中挥发酸蒸出，然后用碱标准溶液滴定，以消耗的碱标准溶 液的量来计算挥发

16、酸的含量。 二、仪器及试剂 1 、试剂 氢氧化钠标准溶液 c(NaoH) = 0.05mol/L (配制及标定方法同试验四) 酚酞指示液 (10g/L) ：称取 1.0g 酚酞，溶于乙醇，用乙醇稀释至 100ml。 酒石酸溶液(200g/L):称取20g酒石酸溶解至100ml。 2、仪器 蒸馏装置：单沸式蒸馏装置 三、分析步骤 1 、安装水蒸气蒸馏装置 按仪器要求安装好蒸馏装置；在蒸气发生瓶 (A) 内装入中性蒸馏水，其液面应低于 内芯(B)进汽门3cm高于B中样品液面；取20C样品10.00ml (V)于蒸馏装置样品瓶 中，加入10ml酒石酸溶液；把B插人A内，按上氮气球（D）,连接冷凝器（

17、E）;将100ml 处有标记的 250ml 三角瓶置于冷凝器下面接收馏出液。 2、蒸馏 待全部安装妥当后，进行蒸馏。先打开蒸气发生瓶的排汽管 （C） ；把水加热至沸， 2min后夹紧C,使蒸气进入B中进行蒸馏；待馏出液达 100ml时，放松C,停止蒸馏， 取下三角瓶，用以样品的测定。 3、滴定 将馏出液加热至沸， 除去CQ,但沸腾时间不能超过 30s,立即冷却，加入2滴酚酞 指标剂，用氢氧化钠标准溶液滴定至粉红色，并保持 30s 内不变色为终点。 4、记录 记录消耗的氢氧化钠标准溶液的体积（ V1）。 四、计算 样品中的挥发酸按下式计算： CX ViX 60.0 X= V 式中： X 样品中挥

18、发酸的含量, g/L ； C 氢氧化钠标准溶液的物质量浓度, mol/L ； V1 氢氧化钠标准溶液的体积, ml； 60.0 与1.00ml氢氧化钠标准溶液C（NaOH） = 1.00mol/L相当的以克表示的 乙酸的含量, g； V 取样体积, ml； 实验六、苹果酸层析分析 一、原理 将葡萄酒以小原点的形式点样于滤纸上,经展开、显色后,根据比移值与标准比较 定性。 酒石酸移动速度最慢，离葡萄酒点样点最近，酒石酸Rf在0.260.30 ; 乳酸和琥珀酸速度最快，被推动到滤纸的最顶端，琥珀酸Rf在0.690.76 ; 苹果酸移动的速度处于两者之间，苹果酸Rf在0.520.56。 二、仪器与试

19、剂 1 、仪器 滤纸：美国沃特曼 1号或新华 1号,杭州新华造纸厂 点样器：毛细管或微量注射器 电吹风 50ml小烧杯 层析缸 2、试剂 50 乙酸 溴酚蓝的正丁醇溶液：在 1L的正丁醇中加入1g溴酚蓝溶解。 展开剂：取50ml溴酚蓝丁醇溶液与25ml50 %乙酸混合。 标样：苹果酸标样，乳酸标样，酒石酸标样 三、操作方法 1 、将配制好的展开剂装入层析缸内，封严。 2、在滤纸下端45cm处轻轻做一条基线，然后将酒样和标样点于滤纸上，电吹风吹干 后再点，应少量多次，且每滴样品在滤纸上直径不超过5mm。 3、将滤纸卷成筒状，并用两个小夹夹住。 4、将滤纸轻轻放入层析缸内，使滤纸不触及层析缸的内壁

20、，点样点也不能浸入展层剂 中，然后将层析缸盖严。 5、当展层剂移到距滤纸顶部 12cm时，将滤纸取出，并用夹子固定住进行干燥。 四、注意事项 1 )裁纸时，按着纤维排列的方向不留毛边。 2) 点样量不能过多，否则会造成拖尾；点样点直径应小于3mm 为佳，未知发酵液 试样依据酸性强弱点样，酸弱时，点 5 滴，酸强时，点 3 滴。 3) 控制标样品与试样用量保持一致，根据标样和试样层析斑点大小估测样品中酸的 多小。 4) 注意爬层时间，避免溶剂前沿过头。 5) 点样的毛细管应专样专用，避免混淆。 实验七 二氧化硫的测定 一、原理 二氧化硫可以与碘发生氧化还原反应，用碘标准溶液作滴定剂，淀粉作指示剂

21、， 根据碘标准液消耗的量计算试样中二氧化硫的含量。 试样用硫酸酸化可使水合态的二氧化硫变为游离态， 以测定游离二氧化硫的含量。 试样用碱处理，使结合态的二氧化硫变为游离二氧化硫，经过酸化，以测定总二 氧化硫的含量。 二、试剂与溶液 1) 硫酸溶液(1 : 3):取1体积浓硫酸缓慢注入 3体积水中。 2) 淀粉指示液(10g / L):称取1g淀粉，加5ml水使成糊状，在搅拌下将糊状物加到 90ml沸腾的水中，煮沸 1 2min，冷却，稀释至100ml。 3) 氢氧化钠溶液 (100g/L) ：取 100g 氢氧化钠溶解稀释至 1L。 4) 碘标准溶液 c(1/2l 2) = 0.02mol/L

22、。 称取13g碘(相对分子质量126.9)及35g碘化钾，用水溶解稀释至 1000ml，摇匀， 贮于棕色瓶中，此溶液的浓度约为 0.1mol/L 。 标定： 采用标准硫代硫酸钠溶液标定碘标准溶液，标定的反应方程式如下： 2- - 2 I 22S2O32-=2I - +S4O62- 准确量取 30.00ml 配制好的碘溶液置于 250ml 碘量瓶中，加 150ml 水，用硫代硫 酸钠标准溶液滴定，近终点时加 3ml 淀粉指示剂，继续滴定至溶液蓝色消失。记录消 耗硫代硫酸钠标准溶液的量 (V) 。 以水替碘液作空白试验：取250ml水，力口 0.05ml配制好的碘溶液(C= 0.1mol/L )

23、及 3ml 淀粉指示液，用硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液蓝色消失，记录消耗硫化硫酸 钠标准溶液的量 (V2)。 碘标准溶液的浓度按下式计算： (V V2) x Ci C = V1-0.05 式中：C碘标准溶液物质量浓度，mol/L ; Ci硫代硫酸钠标准溶液物质的量浓度，mol/L ; m重铬酸钾质量，g; V 硫代硫酸钠溶液的用量，ml; V2空白实验消耗硫代硫酸钠溶液的量，ml; Vi碘溶液的用量，ml; 0.05空白试验中加入碘溶液的量，ml; 硫代硫酸钠溶液的标定： 称取0.15g于120C烘干至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，加入25ml蒸馏水， 加2g碘化钾及20ml硫酸溶液(20

24、%),摇匀，于暗处放置 10min。加150ml水，用配 置好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时加 3ml 淀粉指示剂继续滴定至溶液由蓝色变为 亮绿色。同时做空白试验。 计算：硫代硫酸钠标准溶液浓度： m C (Na2S2O3)= (V1 V2)x 0.04903 式中：C (Na2S2O3)硫代硫酸钠标准溶液物质的量浓度，mol/L ; m重铬酸钾质量，g; V1硫代硫酸钠溶液的用量，ml; V2空白实验消耗硫代硫酸钠溶液的量，ml; 0.04903与 1.00ml 硫代硫酸钠标准溶液 C(Na 2S2O3)=1.000mol/L 相当以克表 示的重铬酸钾的质量。 三、分析步骤 1、游离二氧化硫

25、 吸取50.00ml样品于250ml碘量瓶中，加入少量碎冰块，使温度降至5 10C，再 加入 l ml 淀粉指示液， l0ml 硫酸溶液，立即用碘标准溶液滴定至淡蓝色，保持 30s 不变即为终点，记录消耗的碘标准溶液的体积 (v) 。 以水代替样品，做空白试验，消耗的碘标准溶液的体积记为(V0) 。 计算： CX (V V0) X 32 X1=*1000 50 式中：Xi样品中游离二氧化硫的含量，mg/L; C碘标准溶液物质量浓度，mol/L ; V消耗的碘标准溶液的体积，ml; V0空白实验消耗碘标准溶液的体积，ml; 32与 i.00ml 碘标准溶液 C=i.000mol/L 相当以毫克表

26、示的二氧化硫的质 量； 50取样体积， ml； 2、总二氧化硫 取25mL氢氧化钠溶液于250ml碘量瓶中，再准确吸取 25.00ml样品，并以吸管尖 插入氢氧化钠溶液的方式，加入到碘量瓶中，摇匀，盖塞，静置15min，使结合态的二 氧化硫完全转化为游离二氧化硫，再加人少量碎冰块，iml 淀粉指示液， i0ml 硫酸溶 液，摇匀，立即用碘标准溶液滴定至淡监色， 30s 内不变即为终点，记下消耗的碘标准 溶液的体积 (V) 。 以水代替样品做空白试验，消耗的碘标准溶液的体积记为(V0)。 四、计算 CX (V V0) X 32 X 2=*i000 25 式中：X2样品中总二氧化硫的含量，mg/L

27、 ; C碘标准溶液物质量浓度，mol/L ; V消耗的碘标准溶液的体积，ml; V0空白实验消耗碘标准溶液的体积，ml; 32与1.00ml碘标准溶液C=1.000mol/L相当以毫克表示的二氧化硫的质量。 25取样体积，ml; 实验八、铁含量的测定 一、实验原理 磺基水杨酸在碱性条件下与三价铁生成黄色络合物，以比色法测定。 二、实验试剂 1、1 ： 1.5氢氧化铵溶液：取100ml的氨水，注入150ml水中，摇匀。 2、 10%磺基水杨酸溶液：称取100g的磺基水杨酸，用水溶解稀释至1L。 3、 铁标准储备液（0.1g/L）:称取0.864g硫酸铁铵溶于水，加 1ml硫酸，移入1000ml

28、容量瓶中，稀释至刻度。 4、铁标准使用液（10mg/L）:吸取10.00ml铁标准储备液于100ml容量瓶中，用0.5% 硝酸溶液稀释至刻度。 三、实验步骤： 1、试样的制备 准确吸取25.00ml样品（V）于蒸发皿中，在水浴上蒸干，置于电炉上小火炭化，然后 移入（550 25）C高温电炉中灼烧，灰化至残渣呈灰白色，取出，加入10ml （1 : 1） 的盐酸溶解，在水浴上蒸发至2ml，再加入5ml水，加热煮沸后，移入 50ml的容量瓶 中，用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，用水稀释至刻度（VJ,摇匀，同时做空白 试验。 2、取比色管7支，按下表顺序加入各种试剂 编 号 0 1 2 3 4 5

29、6 标准铁溶液（ml） 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 样品 10ml 水（ml） 10 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 0 磺基水杨酸（ml） 5 5 5 5 5 5 5 1 : 3氢氧化铵（ml） 5 5 5 5 5 5 5 摇匀，放置10分钟，以1-5号管为标准系列，或在480纳米下测光密度，绘制标准曲 线。 四、计算 伽一m）x V1 X= V x V2 式中：X样品中铁的含量，mg/L ; m1测定用样品从标准曲线上查的铁的质量，卩g; 试剂空白液中铁质量， m0 V 取样体积，ml; Vi样品消化液的总体积，ml; Vi 测定用试样的体积，ml; 实验九、葡萄酒

30、中总酚的测定 一、原理 葡萄酒中的所有酚类物质被福林肖卡试剂氧化。该试剂由磷钨酸和磷钼酸的混 合物组成，氧化酚后，会变成蓝色的氧化钨和蓝色氧化钼的混合物。 产生的蓝色在 765nm 有最大吸收峰，生成物的颜色深浅与酚的含量成正比，可比 色测定其含量。 二、仪器与试剂 1、仪器 分光光度计、 恒温水浴、 圆底烧瓶、 i00ml 容量瓶、 冷凝管 2、试剂 1）福林一肖卡试剂： 市售的试剂可以使用，也可按照下面的方法配制：把 i00g 钨酸钠和 25g 钼酸钠溶解在 700ml蒸馏水中，加入50ml85 %的磷酸，100ml浓盐酸，加入几粒玻璃珠，连接好冷凝 器，用文火加热回流 1 0小时。回流后

31、用 50ml 水冲洗冷凝管上的附着物，然后取下。 加入150g硫酸锂，几滴溴，加热煮沸15min，冷却，加入蒸馏水使其达1000ml。 最后的颜色应是黄色，不带丝毫的蓝色、绿色，发绿即不得使用。 2）碳酸钠饱和溶液 称取20g无水碳酸钠溶于100ml蒸馏水中，在7080 C溶解，放置过夜，次日加入少 许水合碳酸钠到饱和溶液中做晶种，使结晶析出， 24h 后过滤后备用。 3）酚母液 称取 0.500g 五倍子酸，用水溶解定容到 100ml。 三、测定步骤 1 ）标准曲线的绘制 用移液管精确吸取 0.0、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ml酚母液于100ml的容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度

32、。各瓶的酚浓度分别为0、 50、 100、 150、 250、 500mg/L。 再分别取6支100ml容量瓶，分别吸取上述溶液各1ml，各加水60ml，混合，各加 入福林一肖卡试剂 5ml ，充分混匀。 在 30s 至 8min 内各加入 15ml 碳酸钠溶液，混合后用水定容。 将以上各液在20C下放置2小时，然后在分光光度计上765nm下测定吸光度。 以酚浓度做横坐标，吸光度做纵坐标，绘制标准曲线 2）样品的测定 白葡萄酒：吸取 1ml样品于100ml的容量瓶中，其他步骤按照（1） 操作。然 后在分光光度计上 765nm处测定吸光度。 红葡萄酒：吸取10ml样品稀释至100ml，再吸取1m

33、l稀释的样品按上法进行测定。 四、结果计算 样品吸光度数据在标准曲线上查出相应的酚浓度，即为样品中总酚的实际含量。 红葡萄酒需乘上稀释倍数。 实验十、葡萄酒中单宁的测定 一、原理 单宁类化合物，在碱性溶液中，能将磷钼酸和磷钨酸盐类还原成蓝色化合物，蓝 色的深浅程度与单宁含酚基的数目成正比。 二、仪器与水试剂 1 、试剂 1 ）福林丹尼斯试剂： 在750ml蒸馏水中加入100g钨酸钠，20g磷钼酸，50ml浓磷酸。加热回流2小时， 冷却，加入蒸馏水稀释至 1000ml。 2）碳酸钠饱和溶液： 称取20g无水碳酸钠溶于100ml蒸馏水中，在7080C溶解，放置过夜，次日加 入少许水合碳酸钠到饱和溶液中做晶种，使结晶析出，24h 后过滤后备用。 3）单宁酸标准溶液： 称取 0.500g 单宁酸，用水溶解，定容至 100ml。 2、仪器 分光光度计 恒温水浴 圆底烧瓶 100ml 容量瓶 冷凝管 三 、操作步骤 1 ）标准曲线的绘制 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.5、5.0、7.5、10.0ml的单宁酸标准溶液于 50ml的 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。 分别吸取 1ml 上述溶液于 100ml 的容量瓶中，加入 70ml 的蒸馏水，加入 5ml 福林 丹尼斯试剂，10ml的饱和碳酸钠溶液，加水至刻度摇匀。