健康婴幼儿携带艰难梭菌的流行病学特征及跟踪调查

1、健康婴幼儿携带艰难梭菌的流行病学特征及跟踪调查目的：艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)是肠道内一种专性厌氧的芽抱杆菌 , 有产毒株和非产毒株 , 均能够在健康人体内无症状定植。 在受到某些因素影 响如抗生素的长期应用或者免疫抑制剂的使用等使肠道菌群环境发生改变而引 发艰难梭菌感染 (Clostridium difficile infection,CDI),继而发生艰难梭菌相关性腹泻 (Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)等症状。CD在健康婴幼儿体内能够长期的无症状定植，定植率在各个国家和地区变 异性较大 , 且

2、各地区定植株的型别及影响定植的因素也各不相同。本地区关于这 方面的流行病学资料相对有所欠缺 , 本研究拟对河北邯郸地区 0-3 周岁的健康婴 幼儿肠道内CD的定植情况及影响其定植的因素进行流行病学调查，同时对若干婴儿进行为期12个月的跟踪调查，了解其体内CD定植的动态情况及发生变化的 影响因素。使河北地区健康婴幼儿体内CD定植的流行病学资料更加丰富，为临床制定 预防和治疗疾病策略提供证据。 方法：1 从2014年10月至2015年12月,共收集 河北邯郸地区 0-3 周岁以内健康婴幼儿粪便标本 1098份,每人收取一次 ,并记录 每个婴幼儿的基本资料。同时,对29名婴儿从出生至 12月龄进行为

3、期 1年的跟踪调查 ,分别在出生时、 1 周、2 周、3周、1 月、2月、3月、4月、5月、6月、7月、8月、9月、10 月、11 月、12月等16个时间点收取粪便标本 ,记录每次当时的资料情况。 2将 收集的粪便标本应用芽抱富集法进行CD的分离培养，并对疑似菌落进行鉴定。将鉴定得到的CD菌株按照细菌基因组DNA式剂盒的方法提取DNA后采用多 重PCR勺方法检测毒素 A B及二元毒素 A B基因,包括tcd A、tcd B、cdt A cdt B 16Sr DNA3将提取的菌株DNA4行核糖体分型,分型结果用Quantity One 软件做比对分析。分出的型别跟标准菌株类型比较并命名。4将一次

4、性标本所得的CD采用琼脂稀释法进行药物敏感实验 , 共选择了非达霉素、万古霉素、甲硝唑、利福平、 利福昔明、红霉素、四环素、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢他啶、头孢曲松、美 罗培南、氯霉素、克林霉素等14种抗生素,分别测定其MIC值(最低抑菌浓度)。结果:1 1098位 0-3 岁健康婴幼儿的粪便标本中共有 250份标本分离培养出 250株艰难梭菌 , 总携带率为 22.77%(250/1098), 其中产毒株携带率为 12.57%(138/1098), 在所有产毒株中有 1 株为 tcd A+tcd B+cdt A+cdt B+, 其它 均为 tcd A+tcd B+cdt A-cdt B- 。

5、所有菌株通过核糖体分型共分出 15种不同的 核糖体型别,型别中数量最多为HB-3型,占所有菌株的19.6%,其次是HB9型 (14%)、HB1 型(13.6%)、HB2型(10.8%)和 HB5(10.4)。分析结果显示母亲的怀孕周期、 近期应用抗生素和近期住院史可能是健康婴 幼儿体内艰难梭菌定植的影响因素。 本次研究中未发现高产毒株型别 027和 078 型。2抗生素耐药性分析中，从250株艰难梭菌对14种抗生素的MIC值测定结果 可见 , 所有实验菌株对万古霉素、 甲硝唑和非达霉素三种药均高度敏感 , 没有耐药 菌株;对美罗培南和氯霉素的耐药率比较低 ,分别为 2%和6.8%;对其他几种药

6、物 耐药率均较高 , 由高到低依次为克林霉素 (99.2%)、头孢他啶(96.8%)、红霉素 (94.4%)、环丙沙星(88%)、利福平(63.2%)、利福昔明(63.2%)、四环素(54.4%)、 左氧氟沙星(51 .6%) 、头孢曲松(44.8%) 。 3跟踪调查的结果 ,29 位婴儿共收集 437份标本，其中20个婴儿的粪便标本中发现有 CD的定植，定植率为69%(20/29)有产毒株定植的有 15 人, 定植率为 75%(15/20) 。其中,111 份阳性标本中分 离出 79株产毒艰难梭菌 ,所有分离菌株的产毒株定植率为 71.2%(79/111) 。定植CD的婴儿中有4个在出生后1

7、个月内定植CD,其它16个均为1月龄之 后才有CD的定植。且在定植者中有些定植是连续的(4、5、7、8、12号)，有的 是间断性的 (1 、 2、 3、 6、 9、 10、 11、 13、 16、 17、 18、 19号), 还有个别是一 过性的定植 (14、 15、 20号婴儿)。4在跟踪研究中,111株艰难梭菌共分为8种核糖体型,其中HB9(n=14)和HB2(n=18)为非产毒型，其它几种型别 HB42(n=26)、HB1(n=16)、HB52(n=12)、HB3(n=15)、HB6(n=5)、HB5(n=5)均为产毒型别。基本上每个婴儿体内定植的艰难梭菌型别前后一致，其中8号在2月龄时

8、粪便标本中分离出CD型别为HB3型, 之后分离出的菌株型别为HB-42型;11号婴儿则先后分离出HB1型和HB9型菌株, 即之前分离出CD产毒株，后有非产毒CD的定植;15号有HB52型和HB1型菌株的 先后定植；16号先后分离出HB1型和HB3型的艰难梭菌菌株。结论:1 本次研究中河北邯郸地区 0-3 周岁健康婴幼儿的艰难梭菌总携带率 略低于国外相关报道 , 而产毒株携带率与国内报道结果相似。 2 分析结果显示母 亲的怀孕周期、近期应用抗生素和近期住院史可能是健康婴幼儿体内艰难梭菌定 植的影响因素 , 与国内外的报道结果相似。收集菌株的核糖体分型结果显示，优势型别为HB3和HB9而且本次分离的 菌株型别中 , 有些型别同省内之前分离出的住院儿童和成人的菌株型别相同 , 提 示艰难梭菌在这些个体间传播的可能性。3一次性标本分离的菌株对 14种抗生素的耐药情况结果显示 , 与国内的几篇 报道相比利福霉素类的耐药率相对较高 ,可能与收集标本所在地应用抗生素情况 相关。其它几种药物的耐药情况与国内报道的大多相似4在跟踪调查的婴儿体内CD的定植率与第一部分中0-12月龄年龄段收取一 次性标本的CD定植率相比较高，差异