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文档简介
12基因工程的基本操作程序(时间:30分钟满分:50分)考查知识点及角度难度及题号基础中档稍难目的基因的获取4基因表达载体的构建及导入1、2、3目的基因的检测与鉴定5综合运用6、7一、选择题(共5小题,每小题6分,共30分)1基因工程的核心是()。a目的基因的获取b基因表达载体的构建c将目的基因导入受体细胞d目的基因的检测与鉴定解析目的基因构建表达载体后才能使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能发挥作用,只有构建表达载体后,才能根据载体上的标记基因鉴别目的基因是否导入了受体细胞,从而筛选出含目的基因的受体细胞,避免进行盲目的无效工作。答案b2下列选项中不是表达载体必要的组成成分的是()。a目的基因 b启动子c终止子 d抗青霉素基因解析a、b、c三项均为表达载体的必要的组成成分;具有标记基因也是表达载体必要的组分,但抗青霉素基因只是标记基因中的一种。答案d3将目的基因导入玉米茎尖分生区细胞和小鼠受精卵,应分别采用的方法是()。a显微注射法农杆菌转化法b基因枪法花粉管通道法c农杆菌转化法显微注射法d基因枪法显微注射法解析本题考查将目的基因导入受体细胞的方法,解题关键是理解针对不同受体细胞采取的不同方法。玉米是单子叶植物,对单子叶植物来说,常用的方法是基因枪法;对于动物细胞来说,常用的方法是显微注射法。答案d4下面甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法,下列说法中,错误的是()。a甲方法可建立该细菌的基因组文库b乙方法可建立该细菌的cdna文库c甲方法要以脱氧核苷酸为原料d乙方法需要逆转录酶参与解析甲方法是从细菌的dna中直接提取,故可以建立该细菌的基因组文库。乙方法是由mrna逆转录获得的目的基因,故可以建立该细菌的cdna文库。乙方法需要逆转录酶和脱氧核苷酸为原料。答案c5检测转基因生物染色体dna上是否插入了目的基因的常用方法是()。adna分子杂交技术 b荧光分子标记技术c放射性同位素标记技术 d显微注射技术解析检测目的基因常采用dna分子杂交技术,即在含有目的基因的dna片段上用放射性同位素进行标记,以此作为基因探针,并使基因探针与基因组dna杂交,若显示出杂交带,则表明目的基因已插入染色体dna中。答案a二、非选择题(共2小题,共20分)6(10分)在培育转基因植物的研究中,卡那霉素抗性基因(kanr)常作为标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答下面的问题。(1)a过程需要的酶有_。(2)b过程及其结果体现了质粒作为载体必须具备的两个条件是_。(3)c过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外,还必须加入_。(4)在d过程中,抗虫基因遗传信息的传递过程是_。(5)获取真核生物的基因常用的方法是_,包括_。(6)如果利用dna分子杂交原理对再生植物进行检测,d过程应该用_作为探针。(7)科学家在进行实验过程中,采用了两种方案:一是将抗虫基因导入离体的棉花叶片细胞进行植物组织培养;请你想另外一种方案:可以将抗虫基因导入植物的_中,再进行培养,导入成功的标志是_。解析(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒的过程需要同一种限制酶,连接时还需要dna连接酶。(2)作为基因工程的载体,必须具备三个条件:在宿主细胞中能稳定保存并能大量复制。有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个。有一定的标记基因,便于筛选。题目中能体现的是;(3)由题可知,我们需要的植株是含有抗虫基因的植株,因此要进行筛选,含有抗虫基因的植株也一定含有抗卡那霉素基因,所以要利用卡那霉素进行筛选。(4)抗虫基因最终要表现出抗虫的性状就必须表达,即通过转录和翻译来实现。(5)真核生物的基因的获取常用人工合成的方法,包括反转录法和化学合成法。(6)目的基因的检测最关键是看受体细胞是否含有目的基因,常用dna分子杂交技术,以已知目的基因片段作为探针,利用碱基互补配对原则进行检测。(7)将目的基因导入植物细胞,可以选用体细胞或受精卵,最后要进行个体水平检测,即看是否能抗虫。答案(1)限制酶和dna连接酶(2)具有标记基因;能在宿主细胞中复制并稳定保存(3)卡那霉素(4)抗虫基因转录成mrna,再翻译成为蛋白质(5)人工合成法反转录法、化学合成法(6)放射性同位素(或荧光分子)标记的抗虫基因(7)受精卵棉花有抗虫性状的表现7(10分)科学家从某细菌中提取抗盐基因,转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。如图是转基因抗盐烟草的培育过程,含目的基因的dna和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答下面的问题。(1)过程获得的抗盐基因可用pcr技术进行扩增,该技术须用_酶,所需的原料是_。(2)已知几种限制酶识别序列及其切割位点(如下表):限制酶bamhhind ecor sma 识别序列及切割位点)用图中的质粒和目的基因构建重组质粒,不能使用sma 酶切割,原因是_。图中过程为防止质粒和含目的基因的外源dna片段自身环化,应选用_酶对外源dna、质粒进行切割。(3)图中、依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的_、_过程。(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功,既要用放射性同位素标记的_作探针进行分子杂交检测,又要在个体水平上鉴定,后者具体过程是_。解析(1)pcr技术所需的原料是合成dna的四种脱氧核苷酸。根据pcr反应原理,每次循环可分为在95 时进行变性,在55 时进行复性,在72 时延伸,该过程需要耐热的dna聚合酶。(2)从图中信息可知,sma 酶的切割位点位于目的基因和m抗生素抗性基因上。分析抗盐基因的dna片段,可知该dna含四种限制酶切点,其中sma 位于目的基因上,不宜采用。ecor 位于目的基因两侧,若用ecor 切割则目的基因会自身环化。bamh 与hind 位于目的基因两端,且质粒中也有相应的适合的切割位点,因此用bamh和hind 才能完整地切下该抗盐基因,同时保证目的基因与质粒连接方式的唯一性,防止自身环化。(3)转基因后的植物细胞,经脱分化产生愈伤组织,经再分化形
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