（微生物与生化药学专业论文）红景天苷干预细胞衰老的分子机制及其防治骨质疏松活性的研究.pdf

独创性声明 j i | | i j l j | 嗍川l i | | 删 y 17 7 5 8 0 0 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者签名：吞格译签字日期：2 。p 年夕月母日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解蔓竖塞迹塑匡堂院有关保存、使用学位论文的管理 办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查 阅和借阅。本人授权j 蔓塞迹塑医堂暄可以将学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：易根祥 签字日期：力f 口年歹月年日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 导师弛芒电争。习 签字日期：2 。2 毋月f 日 电话： 邮编： 目录 中文摘要1 a b s t r a c t 3 缩略语6 第一部分红景天苷干预细胞衰老的机制研究9 前言：9 日青h 材料与方法13 实验结果2 4 一红景天苷对h 2 0 2 诱导的细胞衰老的干预作用及机制2 4 1 1 亚致死量h 2 0 2 诱导2 b s 细胞衰老模型的建立2 4 1 2 红景天苷对h 2 0 2 处理的2 b s 细胞活力及细胞形态的影响一2 4 1 3 红景天苷对h 2 0 2 处理的2 b s 细胞s a - p g a i 染色阳性率的影响2 6 1 4 红景天苷对h 2 0 2 处理的2 b s 细胞周期的影响2 8 1 5 红景天苷有效下调模型细胞内r o s 水平3 0 1 6 红景天苷对模型细胞t - s o d 活性及m d a 水平的影响3 1 1 7 红景天苷对衰老相关蛋白的影响3 2 1 8 红景天苷下调模型细胞内衰老相关蛋白表达与r o s 的关系3 5 二红景天苷对复制性细胞衰老的干预作用及机制3 5 2 1 红景天苷对不同代龄2 b s 细胞的促增殖作用3 6 2 2 红景天苷延缓2 b s 细胞的复制性衰老3 6 2 3 红景天苷对5 0 p d2 b s 细胞内r o s 影响3 8 2 4 红景天苷对5 0 p d2 b s 细胞t - s o d 活性及m d a 的影响3 9 2 5 红景天苷对5 0 p d2 b s 细胞衰老相关蛋白的影响4 0 2 6 红景天苷下调5 0 p d2 b s 细胞衰老相关蛋白与r o s 的关系4 2 2 7 红景天苷对5 0 p d2 b s 细胞线粒体增殖的影响4 4 2 8 红景天苷对5 0 p d2 b s 细胞s i r t u i n 蛋白的影响4 6 2 9s i r t l 抑制剂s i n i n o i 对红景天苷促进线粒体增殖活性的影响4 6 三红景天苷对力达霉素诱导的细胞衰老的干预作用及机制4 7 3 1 力达霉素对年轻2 b s 细胞的增殖抑制作用4 8 3 2 红景天苷对力达霉素增殖抑制作用的影响4 9 3 3 红景天苷对力达霉素处理的2 b s 细胞s a p g a l 染色阳性率的影响5 0 3 4 红景天苷对力达霉素处理的年轻2 b s 细胞周期的影响5 1 3 5 红景天苷对力达霉素引起的d n a 损伤水平的影响5 2 3 6 红景天苷对力达霉素引起的衰老相关蛋白变化的影响5 3 讨论5 5 参考文献6 2 第二部分红景天苷防治骨质疏松活性的研究7 2 前言7 2日吾，z 材料与方法7 4 实验结果8 1 1 大鼠成骨细胞( r o b ) 的鉴定8 1 2 红景天苷对大鼠成骨细胞成骨性标志物的影响8 1 3 红景天苷对人成骨样细胞m g 6 3 的增殖及碱性磷酸酶活性的影响8 4 4 红景天苷上调成骨细胞中b m p 2m r n a 表达水平8 6 5 红景天苷上调成骨细胞中b m p 2 蛋白表达水平8 6 6 红景天苷对n f k b 活性的影响8 7 7 红景天苷对去势雌鼠骨质疏松模型的作用8 8 讨论9 1 参考文献9 4 论文结论9 7 文献综述一9 8 个人简历110 附录1 1 3 致谢12 1 北京协和医学院博士学位论文 中文摘要 中文摘要 红景天( r h o d i o i a ) 为景天科红景天属多年生草本或亚灌木植物，是珍稀药用 植物之一，被誉为“高原人参”。大量实验研究和临床观察表明，红景天具有多种药 理活性，包括增加机体免疫力、刺激神经系统、抗应激反应、抗疲劳、抗缺氧等， 具有典型的“适应原样”作用。红景天苷是红景天的主要活性成分之一。本实验室先 前的研究表明红景天苷能有效延长果蝇寿命，有效下调d - 半乳糖诱导的衰老小鼠体 内晚期糖基化产物( a g e ) 水平，并显著改善小鼠的神经系统和免疫系统，展现出 良好的抗衰老效应。本研究中，我们采用氧化应激诱导的早熟性衰老模型、复制性 衰老及d n a 损伤诱导的细胞衰老模型，从细胞和分子水平进一步探讨了红景天苷 干预衰老的效应机制。 衰老的自由基学说是一个经典的衰老理论，研究表明红景天苷是一个抗氧化 剂，但其抗氧化活性与其干预衰老的作用尚缺乏直接的实验依据。我们首先应用亚 致死量的h 2 0 2 作用于年轻的2 b s 细胞( p d 2 8 ) 建立早熟性细胞衰老模型，同时 采用红景天苷进行干预，结果表明红景天苷能显著逆转h 2 0 2 诱导的衰老样改变， 包括细胞形态、s a p g a i 染色阳性率、g 1 期阻滞以及衰老相关蛋白p 5 3 、p 2 1 和 p 1 6 等的表达上调。红景天苷的这种保护作用具有一定的剂量依赖性，在5 i j m 剂量 下效果最佳。在该模型中，红景天苷的抗氧化活性也得到了证实，该化合物能显著 下调模型细胞内r o s 含量，5 u m 剂量下与2 m m 的n a c 效果相当，同时下调m d a 含量，对总s o d 活力及蛋白表达也有一定的上调作用。与此同时，采用复制衰老 性细胞衰老模型发现，红景天苷能显著延迟2 b s 细胞的复制性衰老，延长2 b s 细 胞代龄8 p d 左右，对衰老表型的影响与其在h 2 0 2 模型中的相似。进一步的实验表 明，在上述两个模型中采用n a c 对比研究发现，红景天苷降调节p 5 3 、p 2 1 部分 依赖于r o s 水平的下降，尚有r o s 非依赖机制。这可能的原因是红景天苷能直接 调节d n a 损伤修复的相关分子表达进而改变由此诱导的衰老样表型。为此，我们 采用一种具有强烈d n a 断裂活性的烯二炔类抗肿瘤抗生素力达霉素( 0 1n m ) 作用于年轻2 b s 细胞，在分子水平上，红景天苷能显著减少l d m 诱导的d n a 损 伤程度y h 2 a x 水平，并且依然能逆转l d m 引起的p 5 3 、p 2 1 表达上调；同时， 对力达霉素诱导年轻2 b s 细胞产生的衰老样表型也有一定的逆转作用。此外，我们 发现红景天苷能显著促进2 b s 细胞内线粒体的增殖，这可能是红景天苷发挥延缓衰 老作用的新机制，并且其效果与相同剂量的白藜芦醇相当，但其机制可能不同于白 藜芦醇，s i r t l 抑制剂并不能抑制红景天苷的促线粒体增殖效应。这些研究表明红 北京协和医学院博士学位论文中文摘要 景天苷具有良好的延缓衰老的效应，该效应一方面与其抗氧化活性相关，一方面也 与直接调节d n a 损伤修复相关。 此外，骨质疏松是一种常见的与增龄密切相关的代谢性骨病，通过改善骨质代 谢、增强成骨细胞的作用，最终达到恢复患者骨量水平为目的的治疗方案日益受到 人们的重视。骨形态形成因子2 ( 6 m p 2 ) 基因的表达对于成骨细胞活性及其分化有 着关键作用。我们通过一种以6 m p 2 为靶点的新型抗骨质疏松药物筛选模型发现， 红景天苷能有效上调小鼠颅骨细胞m c 3 t 3 e 1 中b m p 2 的表达效应，表明该化合 物可能具有一定的促骨形成能力。为证实红景天苷的这一效应，我们首先采用大鼠 成骨细胞( r o b ) 和人成骨样细胞m g 6 3 研究了红景天苷对成骨细胞的影响，测 定了红景天苷对成骨细胞增殖以及成骨性标志物碱性磷酸酶( a l p ) 和胶原合成的 影响；进而采用雌性大鼠去势模型，观察了红景天苷对绝经后骨质疏松症模型的作 用。体外研究表明，红景天苷作用于r o b 细胞后，能显著促进成骨性的骨形成： m t t 试验表明红景天苷促进细胞增殖达3 0 左右，a l p 活性测定表明经红景天苷 作用后其活性上调3 0 ，3 h 脯氨酸掺入试验表明红景天苷作用成骨细胞后其胶原 合成增加1 倍左右。在m g 6 3 细胞中我们观察到了相似的结果。此外，伦a i - t i m er t p c r 检测发现，m g 6 3 细胞内6 m p 2 的m r n a 表达水平在1u m 和5 i j m 的红景天 苷作用4 8 h 后上调接近1 倍：w b s t e mbj o t 结果表明红景天苷能剂量依赖和时间依 赖地上调r o b 和m g 6 3 细胞中的b m p 2 蛋白表达水平。体内实验结果表明红景天 苷能剂量依赖地抑制去势大鼠的骨量减少，与阳性药物雷洛昔芬效果相当，但对于 破骨细胞的活性则无显著的抑制作用，间接地说明了红景天苷增加骨量不是依赖于 抑制骨吸收而是促进成骨性的骨形成。这些结果显示了该化合物具有良好的防治骨 质疏松的应用前景。 综上所述，本研究结果表明，红景天苷在细胞水平上具有显著的延缓衰老的作 用，这一方面得益于红景天苷的抗氧化作用，能有效减少r o s 引起的损伤，另一 方面红景天苷本身可能具有促进d n a 损伤修复的功能，从而抑制p 5 3 p 2 1 衰老相 关信号通路的活化。并且，红景天苷具有显著的促线粒体增殖的效应，这可能是其 发挥延缓衰老作用的新机制。另外，红景天苷具有显著的上调6 卵2 的作用，能促 进成骨性的骨生成，具有良好的抗骨质疏松病的应用前景。 关键词：红景天苷、细胞衰老、氧化应激、b m p 2 、骨质疏松 2 北京协和医学院博士学位论文 英文摘要 a b s t r a c t f ：拍o d i ，0 a ，d s e al ，a i s 0k n o w na s “9 0 d e nr o o t ”，i sap o p u i a rp i a n ti nt r a d i t i o n a i m e d i c i n ei nc h i n aa n di sr e p u t a b i ef 6 ri m p r o v i n gd e p r e s s i o n ，e n h a n c i n gw o r k p er 1 0 r m a n c e ，e i i m i n a t i n gf a t i g u ea n dt r e a t i n gs y m p t o m so fa s t h e n i as u b s e q u e n t t 0i n t e n s ep h y s i c a ia n dp s y c h o i o g i c a is t r e s s d u et ot h e s et h e r a p e u t i cp r o p e r t i e s ， 尺，1 d s e ali sc o n s i d e r e dt ob e0 n eo ft h em o s ta c t i v ea d a p t o g e n i cd r u g s s a i i d r o s i d ea n do t h e rs a d r o s i d e i i k ec o m p o u n d sa r ec o n s i d e r e dt ob em o s t cr t i c a ip i a n tc o n s t i t u t e sn e e d e df 6 rt h em u i t i p l et h e r a p e u t i cb e n e f i t so f 尺，d s e al o u rp r e v i o u ss t u d yh a ss h o w nt h a ts a i i d r o s i d ei sa b i et 0e x t e n dt h e f es p a no f d r o s o p h i i aa n dp r o t e c tm o u s ea g a i n s ta g i n gi n d u c e db yd - g a i a c t o s e ，s h o w i n g c 0 n s i d e r a b i ea n t - a g i n ge 仟e c t h o w e v e r d i r e c td e m o n s t r a t i o nr e g a r d i n gt h er 0 i e o fs a l - d r o s i d ei na n t j - a g j n gp r o c e s s 仂w f ma n dr e i e v a n tm 0 i e c u i a rm e c h a n j s m si s s t d e f i c i e n t i nt h i ss t u d y ，w ef i r s ts e l e c t e dt h eh 2 0 2 i n d u c e dp r e m a t u r es e n e s c e n c e m o d e ii nh u m a nf e t a ii u n gd i p i o i df i b r o b i a s t s ( 2 b sc e s ) t oi n v e s t l g a t ew h e t h e r s a l d r o s i d ed i r e c t l yp r o t e c t st h ec e sa g a i n s ta g i n gf ny 圩ma n dt 0i u s t r a t et h e a s s o c i a t e dm o l e c u i a rm e c h a n i s m s w ef o u n dt h a ts a i i d r o s i d ec o n s i d e r a b l y r e v e r s e st h es e n e s c e n c e - l i k ep h e n o t y p e si nt h eo i d a n tc h a e n g e dm o d e i ，w h i c h i n c i u d em o r p h o i o g i c a ia l t e r a t j o n s ，g 1p h a s ea r r e s t ，p o s j t j v es 渔- p g a is t a ；n i n g ，a s w e a si n c r e a s eo fs e n e s c e n c e a s s o c i a t e dm 0 i e c u l e se x p r e s s i o ns u c ha sp 5 3 ， p 2 1a n dp 16 t h ep r o t e c t i o no c c u r si nat i g h t i yd o s e d e p e n d e n tm a n n e r ，w i t h5 u m0 f f er j n gb e s te f f i c a c yu n d e rm o s tc a s e s t h ep r o p o s e da n t j o x i d a n tp r o p e r t yo f t h ec o m p o u n dw a sc o n f i n l l e di nt h i sc e u l a r s y s t e m ， e v i d e n c e db yr o s s c a v e n g i n g ，m d ad e c r e a s i n ga sw e a st s o di n c r e a s i n ga c t i v i t y ，a n dt h u sa t j e a s tp a r t j a yi sa c c o u n t a b l ef o rt h ep r o t e c t i o n0 ft h ec o m p o u n da g a i n s tc e u i a r p r e m a t u r es e n e s c e n c e m e a n w h e ， s m i i a rp r o t e c t i o no fs a i i d r o s i d e a g a i n s t r e p l i c a t i v es e n e s c e n c em o d e lw a so b s e n ，e da sw e a n di tw a sa b i et 0i n c r e a s e c u m u i a t i v ep o p u i a t i o nd o u b i i n g s ( c p d s ) o f2 b sb ya tl e a s t8p d sb yt h e s u p p i e m e n t a t i o nt 0t h em e d i u mf r o me a r i yp d i n t e r e s t i n g l y ，t h er e g u l a t i o n0 f c o r r e s p o n d i n g m 0 i e c u i a rm a r k e r sb ys a d r 0 s i d ei n v o l v e s f t o s i n d e p e n d e n t m e c h a n i s m sw h e nc o m p a r e dw i t hn a ci na b o v et w om o d e l s o n ep o s s i b l “t yf o r s u c hp h e n o m e n ac o u i db et h a ts a i d r o s i d em a yd i r e c t i yr e g u l a t er l o s - i r r e i e v a n t 3 北京协和医学院博士学位论文 英文摘要 d i 、j ad a m a g es y s t e mt h a ti n i t i a t e st h ea s s o c i a t e dm 0 i e c u i a rc h a n g e s r e s u l t j n gi n s e n e s c e n c e i l k ep h e n o t y p e s t oc o n 们r mt h i s ，w eu s e d l i d a m y c i n ， ap o l e n t r a d i o m i m e l i ca n “一t u m o ra n t i b i o t i ca n d s e n e s c e n c ei n d u c e rt oi n d u c ed n a d a m a g j n gr e s p o n s ei n2 b sc e sa n dt e s tt h er e g u i a t i o n0 fs a i i d r 0 s i d ea c c o r d i n g i y s i m i i a r i y ，w eo b s e n ，e dt h ep r o t e c t i o no fs a d r o s j d e a g a i n s td n ad a m a g e r e s p o n s ea se v i d e n c e db yd o w n - r e g u i a t i o no fp 5 3p r o t e i na n dy h 2 a xf o c ia f t e r l i d a m y c i ne x p o s u r e a sa n t i c i p a l e d ，t h es e n e s c e n c e - l i k ep h e n o t y p e si n y o u n g 2 b si n d u c e db yl i d a m y c i na r ea l s op a r t i yr e v e r s e db yt h es a d r o s i d e m o r e o v e r ， s t i m u i a t i o n0 fm i t o c h o n d r i ab i o g e n e s i si sf o u n dt ob ea n o t h e rn o v e ip r o p e r t yo f t h ec o m p o u n d n o t a b i y ，t h es t i n l u l a t o 吖e f f e c t0 fs a i j d r o s i d eo nm i t o c h o n d r a i p r o f e r a t i o ni sc o m p a 阳b i et 0t h a t0 f 陀s v e 怕t r o i nl a t ep d2 b sc e s 。w h i i et h e m o d e0 fa c t i o nf o rt h i sc o m p o u n dm a yb ed j f f e 陀n tf r o mt h a t0 fr e s v e r a t r o i t h e s e f i n d i n g sp r e s e n ts a i i d r o s i d ea sa na t t r a c t i v ea n db i 0 一s a f ea g e n tw i t ht h ep o t e n t i a i t o陀t a r da g i n gp r o c e s sa n dm o 陀 i m p o r t a n t i y ，m a ya t t e n u a t ea g e r e i a l e d d i s e a s e si nh u m a n s i na n o t h e rp a n0 fw o n ( ，w es t u d i e dt h ep r o t e c t j v er o i e0 fs a l i d r o s i d ea g a i n s t o s t e o p o r o s i s m a n y0 b s e n ，a t i o n sc i e a r l yi n d i c a t et h eh i g hp o t e n c y0 fb m p 2a sa n i n d u c e ro fo s t e o g e n e s i sw h i c hc o n t r i b u t e st ob ean o v e it h e r a p e u t i ct a r g e tf 6 r d j s e a s e sa s s o c i a t e d w i t hb o n e l o s s ， e s p e c i a y i n m e n o p a u s a ia n d p o s t m e n o p a u s a lw o m e n ac o n s i d e r a b i eu p - r e g u l a t i o no f6 ，7 7 p 2e x p r e s s i o nb y s a l i d r o s i d ei s0 b s e r v e di nah i g h t h r o u g h p u ts c r e e n l n gm o d e ii nw h i c ha 们r e f i y i u c i f e r a s e n e p o r t e rg e n ed r i v e nb yi h em o u s e6 门? p 2p r o m o t e rh a sb e e n t 陷n s f e c t e dt oc i o n a im u r i n ec a i v a r i a im c 3 t 3 e 1 c e i i s 。w hi c hi n d j c a t e st h e p o s s i b i es t i m u i a t 0 呵e 仟e c t0 nb o n ef 6 r m a t i o n0 ft h i sc o n l p o u n d 。r oc 0 n f i r mt h i s e 竹i e c t ，r a to s t e o b i a s t s ( r o b ) a n dh u m a no s t e o b l a s t 1 i k em g 6 3c e sa sw e a sa n o v a r i e c t o m i z e d o s t e o p o r o s j s ( 0 v x o p ) 陷tm o d e lw e r eu s e d r e s u i t si nr o b i n d i c a t e t h a ts a d r o s i d ei n c r e a s e st h eo s t e o b i a s t v i a b j t y ， t h ea i k a n e p h o s p h a t a s e ( a l p ) a c t i v i t ya n db o n ec o a g e ns y n t h e s i sb ya b o u t1 3 ，1 3a n d1 9 f 0 i d ，r e s p e c t j v e i y s i m a r 他s u i t sw e 陀a i s oo b s e n ，e di nm g 6 3c e s b e s i d e s t h e b m p 2e x p r e s s i o na lb o t hm r n aa n dp r o t e i ni e v e ii s s i g n i f l c a n t i ye i e v a t e di n r e s p o n s et 0s a d r o s i d ei nr o ba n dm g 6 3c e sd e t e c t e db yr e a | t i m ep c ra s w e a sw e s t e mb 1 0 t a n a i y s i s ， 陀p e c t i v e i y f u r t h e r m o 他， o u r ，仃w y 0d a 绍 d e m o n s t r a t e st h a is a d r o s i d e s i g n i 们c a n t i y r e v e r s e st h eb o n ei o s si n o v a r i e c t o m i z e dr a t s 。w h i c hi sc 0 m p a r a b i et 0t h a t0 fr a l o x i f e n e ，ac i i n i c a id r u gf o r 4 北京协和医学院博士学位论文 英文摘要 p r e v e n t i o na n dt h e r a p yi nm e n o p a u s a la n dp o s t m e n o p a u s a lw o m e n i n t e r e s t i n g l y ， s a i i d r o s i d ei so b s e r v e dt om i i d l yi n h i b tt h ea c t i v i t yo fo s t e o c l a s t sa ti o w e rd o s e s r a t h e rt h a nh i g h e rd o s e s ，w h i c hw a sd i f r e r e n tf r o mt h a t0 fr a i o i f b n e t h i sf i n d i n g j n d i c a t e si n d j r e c t i yt h a ts a l i d r o s i d ee i e v a t e dt h eb o n em a s sj n0 v ar i e c t o m i z e dr a t s m a i n l yd u et oi t ss t i m u i a t o r ye f f e c to nb o n ef o r m a t i o nr a t h e rt h a nt h ei n h b i t i o no f b o n er e s o r p t i o n i nc 0 n c l u s i o n ，s a i i d r o s i d ei sap o t e n tb m p 2a c t i v a t o rt h a t s t l r n u i a t e sb o n ef b r m a t i o na n dt h u sc o u i db eap o t e n t i a ia n t i o s t e o p o r o s i sd r u g 1 a k e nt o g e t h e r ，0 u rw o r kp r o v i d ee v i d e n c e ss u p p o r t i n gt h a ts a l i d r o s i d e ，a n a c t i v ec o m p o n e n t0 f 尺，d s e a 厶e x t r a c t st h a th a sb e e ng e n e r a yr e c o g n i z e da s b i 0 一s a f e ，e x e r t sp r o t e c t i v ee 仟e c t sa g a i n s tc e i i u i a rs e n e s c e n c ei nr p l i c a t i v ea n d s t e s s - 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t 0 i d j m e t h y is u l f b x i d e e t h i d i u mb r o m j d e e t h y i e n e d i a m i n et e t r a a c e t i ca c i d f l o wc y t o m e t r i ca n a i y s i s 订u o r e s c e i ni s o t h i 0 c y a n a t e f 0 n a r ds c a t t e r g l u t a t h i o n e h 2 d c f d a2 。，7 一d i c h l o r o d i h y d r o 们u o r e s c e i nd i a c e t a t e h e p e s h r p i c 卯 l d m k d n - ( 2 - h y dr o x y e t h y l ) p i p e r a z i n e n 一( 2 e t h a n e s u l f 6 n i ca c i d ) h o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e 5 0 i n h b i t o r yc o n c e n t 旧t j o n l i d a m y c i n k o d a l t o n 6 中文全称 人胚肺二倍体成纤 维细胞 碱性磷酸酶 骨形态形成因子2 牛血清白蛋白 细胞周期依赖激酶 周期蛋白依赖性激 酶抑制剂 热量限制 累计倍增次数 二硫苏糖醇 二甲亚砜 溴化乙锭 乙二胺四乙酸 流式细胞术分析 异硫氰酸荧光素 前向角散色光 谷胱甘肽 双氯荧光黄乙酸乙 酯 n 2 羟乙基哌吲 n 2 乙磺酸 辣根过氧化物酶 半数抑制浓度 力达霉素 千道尔顿 北京协和医学院博士堂竺笙奎一堑堕塑二 二。1 一一 m a p k m d a m t t n a c n a o o b o c o p p a g e p b s p d p i p m s f p v d f r b r e s r o b r o s s a l m i t o g e n - a c t i v a t e dp r o t e l nk i n a s e m a i e i cd l a i d e h y d e 3 ( 4 ，5 一d i m e t h y l t h i a z o i e 一2 一y i ) 一2 ，5 一d j p h e n p h e n y it e t r a z 0 u m n - a c e t y i - l c y s t e i n e a c r i d l n e0 r a n g e10 - n o n y ib r o m i d e 0 s t e o b i a s t o s t e o c i a s t o s t e o p o r o s i s p o l y a c 吖l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s p h o s p h a t eb u 仟e r e ds a n e p 0 p u i a t i o nd o u b n g p r o p i d i u mi o d i d e p h e n y l m e t h a n e s u l f o n y lf l u o r l d e p o i y v i n y l i d e n ed m u o r d e r e t l n o b l a s t o m a r e s v e r a t r o i r a to s t e o b l a s t r e a c t i v e0 x y g e ns p e c i e s s a l d r o s i d e s a p g a i s e n e c e n c e - a s s o c i a t e df - g a i a c t o s i d a s e s d s s s c s o d s o d l u md o d e c y ls u i p h a t e s i d es c a t t e r s u p e r o s i d ed i s m u t a s e 7 有丝分裂原激活蛋 白激酶 丙二醛 四甲基偶氮唑蓝 n 乙酰半胱氨酸 1 0 壬基吖啶橙溴 化物 成骨细胞 破骨细胞 骨质疏松症 聚丙烯酰胺凝胶电 泳 磷酸盐缓冲液 群体倍增 碘化丙啶 苯甲基磺酰氟 聚偏二氟乙烯 视网膜神经胶质瘤 肿瘤抑制蛋白 白藜芦醇 大鼠成骨细胞 活性氧自由基 红景天苷 衰老相关的i | b - 半乳 糖苷酶 十二烷基磺酸钠 侧向角散色光 超氧化物歧化酶 北京协和医学院博士学位论文 缩略语 t b a t h b a b 1 u r i ca c i d 硫代巴比妥酸 t b s tt r i s - b u 仟e r e ds a | i n e - w e e n 吐温t r i s 盐缓冲液 t e m e d n ，n ，n 。，n 一t e t r a m e t h y i e t h y i e n e d i a m四甲基乙二胺 t r i s t r i s h y d r o ) ( y m e l h y i a m i n o m e t h a n e 三羟甲基氨基甲烷 5 溴4 一氯- 3 一吲哚 x - g a i 5 一b r o m o - 4 一c h i o r o 一3 - i n d o i y l - j b - d - g a i a c t o s i d e。 d 半乳糖苷 8 北京协和医学院博士学位论文 第一部分前言 第一部分红景天苷干预细胞衰老的机制研究 - - - 刖舌 进入2 1 世纪后，人类面临人口老龄化的严峻挑战，据中国老龄委办公室2 0 0 6 年2 月2 3 日发布的中国人口老龄化发展趋势预测研究报告：从