Customer病毒去除培训课件

病毒过滤病毒灭活

病毒吸附

法规方面内容概要Seite1Customer病毒去除1/22/2025内容概要VirusFiltrationVirusInactivation

VirusAdsorption

法规方面Seite2Customer病毒去除1/22/2025检测原料血浆(献血者监控,检测/生产监控)生物工程(原料,细胞系,基因稳定性)哺乳动物细胞(细胞来源跟踪监控)验证病毒去除工艺病毒防护,病毒数降低程度,交叉污染控制检测成品法规:安全策略PaulEhrlichInstituteSeite3Customer病毒去除1/22/2025病毒去除–

用户方面-

用户须形成完备的病毒去除观念综合采用病毒灭活和病毒分离截留的方法

缺少相关的内源和外源病毒样品

法规要求病毒去除率应在12to20log10

至少使用两种病毒去除方法

至少有一种方法是针对无包膜的小病毒CPMP/ICH/295/95:NoteforGuidanceonQualityofBiotechnologicalProducts.“ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin.October1997”Seite4Customer病毒去除1/22/2025病毒污染-污染机会-

病毒颗粒和相关病毒

潜在的污染-病毒意外污染-

细胞系源于被病毒侵染的动物

操作处理中污染

污染的试剂ICHQ5A:ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin,1997Seite5Customer病毒去除1/22/2025病毒去除–

工艺总结-病毒去除病毒灭活病毒灭活纳滤15nmto75nm热灭活

溶液加热灭活

干热灭活

蒸汽灭活光照灭活

射线紫外

微波分离法

层析

乙醇抽提

其他沉淀方法化学灭活

溶煤

去垢剂

化学试剂pH病毒裂解

高压循环

超临界流体Seite6Customer病毒去除1/22/2025病毒去除–主要供应商-病毒过滤

Asahi病毒吸附

Pall

Millipore

GEHealthcare

Merck

Biorad病毒灭活

GEHealthcare

NewYorkBloodcenterpatent

Sartorius

提供全部技术Seite7Customer病毒去除1/22/2025完整的病毒去除平台成品灌装亲和层析柱或其他纯化步骤病毒截留滤芯

抛弃型滤器

病毒去除

针对所有病毒紫外灭活

抛弃型紫外灭活装置

病毒灭活

针对非包膜小病毒膜吸附抛弃型层析装置病毒吸附

针对所有病毒

还可去除HCP,DNA/RNA和内毒素Seite8Customer病毒去除1/22/2025内容概要病毒截留过滤VirusInactivation

VirusAdsorption

RegulatoryAspects

Seite9Customer病毒去除1/22/2025Virosart®CPV–病毒截留过滤器-膜材质为聚醚砜典型病毒截留率PPV或PP7(约20nm粒径)，LRV>4PR772(约50nm粒径)，LRV>6完整性测试使用水(4.5bar@max22ml/min/10”)Sartopore0,1µm作为预过滤蒸汽或高压灭菌Seite10Customer病毒去除1/22/2025病毒去除至少3-4log，并且蛋白收率>95%相关的特定和非特定的标准病毒去除特性料液情况(大分子蛋白，宿主细胞，ＤＮＡ等)病毒截留滤器在工艺中的位置

挑战性物质(细胞碎片，宿主细胞等)具有可放大性病毒截留滤器应验证考察的方面Seite11Customer病毒去除1/22/2025CPV上表面CPV下表面0,2µm和CPV膜电镜对比0,2µm膜上表面0,2µm膜下表面Seite12Customer病毒去除1/22/2025VirosartCPV挑战实验，料液为2%BSA，PBSpH6,9病毒粒径nm核酸型包膜Log10TCID50/ml料液体积[ml]LRVPPV18-25ss-DNANo8.1506,0Reo-360-80ds-RNANo8.8507.9HAV27-32ss-RNANo5.6505.4BVDV40-70ss-RNAYes7.150>5.9SV-4042ds-DNAYes7.6506.3MuLV80-110ss-RNAYes7.850>6.2DatadeterminedbyAnalysisGmbHKöln,Germany2004Seite13Customer病毒去除1/22/2025Virosart®CPV–

产品线-5cm²抛弃型Virosart®CPVMinisart®20cm²抛弃型Virosart®CPVMidisart®150cm²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器

0.7m²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器1.4m²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器2.1m²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器Seite14Customer病毒去除1/22/2025Analysis

Dr.AndreasImmelmannBiomedizinischeTestGmbHGottfriedHagen-Strasse62D51105KölnGermanyPhone:+49-221-346-1800Fax:+49-221-346-1801德国独立的病毒实验室NewLabBioQualityAG

Dr.KlausKellingsMaxPlanck-Srasse15AD40699ErkrathGermanyPhone:+49-211-92-55-300Fax:+49-211-92-55-333Seite15Customer病毒去除1/22/2025Virosart®CPV–

文件-Virosart®CPVlaunchpackageSeite16Customer病毒去除1/22/2025Virosart®CPV–

完整的文件-文件货号产品手册85030-521-89产品信息85030-522-03操作手册SPK6520-e05021验证指南85030-522-02病毒信息指南85030-521-91Seite17Customer病毒去除1/22/2025Virosart®CPV–标准滤芯订货信息-产品货号Virosart®CPV10”

滤芯5452528V1Virosart®CPV20”

滤芯5452528V2Virosart®CPV30”

滤芯5452528V3Seite18Customer病毒去除1/22/2025Virosart®CPV–囊式滤器定货信息-产品货号Virosart®CPV10”MaxiCaps®5452528V1--SSVirosart®CPV20”MaxiCaps®5452528V2--SSVirosart®CPV30”MaxiCaps®5452528V3--SSSeite19Customer病毒去除1/22/2025内容概要VirusFiltration病毒紫外灭活

VirusAdsorption

RegulatoryAspects

Seite20Customer病毒去除1/22/2025紫外灭活自1940s紫外灭活病毒方法已经被证实有效WolfAM,MasonJ,etal.(1947).Ultravioletirradiationofhumanplasmatocontrolhomologousserumjaundice.JAMA135:476-477.最新的研究已经确认紫外法是一种有效的病毒灭活方法HartH,ReidK&HartW(1993).Inactivationofvirusesduringultravioletlighttreatmentofhumanintravenousimmunoglobulinandalbumin.VoxSang.64:82–88ChinS,JinR,etal.(1997).VirucidaltreatmentofbloodproteinproductswithUVCradiation.Photochem.Photobiol.65:432–435WangJ,MauserA,ChaoSF,RemingtonK,TreckmannR,KaiserK,PifatD,HottaJ.Virusinactivationandproteinrecoveryinanovelultraviolet-Creactor.VoxSang.2004May;86(4):230-8.Seite21Customer病毒去除1/22/2025紫外灭活技术X-raysUltravioletLightVisibleLightInfrared780400315280200100Hglowpressurelamp254nmSpectralcurveofDNA/RNAdamageWavelength[nm]UVCUVBUVAVacuumUV破坏病毒的DNA/RNASeite22Customer病毒去除1/22/2025DeanVortices迪恩涡技术优化病毒灭活工艺DeanVorticeslightintensitydepthofpenetrationMinimisedresidencetimes;controlledmixing&withinlaminarflowbydeanvorticesSeite23Customer病毒去除1/22/2025紫外灭活病毒保留时间00,511,52相对保留时间病毒／蛋白量一般反应装置带有环状帽损伤蛋白区域低病毒灭活区域Seite24Customer病毒去除1/22/2025特氟龙螺旋管紫外灯石英玻璃管内部凸缘紫外灭活装置结构Seite25Customer病毒去除1/22/2025不同规模的紫外病毒灭活装置2to20l/h20to150l/h小试规模生产规模Seite26Customer病毒去除1/22/2025紫外病毒灭活装置验证方面参数MuLVBVDVReo-3HAVPPV单抗收率*包膜YesYesNoNoNo-核酸类型RNARNARNARNADNA-LRVat50J/m²4,35,736,81>4,73>6,5297%LRVat38J/m²3,33,852,562,923,1698%LRVat30J/m²3,33,402,033,043,4098%DatadeterminedbyAnalysisGmbH,Germany2004Seite27Customer病毒去除1/22/2025病毒灭活：蛋白完整性研究*紫外光照能量(J/cm²)单体a活性a%单体%收率

mg/ml%收率0.00077.09100%4.98100%0.00976.94100%4.9299%0.02477.00100%4.8998%0.04976.6499%4.8698%0.07276.3799%4.7896%0.14475.1397%4.8197%0.28871.9193%4.4690%0.43169.4390%4.3287%(aaverageoftriplicatesamples)*WangJ,MauserA,ChaoSF,RemingtonK,TreckmannR,KaiserK,PifatD,HottaJ.Virusinactivationandproteinrecoveryinanovelultraviolet-Creactor.VoxSang.2004May;86(4):230-8.Seite28Customer病毒去除1/22/2025病毒灭活:蛋白确认研究光照处理ＣＨＯ抗体(2mg/mlPBS缓冲液)侵染法检测PPV病毒去除log10

值

>4log10PPV

抗体性质研究(二维凝胶电泳,Maldi-Toff)

紫外光照处理

未进行紫外光照处理Seite29Customer病毒去除1/22/2025

赛多利斯公司与用户进行研发和临床前研究研究紫外光照对目标蛋白的影响

在赛多利斯公司或用户处进行单体活性裂解理化分析SDS电泳,HPLC,二维凝胶电泳...

赛多利斯公司与用户进行临床研究1st

生产Ｉ期临床样品前进行病毒挑战研究

2nd

生产III期临床样品前进行病毒挑战研究病毒灭活研究Seite30Customer病毒去除1/22/2025内容概要VirusFiltrationVirusInactivation

病毒吸附

RegulatoryAspects

Seite31Customer病毒去除1/22/2025膜层析技术:基本原理膜层析产品与颗粒胶电镜照片对比Seite32Customer病毒去除1/22/2025孔径–颗粒胶与层析膜对比-颗粒胶颗粒胶粒径分布为：15-160µm孔径分布为：15-40nm层析膜高开孔结构孔径：250-3000nmSeite33Customer病毒去除1/22/2025膜层析技术:基本原理“不是过滤膜”开放孔结构>3µm低压力降单纯的对流传质扩散效应最小化应用于去除：宿主细胞蛋白，DNA，内毒素和病毒膜层析产品与颗粒胶电镜照片对比Seite34Customer病毒去除1/22/2025病毒去除至少3-4log，并且蛋白收率>95%相关的特定和非特定的标准病毒去除特性物质平衡和独立的吸附机制具有可放大性膜层析系统应验证考察的方面Seite35Customer病毒去除1/22/2025层析膜形成层析床单张层析膜厚度0.275mm最多60层叠加形成16mm厚柱床36cm²

膜面积=1ml床体积=30mg载量Seite36Customer病毒去除1/22/2025膜床体积： 1µl到2.1ml

载量：30µg到60mg

抛弃型技术

捕获，精致和病毒去除

膜层析–抛弃型实验室规模产品-Seite37Customer病毒去除1/22/2025膜层析–生产规模抛弃型产品-

膜床体积： 7ml到530ml

载量：0.2到16g抛弃型技术捕获，精致和病毒去除

Seite38Customer病毒去除1/22/2025膜层析–可重复使用产品-

膜床体积： 35ml到2.130ml

载量：1到64g

反复使用技术

捕获和精制Seite39Customer病毒去除1/22/2025膜层析去除病毒病毒粒径(nm)包膜SartobindQ去除因子(log10)

Run1SartobindQ去除因子(log10)Run2SV-40:SimianVirus-4045no1.25

0.461.34

0.43Reo-3:ReovirusTypeIII75-80no4.07

0.503.62

0.42MuLV:MurineLeukemiaVirus80-110yes3.80

0.394.40

0.56PRV:Pseudorabiesvirus150-250yes3.97

0.443.88

0.38Galliher,P.,Fowler,E.,MillenniumPharmaceuticalsInc.),“ValidationofImpurityRemovalbythe

CMAPATH-1HBiomanufacturingProcess”IBC’sBiopharmaceuticalProductionWeek,ParadisePointResort–SanDiego,CA,November12-15,2001Seite40Customer病毒去除1/22/2025膜层析去除病毒病毒粒径(nm)包膜SartobindQ去除因子(log10)

Run1SartobindQ去除因子(log10)Run2MMV:MinuteMouseVirus16-25no6.67

0.244.41

0.37Reo-3:ReovirusTypeIII75-80no7.28

0.307.53

0.29MuLV:MurineLeukemiaVirus80-110yes5.57

0.256.29

0.32PRV:Pseudorabiesvirus