牛活体采卵技术规程编制说明

《牛活体采卵技术规程》编制说明基本情况任务来源2024年3月，由西北农林科技大学向陕西省市场监督管理局提出《牛活体采卵技术规程》地方标准制定工作的立项申请，2024年5月11日，根据陕西省市场监督管理局同意立项，并下达相关文件（陕市监函〔2024〕590号）及项目编号（SDBXM102-2024），批准标准的制订。项目组在“良种奶牛性控胚胎生产关键技术攻关与种质核心群建设”（省级国有资本经营预算科技创新专项，陕西省国资委）、“奶牛良种活体采卵-体外胚胎生产和胚胎移植技术研究”（宁夏农业关键核心技术攻关项目，宁夏农业农村厅）、“良种奶牛繁育技术创新与种质核心群建设”（陕西省畜禽育种“两链”融合重点专项）和“现代奶牛良种扩群高效繁殖技术研究集成与试验示范”（陕西省农业科技创新驱动项目）的项目支撑下，开展相关研究与实际工作，并结合我省奶牛养殖和种业的发展现状与目标方向，起草制定《牛活体采卵技术规程》。起草单位西北农林科技大学。协作单位杨凌秾福农牧科技服务有限公司和陕西省畜牧产业试验示范中心。起草组组成成员及其所做的主要工作林鹏飞教授，西北农林科技大学动物医学院，标准的起草、审核、验证。靳亚平教授，西北农林科技大学动物医学院，标准的起草、审核、验证。王勇胜教授，西北农林科技大学动物医学院，标准的起草、审核、验证。肖劲邦博士，西北农林科技大学动物医学院，供体牛卵巢刺激与活体采卵技术的研发与试验。李赫强博士，西北农林科技大学动物医学院，供体牛卵巢刺激与活体采卵技术的研发与试验。谢成运博士，西北农林科技大学动物医学院，供体牛卵巢刺激与活体采卵技术的研发与试验。田满园硕士，西北农林科技大学动物医学院，供体牛筛选与饲养管理的研发与试验。王炳科博士，西北农林科技大学动物医学院/杨凌秾福农牧科技服务有限公司，供体牛筛选与饲养管理的研发与试验。肖红年站长，陕西省畜牧陕西省畜牧产业试验示范中心，标准的验证。贾永宏主任，陕西省畜牧陕西省畜牧产业试验示范中心，标准的验证。标准编制的目的和意义奶业是健康中国、强壮民族不可或缺的产业，奶业发展关乎人民健康、实体经济高质量发展、稳定扩大消费和乡村振兴。同样，奶牛业是陕西畜牧业的优势和支柱产业之一，拥有国内最早的奶牛育种中心，曾在国内种公牛和优秀奶牛繁育等方面处于国内领先地位，但近年来奶牛场个体良莠不齐、繁殖率低，奶牛良种化水平几乎成为制约我省乃至全国奶牛业转型升级的瓶颈因素。奶牛先进的高效育种生物技术体系——活体采卵（OPU）-体外受精（IVF）-胚胎移植（ET），因具有高效、安全、危害小的优势，目前正逐渐取代体内胚胎生产技术，成为全球奶牛良种扩繁的主要技术手段，同时也是我国真正实现奶牛良种自主独立育种，进而推进“奶业振兴”的重要手段。选取有价值的供体牛，实施规范的OPU操作和提高获得的卵母细胞质量与数量，是提高该技术体系效率的重要保障。但我国奶牛OPU技术工作起步较晚，省内乃至国内大部分相关企业、牧场对该技术较为陌生，且与成熟国家相比，生产效率仍存在一定进步空间。因此，本规程依据国家相关法律和规范，结合我省实际和国内外相关技术研究与应用成果，旨在提供和规范牛OPU操作方法及其前期处理流程，制订符合我省实际、可操作性强的牛OPU技术规程，能够为OPU-IVF-ET技术体系的推广和克隆技术在奶牛育种上的应用提供规范指导，提高良种奶牛快速扩繁的效率、全面提升奶牛场繁殖管理水平，促进我省奶牛业高质量发展重要价值。主要工作过程（1）标准调研、验证、起草阶段（2024年6月1日—2024年11月30日）首先，根据项目组依托各项目支持在陕西、甘肃和宁夏地区多个实践基地长期持续开展的良种奶牛快速扩繁工作，对前期工作经验、试验结果和科研成果进行了总结归纳，初步明确了开展牛OPU工作所需的基本要求、供体牛筛选标准、供体牛饲养管理、卵巢刺激程序和OPU标准化操作流程。另外，在标准制定前期，标准标准编制组通过专题研究，进行广泛的调查，翻阅国内外相关资料及行业最新动态，收集并学习了DB21T3493-2021牛体外受精胚胎生产及非手术法移植操作规程、DB53T447.5-2012BMY牛第5部分：体外胚胎生产技术规范、GBT26938-2011牛体外胚胎生产技术规程和T/DACS002-2021荷斯坦牛体型鉴定操作技术规范等，为后期规范技术指标的制定提供了依据。试验验证：①2021年-2024年，标准编制组团队先后在宁夏兴源达农牧有限公司、宁夏沃野牧丰农牧股份有限公司优质后备牛繁育基地、甘肃祁牧乳业和陕西草滩牧业建立“校-地-企”合作实践基地，持续开展了基于OPU-IVF-ET技术体系的良种奶牛快速扩繁工作，截至目前共生产良种奶牛体外胚胎9000余枚，移植受体超6000头，诞生良种后代近600头。稳定实施OPU超2000次。各实践基地建设初期，均进行了牛OPU室的设计规划与建设改进，满足了OPU所需的场地、设施、设备和实际耗材等要求。②在各个牧场共累计开展了3万头规模奶牛群良种供体牛的筛选工作，具体包括：评估奶牛历史生产性能信息超10万条、评估DHI数据超5万条、实施线性鉴定超2万头次、送检并分析全基因组数据超500份和累计筛选良种供体奶牛约1500头，总结了筛选准确、评估完善、临床可行的供体牛筛选与饲养管理方案，并建议牧场在育种上应注重优选优育，并共同考虑奶产量因素与线性鉴定结果。③对供体奶牛实施超过2000头次的卵巢刺激程序-OPU工作，总结了高效、稳定、临床操作简便的卵巢刺激程序和标准化牛OPU工作流程，实现每头牛单次卵巢刺激获得30-40个可见卵泡，OPU获得可用卵母细胞25-30枚，其中优质卵母细胞达75%以上，囊胚率达40%以上，最终得到可用胚胎4-5枚，各项关键指标均处于国际先进水平；此外，对整体牛OPU技术流程进行了牧场适应性地调整优化，能够配合牧场日常管理，利于该技术体系在我国深度、广泛推广。④经过上述的试验、验证等阶段，形成了完整的牛活体采卵技术规程，其科学、合理，可操作性强，并取得了良好效果。在充分调研和分析总结的基础上，编制组经过3次会议确定标准的各项内容，起草本规范草案稿，完成标准初稿。（2）标准征求意见阶段（2024年12月1日—2024年12月30日）标准初稿完成后，经过内部讨论修改后，上报陕西省市场监督管理局，申请广泛征求了行业专家及相关单位的意见，并根据反馈意见修改和完善，于2024年12月30日前形成标准送审稿。（3）标准审查阶段（2025年1月1日—2025年2月30日）拟定于2024年1月份召开标准审查会，根据审查组专家意见修改和进一步完善，在此基础上，项目组完成标准报批稿，上报陕西省市场监督管理局审查。标准编制原则和确定标准主要内容编制原则本标准的编制遵循“先进性、实用性、统一性、规范性”的原则，注重突出技术性、可操作性，严格依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。主要内容本标准主要包括以下5个部分：（1）范围（2）规范性引用文件（3）术语和定义（4）采卵室基本要求（5）供体牛筛选与饲养管理（6）供体牛卵巢刺激前评估（7）供体牛卵巢刺激程序（8）OPU操作（9）卵母细胞分级鉴定与有关的现行法律、法规和强制性（国家、行业、地方）标准的关系本标准符合现行的法律、法规和强制性（国家、行业、地方）标准要求。本标准与现行法律、法规和强制性标准没有冲突。知识产权说明：标准涉及的相关知识产权说明本标准涉及自主知识产权转化，其涉及专利信息如下：专利类型：发明专利专利名称：一种奶牛的精细化卵巢刺激方案及其应用专利权人:西北农林科技大学专利申请号：202410739083.X专利进入实质审查阶段时间：2024年09月24日采标情况：采用国际标准和国外先进标准的程度或与国内同类标准水平的比较牛活体采卵的技术标准较为空白，可对比的行业标准仅有20214574-T-326牛体外胚胎生产和移植技术规程、DB21T3493-2021牛体外受精胚胎生产及非手术法移植技术操作规程、DB53T447.5-2012BMY牛第5部分：体外胚胎生产技术规范等。但本规程与现有标准存在以下主要区别：①本规程为供体牛的筛选提供了标准和参考依据，目的是严格把控OPU的实施对象，真正优选出具有优良遗传资源的供体母牛；②本规程重点规范了OPU必要的前期处理-卵巢刺激的程序和实施细节，为显著提高OPU获得的卵母细胞质量、数量以及后续体外培养的囊胚率提供保障。）本标准参考了现有标准GB/T26938-2011牛胚胎生产技术规程和T/DACS002-2021荷斯坦牛体型鉴定操作技术规范，已在标准中注明。重大意见分歧的处理：包括处理过程、依据和结果本标准在编写过程中没有重大意见分歧。实施表现本标准的措施建议技术措施要求应用本标准的奶