检验科糖化血红蛋白测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-048版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第4页共4页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01糖化血红蛋白测定标准操作规程1检验申请糖化血红蛋白（HbA1c）测定2

标本采集与处理2.1

标本采集2.1.1

常规静脉采血约2ml，EDTA二钾抗凝，置于专用的真空采血管。2.1.2

检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3

急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4

标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5

下列标本为不合格标本2.1.5.1

标本量不足：少于1.0ml的全血标本。2.1.5.2

无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.3

其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.1.5.4

标本凝固。2.2

标本保存2.2.1

接收标本后无须分离出血清，用全血测定。2.2.2

标本保存时间：普通冰箱中（2～8℃）稳定5天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3

已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3

标本采集的注意事项2.3.1

采血前使受检者一般不需准备。2.3.2

必须使用抗凝血，推荐的抗凝剂是EDTA二钾。3、方法原理糖化血红蛋白检测使用高压液相色谱原理（HPLC）。一个双活塞，低脉冲HPLC泵和一个成比例的阀门来输送缓冲液到分析柱和监测器中。一个程序化的增强离子强度的缓冲液梯度来输送样本到分析柱，由于各种糖化血红蛋白组分所带的电荷不同，在不同离子强度洗脱液的梯度洗脱下，糖化血红蛋白被分离。被分离的血红蛋白然后通过过滤器光度计，415nm吸光度的改变计算出其百分浓度。4

试剂及其他用品4.1

试剂：爱科来公司配套试剂盒。4.2

试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓内稳定30天。质控品、校准品放2-8℃保存。4.3

试剂盒准备：即开即用，无特殊准备。5

校准品与校准模式5.1

校准品：与试剂盒配套的校准液，其浓度可溯源至美国糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）标准参考材料。5.2

校准类型和校准点数目：线性模式，2个校准点。5.3

校准周期：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4

校准液重建方法：用7毫升的校正稀释液溶解血红蛋白校准液。6

质控品与室内质控规则6.1

质控品采用由BIO-RAD公司提供的两个不同水平定值质控血清。6.2

质控液重建方法：干粉质控，加0.5ml蒸馏水到质控液中,充分溶解后轻轻混匀后5ul分装-20℃保存期。6.3质控品测定：每星期一或更换试剂批号、仪器重大维护后测定质控,每支加650ul的H液，完全溶血后放黄色架上做。6.4

质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5

如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7

适用仪器适用HA-8160糖化血红蛋白检测系统。8

标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9

主要分析参数分析仪器配套的原装试剂，可采用仪器提供的分析参数直接使用。10结果计算仪器根据校准曲线自动计算出样本的结果。11

检验结果的报告及范围11.1

结果的报告11.1.1

结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2

报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3

如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2

报告范围：2.0～18.5%，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12

操作性能12.1

精密度：变异系数批内为0.5-1.0%；批间为1.65-2.66%左右。12.2

方法的有限性及干扰因素:胆红素、维生素C、氨基甲酰血红蛋白、乙酰化血红蛋白和乳糜微粒对测定均无影响。13

参考范围及医学决定水平参考范围：HbA1c

0～6.5%.14

临床意义14.1评价血糖控制治疗的疗效：反映2～3个月前平均血糖水平，可作为衡量糖尿病人血糖控制情况的良好指标糖化血红蛋白是葡萄糖或磷酸化葡萄糖与血红蛋白中2个β链的N末端氨基酸结合后形成的产物，称为GHb或HbA1。HbA1包括HbA1a、HbA1b、HbA1c和HbA1d。其中HbA1c是葡萄糖与血红蛋白β链N末端氨基酸发生的非酶促反应的产物。首先形成中间产物醛亚胺的反应快速且可逆，称为不稳定的HbA1c；继而通过Amadori转位和分子重排，形成酮胺结构，称为稳定型的HbA1c，该反应缓慢且不可逆。HbA1c占HbA1的2/3以上，其余的糖化血红蛋白是血红蛋白与磷酸葡萄糖或果糖结合的产物。血红蛋白发生非酶促糖化反应的量与反应物的浓度即血红蛋白和葡萄糖成正比。由于血红蛋白浓度保持相对稳定，因此，血红蛋白的糖化水平主要取决于葡萄糖的浓度。血红蛋白的半衰期为60天，故HbA1c的含量可反映测定前8～10周的平均血糖水平。测定糖尿病患者HbA1c的水平，可以监测近2个月的血糖控制水平。可协助判断预后：糖尿病合并视网膜病者，如HbA1c为8-10%，提示病变为中等程度，可用激光进行治疗；大于10%为严重病损，预后较差。对妊娠糖尿病，判断是否致畸、死胎和子痫前期更有意义。14.2

病理性低血糖,各种原因所致红细胞平均寿命缩短的溶血性贫血，影响了血红蛋白的糖化过程，会使HbA1C降低。15

结果审核以及分析与相关项目的联系15.1

由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2

认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3

相关项目：审核与空腹血糖、餐后二小时血糖、糖耐量等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16

暂时无威胁生命的“紧急值”及报告规定17

有关引用程序与文件17.1HA-8160糖化血红蛋白