凝血检测和质量控制专家讲座

凝血检测及质量控制凝血检测和质量控制第1页历史记载公元前犹太人法典中即有相关血友病记载近代欧洲王室之间相互通婚，造成各国王室中血友病患者高发凝血检测和质量控制第2页止凝血障碍与各种常见病血液系统疾病心血管疾病糖尿病肾脏疾病妇产科疾病外科手术体外循环等心肌梗死凝血功效异常凝血检测和质量控制第3页血管中流动血液为何不凝固破损血管为何能止血机体内存在着复杂凝血系统和抗凝系统凝血血栓抗凝出血一凝血基础理论凝血检测和质量控制第4页正常止血机能两方面五原因凝血机制抗凝机制血管壁（vesselwall）血小板（platelet）凝血系统（coagulationsystem）抗凝系统（anticoagulationsystem）正常止血机制纤溶系统（fibrinolyticsystem）凝血检测和质量控制第5页1、血管壁作用血管受损

血管收缩(1)

止血血液粘稠(4)

止血

内皮细胞

PLT黏附聚集(2)

止血

TXA25-HT

释放暴露内皮下胶原激活Ⅻ(3)内源性凝血

止血

TF释出

外源性凝血

止血神经反射内皮素血管担心素vWF凝血检测和质量控制第6页VascularinjuryFg＆Ca2+plateletTFⅦa-TF-Ca2+Ⅹa-Ⅴa-Ca2+-plⅩThrombinProthrombinFIBRINCLOTFibrinogenⅦⅦa1、血管壁作用凝血检测和质量控制第7页

血管受损

vWF

血小板黏附（1）

PLT聚集(Ⅰ)（2）

Fg

PLT释放(5-HTADP)（3）

GPIIb/IIIaFg

血管加速(Ⅱ）加速Ⅱa使纤维蛋白收缩聚集形成（2）网收缩（4）2、血小板作用凝血检测和质量控制第8页胶原

VascularinjuryvWFRestingPlateletGPIIb/IIIaFibrinogen＆Ca2+ActivatedPlatelettwo2、血小板作用粘附聚集释放凝血检测和质量控制第9页Ⅰ纤维蛋白原Ⅱ凝血酶原Ⅲ组织因子Ⅳ钙离子Ⅴ易变因子Ⅵ不存在Ⅶ稳定因子Ⅷ抗血友病因子ⅨChristmas因子ⅩStuart-Power因子Ⅺ血浆凝血活酶前加速素ⅫHegeman因子XIII纤维蛋白稳定因子PK激肽释放酶原HMWK高分子量激肽原当前公认凝血因子共14个，按罗马字命名有12个，及高分子量激肽原(HMWK)，激肽释放酶原(PK)大多数由肝脏产生，其中II、VII、IX、X合成依赖Vitk，称Vitk依赖因子除TF外，都存在于血浆除FIV（Ca2+）外均为蛋白质正常情况下，全部因子都处于无活性状态3、凝血因子机制凝血检测和质量控制第10页凝血机制（瀑布学说）ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨaⅩaⅩSurface、HMWKⅦⅦaTissuefactor（TF）Ⅶa-TF-Ca2+ProthrombinThrombinⅩⅢaFIBRINCLOTFibrinogenFibrinmonomerⅧaCa2+plⅤaCa2+plIntrinsicpathwayextrinsicpathwaycommonpathwayⅩⅢKPKHMWK三个阶段凝血酶活酶形成凝血酶形成纤维蛋白形成两路径凝血检测和质量控制第11页止血神经相

血管相

PLT相S出血血管损伤血管原因血小板原因粘附，聚集释放反应内皮细胞

损伤效应血管收缩止血凝血原因纤维蛋白形成vWFTFFⅫTXA2PF35-TH凝血酶原凝血酶纤维蛋白原凝血活酶外源性凝血系统激活内源性凝血系统激活纤维蛋白形成开启凝血系统正常止血凝血机制凝血检测和质量控制第12页4、抗凝系统抗凝血酶系统：AT-Ⅲ，肝素--丝氨酸蛋白酶抑制剂，灭活Ⅹa、Ⅸa、Ⅺa、Ⅻa及凝血酶等蛋白C系统：蛋白C、蛋白S、血栓/凝血酶调整蛋白(thrombomodulin,TM)--使凝血因子Va,VIIIa失活;--TM与凝血酶结合，促凝转向抗凝TFPI(tissuefactorpathwayinhibitor)

--抑制VIIa/Xa凝血检测和质量控制第13页抗凝系统作用

AT-ⅢTFPI肝素ⅡaⅨaⅩaⅪaⅫaKⅤaⅧaTF/Ⅶa肝素辅因子Ⅱ(Hc-Ⅱ)

APC+PS激活纤溶Ⅱa/TMPC（肝和内皮细胞合成）TFPI—组织因子路径抑制物AT-Ⅲ—抗凝血酶ⅢPc、PsTM—血栓调整蛋白Ca2+

凝血检测和质量控制第14页分解去除纤维蛋白（原），保持血流通畅组成纤溶酶原（plasminogen,plg）纤溶酶（plasmin，pln）纤溶酶原激活物(plasminogenactivators,PAs）纤溶酶原激活物抑制物(PAIs)纤维蛋白原(Fbg)纤维蛋白(Fbn)FDP(fibrindegradationproduct)5、纤维蛋白溶解系统(纤溶)凝血检测和质量控制第15页纤溶系统纤溶酶原激活物t-PAu-PAⅫaKⅡa

（+）

纤溶酶原纤溶酶PL纤溶酶抑制物

（+）水解ⅧⅨⅩⅪⅫXⅢ纤维蛋白及纤维蛋白纤维蛋白原降解产物D-D等PLG血小板聚集（-）（-）二个阶段纤溶酶原激活---纤维蛋白降解外激活路径内激活路径最主要生理性抗凝系统凝血检测和质量控制第16页纤维蛋白原纤维蛋白单体稳固纤维蛋白

纤溶酶纤溶酶纤溶酶Bβ1-42Bβ15-42

D二聚体、多聚体A、B、C、HA、B、C、HX、Y、D、EX’、Y’、D’、E’X’、Y’、D’、E’

被降解纤维蛋白（原）产物统称为FDP凝血检测和质量控制第17页止凝血障碍性疾病发病机制血管壁结构与功效异常血小板质与量异常凝血因子质与量异常循环中抗凝物质增加纤溶系统异常综合原因一期止血缺点二期止血缺点纤溶系统缺点凝血检测和质量控制第18页二、凝血障碍试验检测凝血检测和质量控制第19页凝血障碍试验检测血管壁检验血小板数量和功效检验血小板数量：血小板计数、形态血小板功效：血小板粘附、聚集血小板相关抗体凝血因子内源性：APTT测定外源性：PT测定因子活性测定抗凝蛋白测定：AT-Ⅲ测定，PC测定纤溶系统检验：FDP,D二聚体，3P试验--初筛试验/诊疗试验凝血检测和质量控制第20页（一）血管壁检测初筛试验出血时间测定（BT）束臂试验诊疗试验血管性血友病因子检测凝血检测和质量控制第21页

诊疗试验－－血管性血友病因子检测血管性血友病因子（活性/抗原检测）免疫火箭电泳法酶联免疫法临床意义减低：血管性血友病（VWD）增高：血栓性疾病凝血检测和质量控制第22页（二）血小板检测血小板计数血块收缩试验血小板功效血小板粘附试验血小板聚集试验血小板相关免疫球蛋白凝血检测和质量控制第23页诊疗试验－－血小板聚集试验参考值：临床意义：增高：血栓前状态和血栓性疾病，如急性心梗，心绞痛，脑血管病，深静脉血栓形成，口服避孕药等减低：血小板无力症，原发及继发血小板疾病，血管性血友病，应用抗血小板药等凝血检测和质量控制第24页诊疗试验－血小板相关免疫球蛋白（pAIg）血小板相关免疫球蛋白（plateletassociatedIg，PAIg）,又称血小板相关抗体pAIg增高－－免疫性血小板降低共同特征本身抗体（最多90%）－如ITP、SLE、类风湿同种抗体－－如大量输血或血小板、新生儿免疫性血小板降低症免疫复合物相关抗体－药品性、败血症及AIDS等凝血检测和质量控制第25页（三）凝血因子检测

凝血时间（CT）活化部分凝血活酶时间(APTT)凝血酶原时间(PT)纤维蛋白原(FIB)凝血酶时间(TT)凝血检测和质量控制第26页初筛试验－－活化部分凝血活酶时间（ActivatedPartialThromboplastinTime,APTT）肝素凝血检测和质量控制第27页临床意义延长：内源因子缺点(Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ)：血友病A、B，因子XI缺乏共同因子缺点：FV、FX、凝血酶原、纤维蛋白原

严重肝病、DIC循环中抗凝物质增多普通肝素应用首选指标－使APTT延长1.5-2.5倍缩短：高凝状态－脑血栓、心梗、DIC高凝期凝血检测和质量控制第28页初筛试验－－血浆凝血酶原时间

（ProthrombinTime;PT）

凝血检测和质量控制第29页世卫组织将人脑凝血活酶标准品作为制备不一样起源凝血活酶参考物，ISI表示标准品与每一批凝血活酶PT校正曲线斜率，越小试剂越敏感凝血检测和质量控制第30页临床意义延长：先天性凝血因子异常：Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ因子缺乏后天性凝血因子异常：严重肝病、VitK缺乏、纤溶亢进、DIC后期、使用抗凝药品如双香豆素缩短：DIC、心梗、脑血栓、血栓性静脉炎、MM、乙醚麻醉后

凝血检测和质量控制第31页血浆凝血酶时间（ThrombinTimeTT）原理：血浆+凝血酶→纤维蛋白形成16－18s－超出正常对照3s为延长血浆标准凝血酶延长：纤维蛋白原质与量异常FDP增多，如纤溶亢进循环抗凝物质增多，如AT-Ⅲ、肝素样物质异常球蛋白增多，如MM

凝血检测和质量控制第32页纤维蛋白原测定减低：肝脏疾病原发性纤溶亢进低或无FIB血症溶栓治疗等增高：血栓前状态或血栓性疾病：

急性心梗、脑梗

糖尿病、妊高征

外科手术后多发性骨髓瘤等凝血检测和质量控制第33页诊疗试验－－凝血因子活性/抗原测定增高:血栓前状态和血栓性疾病，如肺栓塞、妊高征、晚期妊娠、肾病综合征、恶性肿瘤等

减低:

FⅧ∶C减低－血友病A、vWD、FⅧ抗体、DICFⅨ∶C减低－血友病B、肝脏病、维生素K缺乏症、DIC、口服抗凝药品FⅪ∶C减低－因子Ⅺ缺乏症、肝脏疾病、DIC等凝血检测和质量控制第34页（四）抗凝血功效检验血浆抗凝血酶Ⅲ活性(AT-Ⅲ:A)临床意义增高:血友病、白血病和再障等急性出血期及口服抗凝药品治疗中。减低:先天性和取得性AT-Ⅲ缺乏症血栓性疾病、DIC和肝脏疾病等血浆蛋白C活性测定临床意义减低：先天性或取得性PC缺乏症DIC、肝病、手术后、口服抗凝剂、急性呼吸窘迫综合征凝血检测和质量控制第35页

（五）纤溶系统检验血浆纤维蛋白（原）降解产物D-二聚体测定3P试验凝血检测和质量控制第36页血浆纤维蛋白（原）降解产物

（Fibrin(ogen)DegradationProducts,FDP）临床意义：继发性纤溶增强，如DIC、严重感染、恶性肿瘤、大手术后、深静脉血栓、肺梗塞、溶栓治疗期原发性纤溶时FDP亦显著增高原理：胶乳比浊法凝血检测和质量控制第37页FbgFMFbnⅡaDD

test:XⅢaPLn

原发性纤溶FDP(D单体)A,B,C,X,Y,D,EFDP(D二聚体)继发性纤溶

PLnA,B,C,X,Y,D,ED-二聚体测定（D-dimer）－－交联纤维蛋白降解特异产物参考范围：20－400μg／L

＞500μg／L有临床意义凝血检测和质量控制第38页临床意义深静脉血栓、肺梗塞、继发纤溶亢进(DIC)--D-D显著增高凡有血块形成出血－－增高D-D正常--排除深静脉血栓形成DIC--常>μg/L以上，敏感性可达100%溶栓治疗：溶栓治疗时FDP和D-D增高溶栓完全后D-D下降，但FDP并不下降原发性纤溶亢进－－D-D不增加凝血检测和质量控制第39页血浆鱼精蛋白副凝试验

（plasmaprotamineparacoagulationtest，3P试验）原理与方法阳性--FDP、FM增多－DIC/继发性纤溶亢进溶栓治疗后大出血（创伤、手术、咯血、呕血），恶性肿瘤、人工流产等原发性纤溶、DIC晚期－－阴性凝血检测和质量控制第40页弥漫性血管内凝血(DIC)检测定义：各种致病原因造成全身微血管内微血栓形成，消耗大量血小板和凝血因子，并引发继发性纤溶亢进，造成血栓—出血综合征试验室检测：(同时有三项以上异常))血小板计数(＜100×109／L或进行性下降)血浆纤维蛋白原含量(＜1.5g/L或进行性下降或＞4g/L)3P试验阳性或FDP＞20mg/L或D-二聚体水平升高或阳性PT缩短或延长3秒以上(肝病延长5秒以上)或呈动态改变APTT缩短或延长10秒以上纤溶酶原含量及活性减低＜200mg/LAT－Ⅲ含量及活性降低＜60%或蛋白(PC)活性减低凝血检测和质量控制第41页Overt-DIC评分系统是否有引发DIC基础疾病评分停顿否是DatedHourhr血小板计数

(>100x109/L:0;<100x109/L:1;<50x109/L:2)A可溶性纤维蛋白和D-D二聚体

(Normal:0;Elevated:2;High:3)BPT延长(<3s:0;3-6s:1;>6s:2)C纤维蛋白原(>1g/L:0;<1g/L:1)D积分(>5:overtDIC;<5:non-overtDIC?)A+B+C+D

D-dimer增加正常或略增加凝血检测和质量控制第42页检测项目标选择和应用一期止血缺点选择：BT、PLT二期止血缺点选择：PT、APTT纤维蛋白溶解综合征：FDP、DD血栓前状态抗栓治疗监测：肝素：APTT口服抗凝剂：PT溶栓治疗：DD等凝血检测和质量控制第43页检验项目标选择及应用BT－PC－过敏性紫癜，单纯性紫癜，其它血管性紫癜等BT↑PC↓原发性或继发性血小板降低性紫癜BT↑PC↑原发性或继发性血小板增多症BT↑PC－血小板无力症，血管性血友病，低（无）纤维蛋白原血症为血管和血小板缺点所致疾病一期止血缺点(血管损伤小)内皮细胞损伤组织损伤ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨa凝血酶原凝血酶纤维蛋白原

纤维蛋白＋Ⅷ＋FP3TF＋Ⅶa←ⅦⅩⅩa＋ⅤⅩⅢⅩⅢa凝血检测和质量控制第44页肝素检验项目标选择及应用APTT－PT－正常人，遗传性和取得性因

子ⅩⅢ缺乏症，如严重肝病，

肝癌，恶性血液病，自免溶贫APTT↑PT－内源性凝血异常：血友病Ⅷ，Ⅸ，因子Ⅺ缺乏症，血中有凝血因子抗体，DIC，肝病，口服抗凝药APTT－PT↑外源性凝血异常：如遗传性Ⅶ缺乏症APTT↑PT↑共同凝血路径异常：如遗传性和取得性因子Ⅹ，Ⅴ，凝血酶原，纤维蛋白原缺乏及使用肝素内源：ⅧⅨⅪ

外源：Ⅶ

共同：ⅩⅤⅡⅠⅩⅢ二期止血缺点(血管损伤较大)内皮细胞损伤组织损伤ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨa凝血酶原凝血酶纤维蛋白原

纤维蛋白＋Ⅷ＋FP3TF＋Ⅶa←ⅦⅩⅩa＋ⅤⅩⅢⅩⅢa凝血检测和质量控制第45页检验项目标选择及应用抗凝治疗试验室监测抗凝疗法－－阻止血液凝固，防治血栓栓塞性疾病广义抗凝包含：预防血栓形成药品疗法若已形成血栓－－溶栓治疗肝素：首选APTT(1.5－2.5倍)；血小板计数华法令：首选PT，以INR(国际标准化比值)2.0－2.5,＜3为界抗血小板药－－口服有效，可长久服用，疗效持久、确切，普通无出血危险，故无需常规进行试验室监测－－必要时监测血小板聚集功效小剂量即50mg或75mg，q12h，

无需监测凝血检测和质量控制第46页应用Warfarin时INR值允许范围临床情况INR值允许范围临床情况INR值允许范围手术前处理非髋部外科手术1.5-2.5髋部外科手术2-3活动性静脉血栓重复发生静脉血栓肺栓塞及其预防2-4预防静脉血栓2-3预防动脉血栓和栓塞换心脏瓣膜手术3-4.5凝血检测和质量控制第47页三凝血检测质量控制凝血检测和质量控制第48页

分析前质量控制

标本采集1时间：清晨空腹，病人服药情况2采集容器3技术关键点：止血带压力束缚时间采血顺利防止组织因子污染，溶血，凝血，气泡产生4颠倒混匀，防止用力振荡破坏凝血蛋白凝血检测和质量控制第49页抗凝剂选择与使用1抗凝剂百分比2充分混匀，防止气泡产生及本身污染3血细胞比容影响：严重贫血者(Hct<0.25)红细胞增多者(Hct>0.55)调整百分比：用量(ml)＝0.00185×全血量(ml)×(1-Hct)

分析前质量控制

凝血检测和质量控制第50页标本保留与处理1温度：4或20℃，全血室温放置不超出2小时2血浆分离：最好1小时之内3冷冻血浆：37℃水浴中快速解冻，不能再次冷冻4血浆制备：富血小板血浆乏血小板血浆5试管加塞6分离血浆用塑料吸头

分析前质量控制

-20℃--2周-80℃--18个月凝血检测和质量控制第51页分析中质量控制试验人员规范操作室内质控试剂仪器分析中质量控制凝血检测和质量控制第52页分析中质量控制