宫颈病变组织中hpv分型检测的意义

宫颈病变组织中hpv分型检测的意义

在许多发展中国家，宫颈是女性生殖系统中最常见的肿瘤，占女性肿瘤的第二个百分点。它是由宫颈癌前病变,即宫颈上皮内瘤样病变(CIN)逐步发展形成的,其发生发展过程经历了CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、早期浸润癌和浸润癌的阶段。近20年研究表明,人乳头瘤病毒是导致宫颈癌发生的主要原因。了解HPV在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的分布情况也是尤为重要,对于指导临床工作,预防和治疗HPV感染的人群,以及对宫颈病变患者治疗后的随访及预后进行评价等具有重要意义。本研究旨在通过应用基因芯片导流杂交技术对437例宫颈病变组织进行HPV分型检测,通过检测结果分析其意义。1数据和方法1.1pv基因型分型检测将2008年1月～2009年1月在新疆医科大学附属肿瘤医院病房及门诊就诊的437例女性的宫颈脱落细胞标本进行HPV基因型分型检测,其中慢性宫颈炎174例,宫颈癌前病变170例(CINⅠ60例,CINⅡ28例,CINⅢ82例)宫颈癌93例。1.2阴道栓剂采样取所有患者的宫颈脱落细胞,对437例研究对象在非月经期采样,采样前3d内不用阴道栓剂,前1d起禁止性生活。标本4℃冰箱保存,两周内检测;宫颈病变程度的判定标准采用文献。1.3hp基因分类检测过程(1)DNA提取;(2)PCR扩增;(3)杂交过程;(4)显色结果判断肉眼观察结果,检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点。1.4统计处理采用SPSS13.0软件进行统计分析,不同宫颈病变HPV阳性率的比较均采用χ2检验。检验水准α=0.05。2结果2.1认识不同活检时间pv阳性率437例标本中,共检出HPV感染180例,HPV总阳性率为41.19%。由表1可见,HPV阳性率随着宫颈病变的逐渐加重呈趋势性增高。慢性宫颈炎(15.51%)、宫颈癌前病变(CINⅠ+Ⅱ+Ⅲ)(54.71%)和宫颈癌(64.52%)3组的HPV感染率差异具有统计学意义(χ2=81.052,P<0.05)。2.2pv亚型感染率与妊娠合并心脏病的关系研究检测到了所有HPV-DNA中的15种基因亚型。本组HPV亚型感染率最高的HPV-16与宫颈病变严重程度有明显关系,其在宫颈癌的感染率明显高于其他组,差异具有统计学意义(χ2=107.908,P<0.05),见表2。2.3多重感染的比例各病变组在HPV单一感染和多重感染的比例及分布比上差异具有统计学意义(χ2=16.224,P<0.05)。本组资料中多重感染的比例为11.11%,主要是二重感染,最常见的为HPV16合并的感染,占二重感染总数的1/2多,其次为含HPV58的感染。最常见类型为HPV16、58及HPV16、18二重感染,见表3。3认识到患者中多亚型感染率,是造成pv感染的重要因素之一,是强调三、三是两随着分子流行病学的发展,HPV与宫颈癌变的关系越来越明确。对子宫颈癌发病的生物学危险因素主要集中在HPV感染上,99.8%的宫颈癌患者中可以发现HPV感染。本研究应用的HybrMax基因芯片导流杂交技术,可同时检测21种型别HPVDNA(高危13型,低危5型及3型中国常见类型),既可用于石蜡组织标本,也可用于液基标本。其主要原理采用基因信号放大技术、导流杂交法并结合基因芯片技术。与先前所用方法比较,基因芯片导流杂交法可对HPVDNA进行分型诊断,还可判断多重感染,对HPV亚型相关问题的深入研究及对宫颈病变处理方案的指导具有明显优势。本研究结果显示,437例宫颈病变中180例为阳性感染,HPV感染率为41.19%,与文献的报道一致。本研究通过基因芯片导流杂交法检测慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌患者的HPV感染率,结果显示阳性率分别为15.52%、31.67%、50.00%、73.17%、64.52%,各组间比较有统计学差异(P<0.05)。从CINⅠ到CINⅢ是一随时间而发展的过程,本研究发现从宫颈炎到CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌,随着宫颈病变的加重,HPV阳性率逐渐增高,说明宫颈癌前病变与HPV感染有关。宫颈癌的发生和发展是一个缓慢、渐进的过程。它的发生、发展是由量变到质变、渐变到突变,通常是由子宫颈不典型增生(轻→中→重)→原位癌→早期浸润癌→浸润癌的连续发展过程。由于存在着复合感染,本组180例HPV感染的宫颈病变标本中检出亚型次数为205例次,检出15种HPV亚型,其中包括3种低危型(HPV6、11、42),9种高危型(HPV16、18、31、33、39、45、52、56、58)和中国人特有亚型(66、53、CP8304)。随着病变程度的增加HPV亚型分布有所变化,在CIN病变组中高危型HPV检出率有所增加,而低危型HPV检出率逐渐下降,93例浸润癌共检出5种高危亚型HPV,它们分别是HPV16、HPV31、HPV33、HPV39和HPV52。其中检出2种低危型分别是HPV6、HPV11型。本研究在检出的15种HPV亚型中,HPV16亚型与病变程度明显相关,其检出率随着宫颈病变级别的增加而逐渐上升。所检出的高危型中以HPV16型最多见。本研究中结果显示,HPV感染以单一感染为主,180例阳性感染者中,160例为单一感染,单一型感染率为88.89%(160/180),与国内王维鹏报道的HPV单一型感染率一致。多重感染是指合并两种或两种以上不同的HPV亚型感染。本组资料结果表明,多重感染率为11.11%(20/180)。人群中多亚型感染率可达4%～40%,多重感染以两种HPV亚型多见,其中至少有一种为高危型HPV。HPV的多重感染是否增加或促进宫颈病变的发生一直是研究者们关注的问题。Munoz等2003年总结了对1985～1997年9个国家的11项进行病例对照研究后认为,HPV多重感染与单纯感染在发生宫颈癌的风险方面没有显著差异。Kay等对南非宫颈癌和CINⅡ～Ⅲ患者进行的研究发现,CINⅡ～Ⅲ中HPV双重感染为12.4%,宫颈癌中为16%。该学者认为多重感染与宫颈癌的级别无关,多重感染并不增加宫颈癌的发生率。国内乌兰娜等2005年对356例宫颈HPV感染的患者,应用HC-Ⅱ技术检测13种高危型HPV及核酸分子快速杂交基因分型技术进行21种HPV-DNA亚型分析,结果表明多种高危型HPV混合感染者所致宫颈病变更趋严重。本资料结果显示,多重感染主要是二重感染,最常见的为HPV16合并的感染占二重感染总数的1/2以上,其次为HPV58和HPV33的感染