HIV抗体检测方法(2016年10月)

HIV抗体检测十堰市疾病预防控制中心刘经凤2016年10月规范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，

WS293-有效版本）《艾滋病病毒抗体快速检测技术手册》（中国疾病预防控制中心，2011年版）HIV抗体检测实验室要求

应符合国家对实验室生物安全的有关要求

实验室的质量控制按本规范相关章节规定HIV抗体检测的目的和要点HIV抗体检测的目的HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。HIV抗体检测的要点严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。结果判定以试剂盒说明书为标准。HIV抗体检测的目的和要点筛查试验有反应，须作补充试验。

补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。HIV抗体检测的目的和要点筛查试验无反应，不应做补充试验。对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。常规HIV抗体检测方法试剂和样品试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）

化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）

：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪

测定结果快速检测（RT）及其它检测试验

(1)明胶颗粒凝集试验(PA)

(2)免疫渗滤试验(3)免疫层析试验酶联免疫吸附试验（ELISA）

HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗体

HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体用酶标仪测定结果

有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定ELISA试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）测定的重复性差1.加样本及试剂量不准2.加样过快，孔间发生污染3.加错样本4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区5.温育时间、洗板、显色时间不一致6.酶标仪滤光片问题ELISA试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）白板（阳性对照不显色）1.漏加酶结合物2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物3.漏加显色剂A或B4.终止液当显色剂使用全部板孔都有显色1.洗板不干净2.加底物的吸头被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于仪器或加样头造成的交叉污染ELISA测定中的干扰因素内源性干扰因素外源性干扰因素内源性干扰因素

人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等外源性干扰因素

常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等酶联免疫吸附试验（ELISA）

优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存

用途：流行病学监测及临床大量标本的检测化学发光或免疫荧光试验采用发光或荧光底物既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体

酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物用发光仪或荧光仪测定结果全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果快速检测（RT）及其它检测试验质控病人条条快速检测（RT）及其它检测试验优点:快速单份标本检测不需额外试剂或设备操作简便缺点:肉眼判断较主观价格较贵结果不易保存（建议拍照保存）HIV筛查试剂的选择检测目的实验设施条件价格

其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等HIV抗体筛查结果的意义及处理未感染或暴露于HIV病毒注意窗口期感染或暴露于HIV病毒非特异性反应阴性：真阴性假阴性阳性：真阳性假阳性操作失误

处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。HIV抗体确证试验确证试验的试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。确证样品：可采用血清、血浆、滤纸干血斑确证试验方法：免疫印迹试验(WB)和条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）。国内常用的确证试验方法是WB和RIBA。HIV确证试剂产品公司试剂原理新加坡MP亚太私人医药有限公司人类免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）WB杭州澳亚生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒抗体确证试剂盒（免疫印迹法）WB上海英旻泰生物技术有限公司人类免疫缺陷病毒(HIV

1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法)WB北京万泰生物药业股份有限公司人类免疫缺陷病毒(HIV

1+2型)抗体检测试剂盒(重组免疫印迹法)RIBAAbbottSlot

immunoblot

stripRIBAInnogeneticsINNO-LIA

HIV

I/II

ScoreRIBAHIV抗体WB确证实验结果（MP）a

bcdgp160

gp120p66p55

p51gp41p39p31P24p17血清对照

HIV-2特异带a强阳性对照（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d典型的HIV-2血清阳性反应MP确证试剂盒判定标准：WB不确定结果

原因：HIV感染

期、HIV感染晚期、非特异性反应、污染

依据：流行病学资料；临床表现；WB条带等

处理：核酸检测、2-4周后随访、带型消失或无进展、出现新带型、重采血HIV抗体

母亲HIV抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染

出生时母亲的抗体，80~90%在生后9~12个月消失，出生后18个月基本上全部消失

18个月后儿童HIV抗体仍然阳性，视为自身感染产生的抗体18个月以下婴幼儿的HIV诊断婴幼儿HIV感染的抗体检测适用于：HIV感染产妇所生婴幼儿；

母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。婴儿12个月时进行HIV抗体检测阴性排除感染，纳入正常儿童保健；阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排除感染。结果报告筛查报告HIV抗体筛查试验报告使用附表1（HIV抗体筛查检测报告）。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为

“HIV抗体阴性”，结果报告

复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。

HIV抗体筛查报告需由一名检验人员和一名审核者签字。结果报告确证报告

符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告

“HIV-1抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。

符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告

“HIV-2抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。结果报告

符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测或2-4周后随访，尽早明确诊断。

符合HIV抗体不确定判断标准，报告

“HIV抗体不确定”，在备注中应注明

“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。

HIV抗体确证检测报告应在收到样品后的

7个工作日内发出。质量控制

酶免或发光法抗体检测的室内质量控制试剂盒内部对照室内质控品Levey-Jennings质控图室内质控其他方式—“即刻法”质控质量控制

快速法抗体检测质控试剂内对照室内质控品对照开展抗体相关检测的实验室须参加有资质机构组织的能力验证，或室间比对。艾滋病抗体快速检测质量控制依据艾滋病病毒抗体快速检测技术手册（2011年版）第8章艾滋病抗体快速检测质量控制检测前质控：样品要求唯一编号，检测前应仔细核对。检测点的环境温湿度应符合检测试剂盒说明书的要求，并做好相关的记录。保证试剂在有效期内使用。艾滋病抗体快速检测质量控制检测过程质控：做好实验过程中相关信息的记录：样品、检测试剂、操 作者等。保存在冰箱的试剂需在室温平衡后再使用；剩余的试剂 条应立即封存冷藏；室温性下保存的试剂也应避免高 温。按照试剂厂家提供的说明书严格操作。（时间）判定结果时，质控带必须出现，实验才能成立，否则需 要重做并查找原因。艾滋病抗体快速检测质量控制检测后质控：判读结果时应保证光线充足。对难以判读的条带建议又两人判读。复核样品编号后填写实验结果。清洁并处理实验废弃物。发放规范的检测报告，整理实验过程中的各项记录存档。试剂-1有反应无反应试剂1双份或双孔检测或两种试剂均有反应一有反应,一无反应均无反应补充实验报告HIV抗体阴性图2使用抗体检测试剂的检测流程阳性免疫印迹试验（WB/RIBA）阴性不确定核酸试验或2-4周后随访出现HIV-2指示带根据情况进一步检测HIV-2报告HIV-1抗体阴性报告HIV-1抗体阳性图5免疫印迹试剂（WB/RIBA）试验流程HIV1/2抗体或抗原抗体联合检测试验无反应有反应方案1相同样本相同试验双孔复试方案2复试结果无反应

-,-复试结果有反应-,+；+,+阴性报告血液检测合格反应性报告血液检测不合格。

如需进一步检测，参照临床诊断检

测策略图9血液抗原抗体筛查