沙门氏菌血清学鉴定

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篇一：沙门氏菌生化鉴定

沙门氏菌生化实验鉴定环节

三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的运用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、

蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能运用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌运用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，因此仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是由于某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反映，生成黑色的硫化亚铁沉淀。底层产酸：是由于细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。

斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。由于底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，普通８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。

2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生h2s。

4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生h2s。

3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生h2s，多数产气。赖氨酸脱羧酶实验

1、实验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的ph。

2、阳性实验管培养早期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性实验管则始终呈黄色。

氨基酸脱羧酶实验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基

变为碱性，可用批示剂批示出来。(2)办法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶实验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖最少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察成果。(3)成果：若为溴甲酚紫批示剂，则实验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。(4)应用：重要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。

精氨酸双水解酶实验(1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用批示剂批示出来。(2)办法：将待检菌接种于实验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察成果。(3)成果：溴甲酚紫批示剂呈紫色为阳性，酚红批示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(4)应用：重要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。

非发酵菌：是一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式运用糖、需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌。

表2

进行鉴定。

反映3：补做onpg。onpg为阴性，同时赖氨酸脱羧酶为阳性；赖氨酸脱羧酶为阴性时为甲型副伤寒沙门氏菌。

必要时按表4进行沙门氏菌生活群的鉴别

篇二：沙门氏菌属诊疗血清阐明书

沙门氏菌属诊疗血清学实验操作程序

1.目的

制订沙门氏菌属诊疗血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。

2.原理

用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸取出去非特异性凝集素后制成，通过凝集实验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。

3.试剂及实验设备

3.1沙门氏菌属诊疗血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙

门氏菌属诊疗血清

3.2试剂保存：2~8°c避光保存，避免冻结，在使用期内使用。

3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、

电热高温接种灭菌器。

4.程序环节

4.1将诊疗血清于冰箱取出后平衡至室温。

4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。4.3菌群分析

将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用o多价A~F群血清进行凝集实验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范畴内，因97%以上的沙门菌都涉及在A~F6个o群之内，如果不凝再使用其它o抗血清进行凝集实验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于对应的菌群。若与多价o抗血清不凝集，有以下3种可能：①含有Vi抗原；②A~Fo群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。可按下述办法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。1份不经解决，为活菌液，另1份放100°c水浴中30min，为加热菌液。取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价o抗血清分别进行玻片凝集实验。根据成果作以下分析：①活菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于c群或D群菌，用o7和o9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~Fo群之外的沙门菌或其它

菌属细菌，需进行生化实验定属，若符合沙门氏菌属细菌特性，可送cDc鉴定；③加热菌与Vi抗血清凝集，而与A~F多价o抗血清不凝集者，可报告为阴性。4.4血清型分析

菌群拟定后，分析被检菌的鞭毛抗原成分。先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛抗原。第1相鞭毛抗原分析：根据菌群分析成果，分别选用第1相鞭毛因子血清进行玻片凝集实验。第2相鞭毛抗原分析：所用抗血清，普通是复合因子（1、2、3、5、6、e、n、I、w）血清。单相菌，如第1相已拟定，可结合菌群分析及生化反映成果判断血清型。如为双相菌，只分析出第1相鞭毛抗原，大多数也可结合菌群分析和生化成果判断血清型，必要时进一步探索第2相鞭毛抗原。若只分析出第2相鞭毛抗原，须进一步探索分析第1相抗原。探索另1相抗原可按下述办法和环节进行。如“小内管”法，一支已融化半固体琼脂，插入一支无菌两端相通小玻璃管于培养基当中，长度稍高出半固体液面。待琼脂泠却凝固，用接种环取1~2环待克制相h抗血清，放入小内管的琼脂表面，然后接种被诱导菌株于小内管含抗血清琼脂层面，35°c孵育4~6h或过夜，取小内管外半固体琼脂层生长培养物，接种于平板或直接做凝集反映，可获得待诱导相的菌株。有些种的拟定是靠鞭毛抗原中的微小差别来分析的，因而获得丰富鞭毛抗原的培养物十分重要。

4.5将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制备2麦氏单位的菌悬

液，取诊疗血清20μL于干净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集实验均应以生理盐水作为阴性对照实验。

4.6根据其生化反映和与o抗血清、Vi抗血清、h抗血清的凝集成果对照沙门

氏菌属国内常见菌型诊疗抗原表，拟定沙门菌的菌型。4.7沙门氏菌属国内常见菌型诊疗抗原，见附表

5.质量控制

o多价A~F群血清选择伤寒沙

门菌ATcc14028为阳性对照；大肠埃希菌ATcc25922为阴性对照

附表：沙门氏菌属国内常见菌型诊疗抗原表

篇三：沙门氏菌实验13.37

华南农业大学

答辩委员会主席xxx评阅人xxx

摘要

沙门氏菌是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反映和抗原构造相似的革兰氏阴性菌。其种类繁多，少数能使人致病，其它可使动物致病，偶然可传染给人。沙门氏菌病是公共卫生学上含有重要意义的人畜共患病之一,其病原沙门氏菌属肠道细菌科，重要引发人类伤寒、副伤寒以及食品中毒或败血病。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食品中毒常占首位或者第二位。据称在全部肉用动物中,家禽显然对沙门氏菌最易感受。沙门氏菌易于在雏鸡肠道内定居与增殖，鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌是引发鸡常见多发性传染病的细菌，严重影响雏鸡成活率，造成成年鸡产蛋等生产性能的下降[2]。因此在实脸上和生产实践上必须及时进行家禽肠道传染病的防止及控制。自19世纪后期，沙门氏菌初次被鉴定为人类的一种病原以来，检测办法学都是建立在采用感染病人的粪便或血液作为临床病料的基础上。随着DnA和抗体技术的发展，近间出现了诸多改善的办法，其中许多办法能够在48h内检出沙门氏菌。根据gb/T4789.4-20XX，食品中沙门氏菌传统的检测办法有5个基本环节：前增菌、选择性增菌、选择性平板分离、生化实验、血清学分型鉴定。现在检测食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为原则分析单位。本实验由于实际条件的限制，取10g鸡肠作为样品按照国标办法进行沙门氏菌检测。

核心词：沙门氏菌革兰氏阴性食物中毒

目录

前言.............................................................................................................3

1材料与办法.....................................................................................................3

1.1材料...........................................................................................................3

1.1.1仪器....................................................................................................3

1.1.2试剂...................................................................................................4

1.2实验环节..................................................................................................5

1.2.1前增菌...............................................................................................6

1.2.2增菌...................................................................................................7

1.2.3分离...................................................................................................7

1.2.4生化实验...........................................................................................7

1.2.5血清学鉴定.......................................................................................9

2成果与分析....................................................................................................10

2.1初步判断成果........................................................................................10

2.2生化实验初步鉴别成果.........................................................................10

2.3补做onpg实验成果...............................................................................11

2.4血清学鉴定成果.....................................................................................11

2.5成果报告................................................................................................11

3讨论...............................................................................................................12

前言

沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌。己发现的近一千种(或菌株)。按其抗原成分，可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组。其中与人体疾病有关的重要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等。除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引发人类的疾病外，大多数仅能目引发家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但有时也