超低温冰柜-气相色谱-串联质谱仪测定食用植物油中多环芳烃

超低温冰柜-气相色谱-串联质谱仪测定食用植物油中多环芳烃

多环芳烃（pah）易于生产过程中对食用植物油产生污染。目前，多环芳烃的检测方法主要有HPLC1实验部分1.1超低温冰柜chr7890B-7000C气相色谱-串联质谱仪（美国Agilent公司）；GC-2030气相色谱仪(岛津公司)；5810R高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）；超低温冰柜（北京德天佑公司）。2.0g/LBAA，CHR，BBF，BAP的二氯甲烷-苯（1+1）混合标准溶液（美国O2Si公司）；100mg/LBAP-d12甲醇内标溶液（美国O2Si公司）；2.0g/LCHR-d12二氯甲烷内标溶液（美国O2Si公司）；十九烷酸甲酯（99.0%，德国DrEhrenstorferGmbH公司）；氯乙酰（美国J.T.Baker公司）；乙腈、二氯甲烷、正己烷、甲醇（色谱纯）；无水MgSO1.2实验方法1.2.1内标和中间工作液的配制标准储备液：将定值多环芳烃标准混合溶液、内标溶液分别用二氯甲烷稀释至10mL容量瓶中，得浓为200mg/L的混合标准储备液和浓度为10mg/L的内标混合储备液，于棕色贮液瓶中-20℃贮藏（用前放置到室温）。中间工作液：用二氯甲烷稀释多环芳烃储备液，得到分别为1mg/L和0.1mg/L的多环芳烃混合中间工作液。内标溶液：用二氯甲烷稀释内标储备液，得到1mg/L的混合内标工作液。系列的标准工作液：用二氯甲烷稀释中间工作液和内标溶液，得到质量浓度分别为1，5，10，20，30，40和50μg/L，内标质量浓度均为25μg/L的系列的标准工作液。1.2.2．-65称取0.5g植物油样品于50mL塑料离心管中，加入25μL1mg/L的混合内标溶液，涡旋10s，再加入15mL乙腈和1mL水，涡旋1min，以8000r/min离心5min，使溶液充分分层后，于超低温冰箱（≤-65℃）冷冻10min，或于普通冰箱中冷冻（-20℃）1h以上，使下层油脂充分凝固，上层乙腈溶液立即倾入装有2gMgSO1.2.3电子击穿电子源ei色谱：使用HP-5MS色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)，升温程序为50℃保持1min，以20℃/min速度上升到220℃，再以5℃/min速度升温到到320℃保持2min。进样量1μL，不分流进样，载气为He，恒流模式，流速1mL/min。质谱：电子轰击电子源（EI）；电离能量：70eV多反应检测模式扫描，检测离子对和其他质谱参数见表1。1.2.4冷脂肪测定1.2.4.1.冷冻摩尔率的计算冷冻除脂率=（1.2.4.2f参照国标方法2结果与分析2.1色谱条件优化目标物经EI源碎裂后，选择相对丰度较大的离子做前级离子，使用不同碰撞能进行碰撞，得各化合物的二级碎片离子以及最优碰撞能量见表1。由于同分异构体BAA与CHR，BBF与苯并(K)荧蒽（BKF），具有相同的前级离子和碎片离子，因此必须进行有效的色谱分离。在本实验优化的色谱条件下，BAA与CHR获得基线分离；BBF虽与BKF部分分离，但可对BBF进行准确定量。图1为加标量为5μg/kg的大豆油样品的MRM色谱图。2.2样品用量及加水量的确定食用植物油样品经乙腈提取可通过冷冻使油脂与提取液分离。常规冷冻（-20℃）油脂层凝固较慢，通常需冷冻1h以上；而超低温冷冻（-85℃~-65℃）油脂层凝固较快，仅需5~15min，时间过长乙腈层凝固。本实验使用超低温冷冻，冷冻时间10min。实验发现，样品提取时加入适量水，能显著提高除脂率。在本实验的样品和乙腈用量条件下，水加入量对除脂率的影响结果表明，加水量分别为0，0.1，0.5，1.0mL，随加水量的增加除脂率显著提高；这可能是由于加入水后，提取液的极性变大，导致其中残余油脂减少所致。但加水量过大，不利于PAH的提取，也为后续DSPE时除水带来了压力。本实验确定最佳用水量为1.0mL。由于使用稳定同位素标记PAH做内标，定量结果取决于样品溶液中目标物与内标的比值，目标物的提取率对检测结果的影响较小，故一次提取即可满足要求。冷冻除脂后，提取液中剩余油脂小于总脂的3%，可使用DSPE方法进一步净化，本实验参照粮谷或水分少的食品样品多环芳烃测定的样品净化方法进行2.3线性关系、检出限制和定量限制根据油脂中4种PAH的含量，考察了质量浓度范围为1~50ng/mL的线性，2.4加标回收实验结果由于空白食用油样品无法获得，实际样品中4种PAH的含量为1.02~11.35μg/kg，见表4，定量限加标水平无法得到，因此本实验进行了添加水平为5，20和50μg/kg的加标回收实验（n=6），结果见表3，总体回收率为80.8%~103.8%，RSD为7.4%~13%。符合化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南2.5花生、葵花籽油、冲突分子油种的确定应用本方法对购自本地超市的10个食用植物油样品进行实际检测，其中大豆油2种，玉米油2种，花生油2种，葵花籽油2种，橄榄油2种。结果列于表4。BAP含量在1.02~4.92μg/kg，低于我国食品安全限量（10μg/kg），处于较安全水平。但4种PAH总和，即PAH4，即PAH4在15.77~32.46μg/kg，均高于欧盟限量（10μg/kg）。3分离固相萃取法使用冷冻除脂结合分散固相萃取进行样品前处理，再利用稳定同位素内标法定量优势和GC-MS/MS高灵敏性，建立了检测食用植物油中4种欧盟限量PAH的新方法。结果表明，乙腈提取剂中加入适量水能显著提高冷冻脱脂率，再结合分散固相萃取能够实现了对植物