hplc测定瑞替加滨的含量

hplc测定瑞替加滨的含量

瑞利加斌（ret）由格兰斯科克和valent联合开发，2011年获得欧盟批准的新型抗癫痫药物，并与过去的na相关。1仪器、试剂和仪器LC-20AD高效液相色谱仪(日本岛津),LC-solution色谱工作站;XS105电子天平(瑞士MettlerToledo公司);SevenMultipH计(瑞士MettlerToledo公司);KUDOS超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)。乙腈为色谱纯(Merck公司);庚烷磺酸钠为色谱级试剂(西班牙Scharlau公司,批号:12619501);水为Millipore高纯水;瑞替加滨对照品(自制,批号:RET-II-073,纯度:99.96%)。瑞替加滨样品(浙江九洲药业,批号:RET-Ⅱ-075,RET-Ⅱ-076,RET-Ⅱ-077,纯度>99.55);杂质RET-Ⅰ(浙江九洲药业,批号:RET-Ⅰ-016),杂质RET-Ⅱ(浙江九洲药业,批号:RET-Ⅰ-032)。2方法和结果2.1条件1色谱柱:AgilentZOBAXSB-C2.2溶液制备2.2.1对照品储备液的制备精密称取100mg瑞替加滨对照品于100mL量瓶中,用空白溶液(乙腈∶水=7∶3)溶解并稀释至刻度,混匀,作为对照品储备液,备用(1000µg·mL2.2.2空白溶液的稀释精密称取100mg样品于100mL量瓶中,用空白溶液溶解并稀释至刻度,混匀,然后再精密移取1mL于10mL量瓶中,用空白溶液稀释至刻度,摇匀(100µg·mL2.2.3系统适应性溶液精密移取“2.2.1”项下对照品储备液1mL于10mL量瓶中,用杂质溶液(RET-Ⅰ和RET-Ⅱ为1.5μg·mL2.3分别进样分析分别取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和系统适应性溶液,按“2.1”项下方法,分别进样分析,结果见图2。由图2可见,瑞替加滨的保留时间为13.25min,谱图的基线平稳,异构体杂质RET-Ⅰ、RET-Ⅱ和主峰可以基线分离,通过DAD检测器进行峰纯度的检查,瑞替加滨色谱峰显示为单一的色谱峰,见图1E。2.4空白溶液配制分别精密移取对照品储备溶液0.20,0.40,0.60,0.80,1.00和1.20mL于10mL量瓶中,用空白溶液稀释至刻度,制成20.38,40.76,61.14,81.52,101.90和122.28µg·mL2.5仪器精密度试验精密吸取对照品溶液10µL,按“2.1”项下方法重复进样6次,记录色谱图,结果峰面积的RSD为0.20%,表明该方法仪器精密度良好。2.6峰面积峰面积测定取同一供试品溶液,在室温条件下于12h内每隔2h,按“2.1”项下方法进样测定,记录峰面积。结果瑞替加滨峰面积的RSD为0.33%,表明供试品溶液在12h内稳定。2.7峰面积0.2.2测定精密称取同一批样品(批号为RET-Ⅱ-075)样品6份,按“2.2.2”项下方法处理,进样测定,记录峰面积。结果瑞替加滨峰面积与浓度比值的RSD为0.08%,表明重复性良好。2.8加样回收率的测定精密量取同一已知浓度的瑞替加滨溶液9份,分别加入相当于样品检测浓度的80%,100%,120%的对照品各3份,用空白溶液稀释后,按“2.1”项下方法进样测定。计算回收率。结果见表1。2.9测定不同实验者的色谱分析取同一批样品(批号为RET-II-075),分别由不同实验者在3d内,各自独立操作,在不同的色谱仪上进行含量测定。计算精密度,平均含量为99.52%,RSD=0.33%,表明本方法的中间精密度良好。2.10试品中瑞替加滨的测定取3批瑞替加滨样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液各6份,按“2.1”项下方法进样测定,并按外标法计算含量,结果3批样品中瑞替加滨的含量均在98.0%~102.0%内,RSD<1.0%,见表2。3流动相及色谱质谱的选择检测波长的确定是根据DAD检测和紫外扫描结果确定的,将瑞替加滨对照液用空白溶液稀释至6µg·mL流动相的选择,曾采用磷酸二氢钾、磷