土壤五种酶的测定方法

参考文献：1、 关松荫等，编著.土壤酶及其研究法M].农业出版社，1986.2、 周礼凯，编著.土壤酶学M].科学出版社关松荫等，1986蔗糖酶：比色法(1) P274-276脲酶：比色法P294-297蛋白酶：比色法9(1)P302-304磷酸酶：磷酸苯二钠法(2)P312-313过氧化氢酶：容量法P323蔗糖酶比色法1、 试剂苯甲酸溶液0.25%3,5-二硝基水杨酸pH5.5磷酸缓冲液8%蔗糖溶液甲苯2、 操作步骤5克风干土f50mL三角瓶-15mL8%蔗糖溶液-5mLpH5.5磷酸缓冲液f5滴甲苯f摇匀放入恒温箱f37°C培养24hf取出迅速过滤f吸取滤液1mLf流水冷却3minf蒸馏水稀释至50mLf508nm比色3、 结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。葡糖糖(毫克)=aX4式中a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标。¥=0.229X(-0.0209)R2=0.9961注意：Y值为吸光度值，相当于表中的A平均X值为根据上述公式计算的结果，相当于a值葡萄糖含量为a*4(毫克)蛋白酶比色法(1)试剂1%酪素溶液0.1N硫酸20%硫酸钠2%茚三酮液甲苯甘氨酸标准溶液操作步骤4g风干土f50ml三角瓶f20ml1%酪素液f1ml甲苯f30C恒温箱24hf2ml0.1N硫酸f12ml20%硫酸钠液f15min(6000转/min)离心一上清液2ml50ml容量瓶flml茚三酮f沸水浴10minf蒸馏水稀释至刻度f500nm比色结果计算蛋白酶活性，以24h后1g土壤中氨基氮的毫克数表示。NH2-N(mg)=a*5式中a——从标准曲线查得氨基氮毫克数b——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标。Y=2.8236x+0.011R2=0.9968X=(y-0.011)/2.8236过氧化氢酶容量法试剂0.3%的过氧化氢溶液3N硫酸0.1N高锰酸钾溶液操作步骤2g风干土一100ml三角瓶-40ml蒸馏水一5ml0.3%过氧化氢溶液一复式震荡机震荡20min-5ml3N硫酸一过滤一去25ml滤液-0.1N高锰酸钾滴定至淡粉红色计算土壤过氧化氢酶活力以及所消耗的高锰酸钾的ml数来表示脲酶比色法试剂PH6.7柠檬酸盐缓冲液苯酚钠溶液次氯酸钠溶液10%尿素液甲苯硫酸铵操作步骤5g风干土一50ml三脚瓶-1ml甲苯-10ml10%尿素液一20mlPH6.7柠檬酸盐缓冲液一37°C恒温箱24h—过滤取3ml滤液一50ml容量瓶一加蒸馏水至20ml4ml苯酚钠一3ml次氯酸钠液一20min后显色定容一1h内578nm比色计算服酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。NH3-N(mg)=aX2式中a——从标准曲线查得的NH3-N毫克数z——换算成1g土的系数磷酸酶磷酸苯二钠比色法（2）1、 原理：在碱性条件下，当存在氧化剂铁氤化钾时，酚被氧化成醍，醍又与4一氨基氨替比林络合成玫瑰色，颜色深度与酚量相关，通过比色测定游离酚量。2、 试剂（1） PH9.8氯化铵一氢氧化铵缓冲液（2） 8%铁氤化钾液体（3） 3%4一氨基氨替比林液（4） 0.5%磷酸苯二钠溶液（5） 酚的标准溶液（6） 甲苯3、 操作步骤称5g风干土f50ml三角瓶f5滴甲苯f20ml0.5%磷酸苯二钠^37度恒温箱2hf滤液5mlf50ml容量瓶f20ml蒸馏水f0.25ml缓冲液f0.5ml4—氨基氨替比液f0.5ml铁氤化钾液f定容f15min内于510nm比色4、 结果计算磷酸酶的活性，以2h后100g土壤中P2O5的毫克数表示。P2O5（mg）=a*80*0.32*2.29式中 a——5ml滤液中酚的毫克数 80——换算为100g土