第八章配子与胚胎生物技术(精)

第八章配子与胚胎生物技术（一）概念（记忆，P253）胚胎移植embryotransfer,ET）：又称借腹怀胎，受精卵移植。它是将体内（优秀母畜）、外生产的哺乳动物早期胚胎（一般情况下所移植的不是受精卵，而是发育至多细胞、的胚胎），（如果是体外内胚胎用手术或非手术的方法取出，

桑棋胚或胚泡阶段在显微镜性下检出后），移植到同种的生理状态相同的雌性动物生殖道内，使之继续发育为正常个体的生物技术。提供胚胎的个体

-（dono）-（reciien） multpleovulationandembyotranser,MOET）,MOT技术，，P209-211）、试验研究阶段、实际应用阶段、产业化阶段（三）胚胎移植在畜牧业生产上的意义（、提高良种母畜繁殖力；、简化良种引进方法；、降低种质资源保护利用；、加速育种进程；、利于防疫；在养猪业中，为了培育无特异性病原体

P256,记忆）（SPF）控制疾病一种施，用ET技术剖腹取仔的方法。、促进生殖生理理论与胚胎生物技术的发展二ET的生理学基础与基本原则（一）生理学原理（书P212,记忆）母畜发后数甚至10余日内，生殖系统的变化相同，即在相同的时期，生理状态一致，子宫内的环境相同。、早期胚胎的游离状态游离状态是胚胎采集、保存、培养和体外操作等重要理论基础。、子宫对早期胚胎的免疫耐受性即胚胎移植不存在免疫问题。、胚胎遗传物质的稳定性84（二）ET遵循的基本原则P212-213,记忆）、胚胎移植前后所处环境的同一性1）供体和受体在分类学上的属于同一物种；）胚胎发育阶段与受体发情时间上的一致性；）胚胎发育阶段与受体生殖道解剖位置的一致性。ET 3~8d内收集ET。、胚胎的质量。保证质量。、经济效益或科学价值。供胚应具独特经济价值，而受体要求生产性能一般，但繁殖性能良好，环境适应能力强。（三）ET应具P213）、实验室条件、技术条件、胚胎来源二、胚胎移植的技术（记忆）P214）1、供体母畜健康，较高育种价值，生殖机能正常，已证明对超排反应较好。、受体母畜健康、繁殖性能良好，体型较大。（二）受体母畜的同期发情（P214）同第四章第七节（三）供体母畜的超排（P214-216）1、超排方法（前已说）、提高超排效果的措施（选择对象、规范化管理、优质药品）（四）供体母畜的配种（P216）适当的时间，优质精液对供体母畜进行输精。使用密度大、 活率高的精液输精，输精次数2-3次，隔-10h（P216-219）定义：是利用特定的溶液和装置将早期胚胎从母畜子宫或输卵管中冲出并回收利用的过程。851、冲胚液的配制与灭菌：含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（ D-PBS）。供体在情第5-6d22 7d：8d4-8 6-）1毒握f2d后消黄（六）胎的查：是指 同时间胚胎量和量。：指应 BCD123P221-224）胚胎保存：指将胚胎在体内、体外正常发育温度下，暂时储存起来而不使其失去活力； 或将其保存于低温或超低温情况下，使细胞代谢处于新陈代谢和分裂速度减慢或停止，即使其发育处于暂时停顿状态，一旦恢复正常温度时，又能再继续发育。胚胎冷冻保存意义：适应ET1-3）15-25℃（）5℃,目前认为5-1P224-225）、手术法移植（小动物和实验动物）与冲胚同。、腹腔内窥镜法移植（人）861P225））饲理苗 P225-226）（一）胚胎移植的实际效果主要取决于：、胚胎来源1 50-8%非 %。 10-0%0-0%3545%3040%2530%2030%五、ET主要存在的问题（熟悉，P226-227）、胚胎来源限制了T87、T、ET技术的发展前景（了解，P227）、牛羊的胚胎冷冻保存和移植技术已基本成熟，一些国家已进入产业化阶段，近年来，我国畜牧业发达地区推广速度很快，有潜在的开发前景；、胚胎冷冻保存是实现T使:（的、IVF技术的发展历史（一）补充IVF概念（记忆）别 （invitoferiliaton,IVF）。 牛（）（P228）1951年，美籍华人张明觉和澳大利亚 Ausin发现精子aactn;20世纪60-80年代中期，纷纷得到了世界首例试管小鼠（ 19、（197、婴197）,牛（9）、羊羊（198）、9）。系1987年生产了世界上数量最多的试管牛群，并于198年成功例蒋于13年利 IVF20世纪80年代中期以后IVF-ET技术在得到广泛用的同时畜F技 IVF-ET技术，对可获得3头犊80年代后期，牛0PU(ovmpickup)OPU和IVF-ET结合已成为F不仅88二、IVF技术的基本操作程熟悉， P228-230)体外受精的主要内容包括：卵子的体外成nvitromatuatio,IVM)卵子和子体受精(nvitoferilzaton,IVF)受精养vitoculue,IVC)(养( P228-230)、卵母细胞的采集(1卵实验动物或小型畜)(2卵主要来源)(3活体采卵优良品种)择卵胞体coocyecomlex,COC)A:3层以上卵丘细胞紧密包围，细胞质均匀B:卵丘细胞低于3层，细胞质均匀C:无卵丘细胞包(裸卵，光熟 M1一(25C2的空(3培养时 22〜24h而为30〜36,猪为44。(4法( 50〜200)。(二精(VF)、精子获能处理：(1(三养(VC)、培养体系：复杂胚胎培养液：如TM199采CZB、SO、CRaa等、培养方法：微滴法3-10）CO2培养箱培养44其牛〜h受精 18〜。受精后〜44h检查受精卵的裂率其中48-72h更一培液换1/2）。89三、家畜IVF技术的发展现状和存在的问题（ 231-232）（一）发展现状P231）牛：卵裂率CR）80-90%囊）％:40-0%,BL冷冻80%,ET后产30-40%o平均每个卵巢获A级卵母细胞10个，经IVF可获得-4BL,ET后产犊1-2头。：CR:80-90%;BL:30-40%;L冷冻后能继续发育率80%,ET后犊率。：CR:90%,BL:60-7%;ET30%。P232）、存在问题（）囊胚发育率低，细胞数少；（）产犊率低，胎儿出生重高。、发展方向（）深入研究卵母细胞成熟和胚胎发育的分子机理；（）加强腔前卵泡的培养研究，充分利用优良母畜的遗传资;（加强IVF与其它四、辅术（232-233）辅助受精技术：通过人为方法使精子和卵子完成受精过程， 克服精子不能穿过透明带和卵黄膜的缺陷。目前有透明带修饰和精子注入法， 由于两种方法都需借助显微操作仪来完成，故又称显微授精mironsmiaton）。（）带法（）注（P233）直接注入到卵黄周隙或卵母细胞的胞质中，前者称透明带下注射（ subznalinseminatin,SU）后注（inraytplcsperminjcton,ICI）克lo），P）过精P23）P233）（二）胚胎分割的基本程序（P234）器具的准备—胚胎预处理—胚胎分割—分割胚的培养—分割胚的保存和移植90 P235）存在问题：1、初生重低、遗传一致性、异常与畸形、同卵多胎的局限性二、单个卵裂球分离培养（P235-236）定义：把哺乳动物早期胚胎分离成单个卵裂球，再把卵裂球单独培养为正常胚胎，然后移植给受体得到克隆后代。三、胚胎细胞核移植（P236-239）胚胎细胞核移植（embyoiccellnuclartranfer（，P） P23）：P236-239）、卵母细胞去核、供体核的准备和移植、卵裂球与卵子的融合、卵子的激活（电脉冲）、克隆胚的培养（三）胚胎克隆技术存在的问题（P238）、供体核数量的局限性；、受体卵子的质量；、核质关系的影响；、操作技术的影响。（四）胚胎克隆技术的发展远景（P238-239）、比胚胎分割、卵裂球培养大大提高了生产遗传同质动物的效率；91P239-240）体细胞核移植（somatccellnuceartranfer,SCNT）2大优点：、供体核的数量可无限获得；、通过对供体细胞的改造，加速家畜品种改良或生产转基因动物。SCNTP23）：ESSCNT（二）SCNT

P239） P239）与胚胎细胞克隆基本相同。主要差别在于供体细胞的选择（三）SCNT技术目前在问（ P240）、结果不稳定，效率低（0.5-5）；、后代死率；、细胞质传题；SCNT技术发远（了解， P240）、大大提高畜牧业的生产效率；、加强濒危动物的保护力度；、克隆与转基因技术结合将大幅度提高转基因效率，克服外源基因随机整合带来的消极影响；、进行治疗性克隆。治疗性克隆：通过体细胞核移植并培育到囊胚期，并从这个囊胚分离出 ES细胞，体外定向诱导分化成有特定功能的细胞，就能为需要的病人提供不具有排斥反应的细胞、 组织和器官。第四节转基因技术哺乳动物转基因技术（记忆P240是基因工程兴生术。 DNA导入到受92 trnsencanimas）。 P241）（一）在基础生物学中、已用于研究真核细胞的基因转录、表达和调控规律以及个体发育分子的调控规律；、借助转基因基因模型作更深一步研究。（二）在基础医学研究中、制备动物疾病模型；、治愈人类的遗传疾病。（三）在畜牧业中、改造家畜的基因，以达到人们所需目的如加快生长速度、 提高饲料报酬或增强抗病力等；、生产药用或营养蛋白质；、作器官移植。二、哺乳动物转基因技术的研究概况（三、哺乳动物转基因技术的主要环节（（一）目标基因克隆和体外重组

P241-242）P242）、人工合成、互补DNA的克隆、DNA克隆（二）源基的导（P242-244）、显微注射法、反转录病毒感染法P）法（24、载体法、核移法DNA整合、转录 P244-245）、外源基因的整合检测、外源基因的转录检测、外源基因的表达检测（四）转基因动物品系或品种的建立（ P245）第一代转基因动物：半合子转基因动物，外源基因仅在一条染色体上稳定整合通过选种选配，将2 DNA93 P245）、效率低，成本高。、外源基因的随机整合和异常表达、转基因与动物保护的矛盾、转基因动物释放及生物安全五、哺乳动物转基因技术的发展趋势（ P245-246）、提高效率，降低成本、加强基因定点整合技术的研究、转基因技术的发展将对人类产生深刻的影响第五节性别控制技术一、性别控制技术的发展概况动物性别控制技术定义通过年性别控的意（P246）1、可充分发挥受性别限制的生产性状（如泌乳性状）和受性别影响的生产性状（如肉质生长速度等）的最大的经济效益；、可增强良种选种强度、加快育种进程；、克服牛ETP246）物理法时期（1925197）：离，泳等x和y1971198）：H-Y抗原（雄性特异的组织性相容性抗原）流动细胞仪分离法时期（1990）：最科学，最可靠二、哺乳动物的性别控制技术（P246-248）（一）XY、X和YX精子染色体的含量高于Y子染上特异SRY（Sex-detrminngreginofY-cromoome)序歹、X和Y精理论基：DNA含量XY,Hochst3332染色Y精 P2）:先用DNA特异性料对弱号传递计算；管X精荷收Y精子。94（二）早期胚胎性别鉴定（247-248）、核型分析法从早期胚胎中取出部分细胞，制备染色体标本，观察性染色体类型。、SRY片段的R扩 SRY基因，能产生A片段的胚H-Y抗原）。三、性（P248）、流动细胞器分类法和-PR扩与F和SRY-PCR试齐IJ盒。第六节动物胚胎干细胞的分离和培养技术（自学）哺乳动物胚胎干细胞（mammaianemrynicstemcels）又称ES或EK（eas&ka育全系。小性,即、ES细胞研究的意义P24）ESES P251-252）、根据细胞的分化特点建