临床血液学检验技术-第四章-第一节-溶血的一般检查-课件

第一章造血及造血调控第一节造血器官与造血微环境临床血液学检验技术第四章红细胞检验技术第一节溶血的一般检查目录第一节溶血的一般检验第二节铁代谢检验第三节叶酸、维生素B12测定第四节红细胞膜缺陷检验第五节红细胞酶缺陷的检验第六节免疫溶血性贫血检验第七节血红蛋白异常检验第八节阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关检验第九节卟啉病有关检验重点提示溶血性贫血定义血管内溶血血管外溶血溶血筛查的一般检验项目一、概述溶血性贫血(Hemolyticanemia)是由于各种原因使红细胞破坏过多，超过骨髓的代偿造血能力时所发生的一类贫血。血管外溶血血管内溶血二、溶血的一般检查红细胞寿命测定血浆游离血红蛋白测定血清结合珠蛋白测定血浆高铁血红素白蛋白测定尿含铁血黄素试验（一）红细胞寿命测定【实验原理】红细胞寿命测定（erythrocytelifespandetermination）是将标记放射性核素51Cr红细胞注入血循环后，逐日观察其消失率，记录成活曲线，以其在血循环中消失1/2所需要时间（半衰期T1/2）表示红细胞寿命。【参考区间】正常人红细胞51CrT1/2为25～32天。(核素标记法)二、溶血的一般检查【临床意义】

1.溶血性贫血患者红细胞寿命缩短，约为14天；2.再生障碍性贫血和脾功能亢进患者红细胞寿命缩短，3.真性红细胞增多症，红细胞寿命明显延长；4.缺铁性贫血患者，红细胞寿命多数正常，少数缩短。【应用评价】1.是反映红细胞破坏最直接、最可靠的方法之一；2.因价格高昂、需特殊技术、实验周期长等临床应用受限制。二、溶血的一般检查（二）血浆游离血红蛋白测定血管内溶血游离血红蛋白与Hp结合红细胞溶解，释放出HbHb-Hp复合物被吞噬细胞吞噬过剩的（未结合）Hb从尿液中排出

二、溶血的一般检查【实验原理】色原比色定量法的原理是：血红蛋白中亚铁血红素具有类过氧化物酶活性，在过氧化氢（H2O2）参与下，可催化无色的邻联甲苯胺脱氢而显蓝色，吸收峰在630nm，加入强酸（pH1.5）后呈黄色，吸收峰为435nm。根据颜色深浅，与同时测定的标准血红蛋白液对照，可求出血浆游离血红蛋白（plasmafreehemoglobin）的含量。【参考区间】0～40mg/L。（色原比色定量法）（二）血浆游离血红蛋白测定二、溶血的一般检查【临床意义】

1.血浆游离血红蛋白增高是判断血管内溶血最直接的证据，严重的血管内溶血血浆游离血红蛋白常为60～650mg/L。2.体外循环、心脏手术、血液透析、心脏瓣膜置换术后等所致的溶血，血浆游离血红蛋白可有不同程度增高。3.血管外溶血、红细胞膜缺陷症血浆游离血红蛋白含量一般正常。二、溶血的一般检查【应用评价】1.可有效判断红细胞的破坏程度，是检测有无溶血和判断血管内溶血的常规筛检方法。2.只有当血浆中游离血红蛋白量超过Hp的结合能力时血浆游离血红蛋白含量才增高，因此该试验不如血清结合珠蛋白测定敏感。3.本试验应在溶血后立即取样，取样及分离血浆要避免溶血。二、溶血的一般检查（三）血清结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）测定1.醋酸纤维素膜电泳法【实验原理】在待测血清中加入一定量的血红蛋白液，血清中的Hp即与血红蛋白形成血红蛋白-结合珠蛋白复合物（Hp-Hb复合物）。通过醋酸纤维素膜电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未结合的Hp分开，测定Hp-Hb复合物含量，可得出血清中结合珠蛋白含量。【参考区间】

0.5～1.5gHb/L。（醋酸纤维素膜电泳法）二、溶血的一般检查PAGE电泳Hp条带游离血红蛋白（Hb）

二、溶血的一般检查2.免疫比浊法【实验原理】在待测血清中加入一定量的抗血清Hp抗体，使之与待测血清中的Hp形成抗Hp-Hb免疫复合物，用比浊仪测量其散射光吸光度或透光度的变化，并与标准品进行比较，计算出待测标本中血清Hp的含量。【参考区间】0.16～2.0g/L（免疫比浊法）二、溶血的一般检查【临床意义】1.严重血管内溶血时可见高铁血红素清蛋白区带，为血管内溶血所特有。2.严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性“单个核细胞”增多症等血清Hp也明显减低。3.血清Hp测定还可作为肝细胞性黄疸及阻塞性黄疸的鉴别指标之一，前者血清Hp含量减少，而后者常正常或增高。4.血清Hp在感染、创伤、恶性肿瘤、类固醇治疗、妊娠等情况下可增高，此时Hp正常，不能排除合并溶血的可能。二、溶血的一般检查【应用评价】

1.可反映溶血尤其是血管内溶血的情况，是较敏感指标。2.Hp持续下降常提示溶血过程持续存在，有助于区分血管外和血管内溶血。3.在溶血发生初期，血浆中Hp迅速降低，但数日后可由肝脏合成补充。此时测定Hp降低可不明显。故应注意发病与采血的间隔时间。4.血清Hp正常，不能排除溶血。免疫方法测定时应考虑Hp遗传组型间的差异；电泳法中，不需考虑Hp的组型。二、溶血的一般检查（四）血浆高铁血红素白蛋白测定

【实验原理】血液中清蛋白和血红素结合蛋白（hemopexin，Hx）均能结合血红素。但血红素与Hx的亲和力远高于与清蛋白的亲和力。溶血时，游离血红蛋白先与Hp结合，当Hp耗尽后，血浆中游离血红蛋白可被氧化为高铁血红蛋白，再分解为珠蛋白和高铁血红素，后者与血中Hx结合成复合物运送到肝脏降解。当Hx也消耗完后，高铁血红素与清蛋白结合形成高铁血红素清蛋白，后者与硫化铵形成一个易识别的铵血色原，用光谱仪或分光光度计检测，于绿光区或558nm波长处有一最佳吸收区带。【参考区间】阴性。（分光光度法） 二、溶血的一般检查【临床意义】可用于判断溶血严重程度，阳性提示严重血管内溶血。血管内溶血时，血浆中游离血红蛋白明显增高，可检测出高铁血红素清蛋白。【应用评价】

1.本试验是检测血管内溶血的重要指标，但实验阴性不能排除血管内溶血。2.出血性坏死性胰腺炎患者也可在580nm波长处观察到吸收区带，为假阳性。检测标本应避免外源性溶血。二、溶血的一般检查（五）尿含铁血黄素试验（Rous试验）

【实验原理】血管内溶血时，血中游离血红蛋白增多，可通过肾小球滤过从尿中排出，形成血红蛋白尿。此过程中部分或全部血红蛋白被肾小管上皮细胞吸收分解，以含铁血黄素的形式沉积于细胞内，随细胞脱落从尿中排出。含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体，其中的Fe3+离子在酸性环境下与亚铁氰化钾作用，产生蓝色的亚铁氰化铁沉淀。本试验亦称为普鲁士蓝反应。【参考区间】阴性。二、溶血的一般检查【参考区间】查找上皮细胞内、外有无立体感的、闪光的、分散或成堆的蓝色颗粒。正常人阴性。二、溶血的一般检查【临床意义】1.阳性提示有慢性血管内溶血，尿中有铁排出。临床上常见于PNH，阳性可持续数周。2.溶血初期，虽有血红蛋白尿，但肾小管上皮细胞尚未脱落，或上皮细胞内尚未形成可检出的含铁